囊胚玻璃化冷冻对子代发育行为和生殖能力评价

目的通过观察囊胚玻璃化冷冻对复苏移植后小鼠的生长发育、神经功能、行为学和生殖能力的影响，评估该技术的长期安全性。方法通过促排卵收集性成熟期前C57BL／6雌鼠囊胚，玻璃化冷冻，复苏移植到IGR代孕鼠。仔鼠出生后，观察产仔数和有无外观畸形，记录新生鼠不同时期的生理指标；以正常C57BL／6小鼠为对照，通过转轮、水迷宫和社交试验检测小鼠的运动协调、学习记忆和社交习性；8周龄后检测生殖力。结果囊胚玻璃化冷冻鼠发育指标和行为学各项测试结果与对照小鼠对比差异没有统计学意义；囊胚冷冻雄鼠的生殖力（37．5％）和每胎产仔数[（6．7±2．5）只]与对照组[35．0％，（6．5±1．9）只]差异没有统计学意义。结论囊胚玻璃化冷冻出生的小鼠在生长发育、行为学特征和生殖力等方面和对照鼠无明显差异，表明小鼠囊胚玻璃化冷冻技术是安全和可靠的。

微信公众号在生殖医学教学中的应用

医学是需要理论和实践兼具的学科。传统的医学教育主要是教师在课堂上传授理论知识,学生被动听取的填鸭式教学,这种传输方式为单向的,学生缺少充足的时间和机会去学习教学内容,所以,学生的积极性和主动性相对会比较差,更不容易培养学生的探究能力和意识。生殖医学是一门新兴的学科,发展迅速,但在医学本科教学中没有开设单独的学科,仅在妇产科教材中有少数章节的简单描述。在平时的教学中发现,同学们对生殖医学的兴趣浓厚,但是从现有的学习资料中无法获取更多的知识,不能掌握生殖医学领域的前沿医学知识。文章主要探讨传统生殖医学教育的局限性以及微信公众号在生殖医学教学中的优势及相关问题的思考。

对苯二胺毒性的研究进展

对苯二胺是苯的衍生物,是一种具有急剧毒性的物质,常被用于制造各种染料。众所周知,对苯二胺对机体的不同部位都具有毒性,包括皮肤、肝脏、肾脏、免疫、生殖及其他。然而,对苯二胺是通过何种机制以及对不同部位造成了怎样的损伤尚不明确。炎症反应和氧化应激在对苯二胺的毒性机制中具有重要作用。本文就对苯二胺的毒性研究作一综述,旨在概述对苯二胺对机体各个部位的毒性作用,并阐明其对各部位毒性作用的具体机制,为对苯二胺的毒理学研究提供新的见解。

影响人工授精妊娠率的多因素分析

目的：探讨影响夫精人工授精妊娠率的相关因素。方法：选取2013年3月至2014年9月在南通大学附属医院生殖医学中心行宫腔内人工授精（IUI）治疗的夫妇146对,共277个周期。分析女性年龄、不孕年限、IUI治疗周期数、促排卵方案,扳机方法及扳机日相关指标等与临床妊娠率的关系。结果：年龄〈25岁组的妊娠率明显高于年龄〉30岁组（25.8%vs 11.2%,P〈0.05）;妊娠组的扳机日促黄体生成素（LH）水平高于非孕组[（29.7±8.44）vs（16.6±1.52）,P〈0.05]。子宫内膜分型为A型者的妊娠率显著高于非A型者（P〈0.05）。GnRH-a扳机后排卵率优于HCG（P〈0.05）;4个治疗周期内随着周期数的增加累计妊娠率上升,卵泡期为10-16天妊娠率最高。结论：夫精人工授精治疗中,患者年龄、HCG日LH值、子宫内膜分型与妊娠率相关,GnRH-a扳机后排卵率优于HCG。

精子DNA碎片对IVF-ET胚胎发育和临床结局的影响

目的:探讨精子DNA完整性对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)胚胎发育及临床结局的影响。方法:选择190对不孕症夫妇为研究对象,采用密度梯度洗涤及上游法处理精子,检测处理前后的DNA碎片指数(DFI)。通过受试者工作特征(ROC)曲线,根据DFI预测IVF-ET受精率的阈值将患者分为高DFI组和低DFI组。比较两组精液参数及体外受精/卵胞浆内单精子注射(IVF/ICSI)的助孕情况和妊娠结局。结果:(1)DFI预测IVF受精的AUC为0.559(95%CI 0.501~0.617),最大约登指数对应阈值为25%。患者分为高DFI组[≥25%,59对夫妇(IVF 24对,ICSI 35对)]和低DFI组[<25%,131对夫妇(IVF101对,ICSI 30对)]。经过密度梯度洗涤及上游后精子DFI显著降低(17.9%vs 1.9%,P<0.01)。(2)无论IVF还是ICSI周期,两组前向运动精子比例的差异均有统计学意义[(39.7±17.3)%vs(21.8±19.1)%,P<0.01;(28.5±18.3)%vs(13.6±10.9)%,P<0.01]。在IVF周期中,低DFI组受精率[(84.0±15.9)%]明显高于高DFI组[(76.3±16.4)%],差异有统计学意义(P<0.05),而在ICSI周期中,两组受精率差异无统计学意义[(73.8±19.9)%vs(76.2±20.1)%,P>0.05]。(3)两组的卵裂率、优质胚胎率、囊胚形成率、种植率、临床妊娠率、早期流产率、持续妊娠率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:高DFI患者的精子活力明显降低,密度梯度洗涤及上游后可显著降低精子DFI。高DFI患者可通过ICSI提高受精率,但是DFI对于IVF/ICSI胚胎发育以及临床结局没有预测价值。

精子DNA碎片化指数与复发性流产的关系及其与精液参数的相关性分析

目的:通过分析男性不育患者精子DNA碎片率与精液参数及复发性流产之间的关系,探讨精子DNA碎片化指数(DNA fragmentation index,DFI)对男性不育及不良妊娠结局的影响。方法:选择2015年6月—2016年5月本中心就诊配偶有早期复发性流产史的男性患者65例,原发性不育男性患者97例,正常生育的男性33例(对照组),采用对照研究法对其年龄、精子浓度、精子总活力、精子畸形率、DFI等各项参数进行对比分析,并对原发性不育患者DFI与年龄及各项精液参数进行相关性分析。结果:复发性流产组患者的精子DFI明显高于男性不育组及对照组(P<0.05),精子总活力明显低于男性不育组及对照组(P<0.05),男性不育组的精子畸形率明显高于对照组(P<0.05),在年龄及精子浓度上3组比较差异无统计学意义(P>0.05)。原发性不育患者精子DFI与精子浓度、总活力呈负相关(P<0.05),与年龄、精子畸形率无相关性(P>0.05)。结论:精子DFI是精液参数中一项重要指标,其与精子浓度、精子总活力呈负相关,复发性流产的患者精子DFI明显升高。

长方案IVF取卵后立刻冻胚移植对临床结局的影响

目的:探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗中,长方案取卵后立刻冻胚移植(FET)对临床妊娠率的影响。方法:回顾分析2014年12月至2018年6月在南通大学附属医院生殖医学中心行FET的390个周期,均采用长方案控制性超排卵IVF治疗,因鲜胚移植失败或全胚冷冻而要求FET。按FET时间不同分组:立刻FET组,即取卵后第一次月经来潮开始子宫内膜准备FET;延迟FET组,即取卵后至少等待1个月及以上再行子宫内膜准备FET,比较两组的妊娠结局。结果:390个FET周期中,立刻FET组128个周期,延迟FET组262个周期,两组的胚胎种植率(45.9%vs 43.8%)、生化妊娠率(75.8%vs 69.5%)、临床妊娠率(64.1%vs 59.5%)和持续妊娠率(56.3%vs 54.2%)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:立刻FET与延迟FET的临床妊娠率无差异,没有必要推迟FET时间。

低氧条件下铁调节蛋白1在维持SH-SY5Y细胞铁稳态中的作用

目的：研究低氧条件下铁调节蛋白1（iron regulatory protein 1,IRP1）对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞铁稳态的影响。方法：1%O2处理SH-SY5Y细胞0,1,2,4,6 h,蛋白质印迹法检测铁蛋白轻链（ferritin light chain,Ft-L）以及膜铁输出蛋白（ferroportin,Fpn）的表达;Calcein-AM法检测SH-SY5Y细胞对Fe2＋的吸收以及细胞可变铁池（labile iron pool,LIP）;采用硫氰酸盐分光光度法测定细胞总含铁量;特异性siRNA下调IRP1后检测SH-SY5Y细胞低氧2 h铁稳态的变化。结果：低氧0~6 h,SH-SY5Y细胞Ft-L和Fpn表达增加,Fe2＋摄入和LIP增加,但细胞总铁水平不变。siRNA下调IRP1表达后再低氧2 h,Ft-L蛋白表达和LIP明显增加,Fpn表达和Fe2＋摄入没有明显变化,细胞总铁水平增加。结论：低氧条件下,IRP1是SH-SY5Y细胞铁稳态的重要调节者。

自然周期排卵监测在不明原因不孕诊断及治疗中的应用研究

目的:探讨阴道超声(transvaginal ultrasonography, TVU)卵泡监测对不明原因不孕(unexplained infertility, UI)诊断及指导妊娠的价值。方法:收集421 例UI 患者,通过阴道超声共监测629 个自然周期,分析卵泡生长、成熟卵泡大小、卵子能否排出、性激素指标和子宫内膜厚度等与临床妊娠的关系。结果:患者中20. 2%存在排卵异常,主要有3 种类型:(1)无优势卵泡发育(4.5%);(2)卵泡早排(ovulating with small follicles, OSF)(10.3%);(3)卵泡黄素化不破裂(luteinized unruptured folliclesyndrome, LUF)(5.4%)。异常排卵不同类型中患者的年龄、周期时间、基础性激素水平和促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)峰日子宫内膜厚度无明显差异,但LH 峰日雌二醇水平OSF 组低于正常排卵组;黄体中期孕酮水平OSF 组和LUF 组均低于正常排卵组;临床妊娠率OSF 组仅3.1%,明显低于正常排卵组的14.7%。结论:UI女性正常月经周期存在排卵异常,采用TVU进行卵泡监测有利于UI的诊断和治疗。

精液质量对宫腔内人工授精妊娠结局的影响

目的：研究宫腔内人工授精（IUI）精液质量对IUI妊娠结局的影响。方法：不孕症夫妇151对共进行294个IUI治疗周期，分析精子正常形态率和前向运动精子总数对妊娠率的影响。结果：294周期基础正常形态精子〈4%组与〉4%组比较，妊娠率分别为7.86%和17.1%，差异有统计学意义（P〈0.05）；294周期精液处理后前向运动精子总数〈10×106、～30×106和〉30×106的3组妊娠率分别为16.2%、15.1%和9.3%。前向运动精子总数〉30×106时妊娠率下降，但与其他两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：精子正常形态率和前向运动精子总数影响IUI妊娠率。

虾青素激活PPAR-γ抑制LPS/IFN-γ诱导的C6细胞炎症反应的研究

目的 :研究虾青素(astaxanthin,AST)对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor gamma,PPAR-γ)通路的激活作用及对脂多糖/干扰素-γ(lipopolysaccharide/interferon gamma,LPS/IFN-γ)诱导C6细胞炎症反应的影响。方法:应用Western Blot、实时定量PCR技术检测不同浓度AST对PPAR-γ表达的影响;采用C6细胞炎症刺激模型,通过实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测AST对诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)m RNA表达的影响;利用Western Blot检测AST对i NOS蛋白表达的影响;利用总一氧化氮(nitric oxide,NO)试剂盒检测AST对NO释放的影响;通过PPAR-γ的选择性抑制剂GW9662探讨AST的抗炎作用与PPAR-γ的相关性;采用免疫荧光标记研究AST对核转录因子kappa B(nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB)p65亚基核转位的影响;构建NF-κB质粒,双荧光素酶报告基因法研究AST对NF-κB转录激活的影响。结果:AST以剂量依赖和时间依赖性方式上调C6细胞中PPAR-γm RNA和蛋白水平;AST对LPS/IFN-γ所诱导的C6细胞炎症反应有明显的抑制作用,表现为抑制p65核转位和NF-κB的转录激活,下调i NOS的表达,减少NO的释放,而且这种抑制作用与PPAR-γ相关。结论:AST是一种新的PPAR-γ激动剂,对炎症反应的抑制作用与激活PPAR-γ通路有关。

小鼠卵巢玻璃化冷冻原位移植后子代行为学评估

目的 :建立小鼠卵巢玻璃化冷冻原位移植模型,通过对后代的行为学检测,探讨卵巢玻璃化冷冻的长期安全性。方法:选择8周龄的C57BL/6小鼠,将卵巢取出进行玻璃化冷冻,8周后复苏,同种异体原位移植,接受冷冻卵巢移植的母鼠通过自然交配所生后代作为实验对象进行行为学检测,以正常C57BL/6小鼠为对照。结果:6项经典行为学测试结果显示,卵巢玻璃化冷冻复苏移植后出生的子代小鼠的行为学表现与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:卵巢玻璃化冷冻复苏原位移植可使受体母鼠恢复自然生育能力,其后代在行为学方面未见不良影响,是一种安全的生殖力保存方法。

三维超声在不孕症子宫内膜息肉中的诊断价值

目的:探讨经阴道三维容积超声对不孕症患者子宫内膜息肉的诊断价值。方法:回顾性分析经宫腔镜手术的不孕症患者225例,所有患者术前三维超声扫描提示子宫内膜息肉,将三维超声和宫腔镜检查结果与病理诊断进行比较。结果:三维超声提示子宫内膜息肉225例,病理确诊184例,超声诊断的灵敏度、特异度、符合率、约登指数分别为82.1%、31.7%、72.9%、0.14,宫腔镜诊断的灵敏度、特异度、符合率、约登指数分别为91.8%、19.5%、78.7%、0.11,经阴道三维容积超声和宫腔镜对子宫内膜息肉诊断的符合率分别为72.9%和78.7%,差异无统计学意义(P=0.15)。结论:经阴道三维容积超声和宫腔镜检查均可诊断子宫内膜息肉,超声检查操作简单、无创,可作为首选的检查方法。

DNA碎片指数对体外受精和卵胞浆内单精子注射术胚胎发育的影响

目的:探讨精子DNA碎片指数(DFI)对体外受精(IVF)和卵胞浆内单精子注射术(ICSI)胚胎发育的影响。方法:回顾性分析行IVF治疗的不孕夫妇240对,根据男方精子DFI水平分为正常DFI组(DFI<15%)126对和高DFI组(DFI≥15%)114对。比较两组精液参数、IVF和ICSI周期中受精率、卵裂率、优胚率和囊胚形成率。结果:高DFI组精液中精子活力(37.4±11.2)%,显著低于正常DFI组的(44.9±11.2)%,差异有统计学意义(P<0.01)。Spearman相关分析表明,精子DFI与精子活力呈负相关(r=-0.44,P<0.01)。在IVF周期中,高DFI组IVF受精率为(69.4±19.3)%,显著低于正常DFI组的(93.6±10.6)%,差异有统计学意义(P<0.01)。Spearman相关分析表明,精子DFI与受精率呈显著负相关(r=-0.47,P=0.00)。高DFI组优胚率和卵裂率分别为(43.0±10.2)%和(72.0±21.3)%,低于正常DFI组,但差异无统计学意义(P>0.05)。在ICSI周期中,两组受精率、卵裂率、优胚率和囊胚形成率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:精子DFI与精子活力及受精率呈显著负相关,高DFI患者可选择ICSI,以提高受精率,改善胚胎发育。

RNA-Seq筛选脊髓损伤后的差异基因及部分基因功能分析

目的应用RNA-Seq技术分析脊髓损伤后不同阶段基因表达差异情况。方法使用IH脊髓打击仪制备脊髓损伤模型,SD大鼠48只随机分成两组,假手术组和实验组,实验组分别于损伤后1d、4d和7d取材。运用RNA-Seq技术筛选脊髓损伤后不同时间点的差异表达基因,对差异基因进行表达模式分析,功能注释,通路分析等,筛选出血红素氧化酶1(Hmox1)等感兴趣基因进行mRNA和蛋白水平的验证及功能分析。结果 RNA-Seq结果表明,与假手术组相比,脊髓损伤后1d、4d和7d发生显著变化的基因分别有944、1362和1421个。上述差异基因在损伤后不同时间点的变化趋势大致可分为8种形式。Real-time PCR结果显示,Hmox1、尿激酶型纤溶酶原激活剂(Plau)、纤溶酶原激活物抑制剂(Serpine1)和中性粒细胞胞质因子(Ncf2)的表达变化与RNA-Seq测序结果基本一致。Western blotting结果显示,脊髓损伤后Hmox1的蛋白表达变化趋势与核酸水平一致;免疫组织化学结果显示,损伤之后Hmox1主要表达于脊髓组织的神经元中。结论 RNA-Seq技术能高效分析脊髓损伤后的差异基因,从大量差异基因中筛选出感兴趣基因的验证和功能分析为阐述脊髓损伤的分子机制提供了部分资料。

卵裂期胚胎移植后剩余胚胎囊胚培养的研究

目的 :探讨影响常规体外受精(in vitro fertilization,IVF)与卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)治疗周期中剩余胚胎体外培养囊胚形成潜力的相关因素,为单囊胚移植打下基础。方法 :将IVF/ICSI治疗周期中第3天(D3)卵裂期胚胎移植和冷冻后剩余的优质/非优质胚胎行囊胚培养,观察囊胚形成率。比较患者的年龄、病因、受精方式、D3胚胎质量、卵裂球数和碎片量与囊胚形成率的关系,并比较囊胚形成情况与体外受精临床妊娠率的影响。结果:(1)70个治疗周期中303枚剩余胚胎进行囊胚培养,形成囊胚127枚(41.91%),其中优质囊胚56枚(44.09%);(2)不同年龄、病因、受精方式对囊胚形成率的影响差异均无统计学意义(均P>0.05);(3)D3胚胎碎片>25%、卵裂球数<7个的胚胎囊胚形成率明显降低;(4)剩余胚胎有囊胚形成周期与无囊胚形成周期的临床妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:将移植、冷冻后剩余胚胎进行体外囊胚培养,可以筛选出具有发育潜能的胚胎,提高治疗周期胚胎的利用率。

硫酸脱氢表雄酮对卵巢储备功能减退不孕患者的疗效分析

目的:了解硫酸脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone sulfa te,DHEA)对卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)不孕患者的卵巢功能及妊娠结局的影响。方法 :回顾性分析2014年8月—2016年2月在南通大学附属医院生殖医学中心诊治的DOR不孕患者43例,随机分为DHEA组(24例)和对照组(19例),检测DHEA组患者服用DHEA前后卵巢功能指标的变化,并比较两组患者的妊娠结局。结果:DHEA组患者服用DHEA 3个月后,月经第2或第3天促卵泡生成素由(17.3±6.8)m IU/m L下降为(9.7±3.4)m IU/m L,窦卵泡计数由(4.3±1.6)枚上升至(5.8±1.3)枚,患者的卵巢功能得到显著改善。DHEA组临床妊娠率为37.5%,流产率为11.1%;对照组临床妊娠率为15.8%,流产率为66.7%。结论:DHEA可以提高DOR患者的卵巢功能,提高妊娠率,降低流产率。

无痛取卵对体外受精-胚胎移植患者的疼痛和焦虑及卵子、胚胎质量的影响

目的:探讨无痛取卵减轻体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)患者的疼痛和焦虑及对卵子和胚胎质量的影响。方法:2022年1—7月在南通大学附属医院生殖医学中心行IVF-ET患者154例,分为无痛取卵组(82例)和对照组(72例),分析两组患者焦虑、术中疼痛及卵子、胚胎质量情况。结果:两组患者的年龄、基础促卵泡生成素、窦卵泡数及抗缪勒氏管激素差异有统计学意义(P<0.05)。无痛取卵组术后焦虑自评量表评分和疼痛视觉模拟评分量表评分均低于对照组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示术后疼痛评分是影响焦虑的重要因素(P<0.05)。无痛取卵组患者的获卵率高于对照组(P<0.05),两组的受精率、卵裂率及可移植胚胎率差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:无痛取卵能减轻IVF-ET患者的疼痛和焦虑,并提高获卵率,对受精率、卵裂率及可移植胚胎率均无影响。

卵泡大小对人工授精排卵率及临床妊娠率的影响

目的 :探讨扳机日卵泡大小与夫精宫腔内人工授精排卵率及临床妊娠率的关系。方法 :不孕症患者161例307个治疗周期,根据扳机日卵泡最大平均直径分为:A组9个周期(16.0~16.9 mm),B组59个周期(17.0~17.9 mm),C组103个周期(18.0~18.9 mm),D组82个周期(19.0~19.9 mm),E组32个周期(20.0~20.9 mm),F组17个周期(21.0~21.9 mm),G组5个周期(≥22.0 mm),研究扳机日主导卵泡大小与排卵率及临床妊娠率的相关性。结果:A^G组的排卵率分别为55.6%、71.2%、95.1%、82.9%、87.5%、88.2%、80.0%,C组最高,A组最低,差异有统计学意义(P<0.05及P<0.01),B^F组临床妊娠率分别为16.9%、14.6%、18.3%、12.5%、11.8%,A组及G组无1例妊娠,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在夫精宫腔内人工授精治疗过程中,在卵泡大小为17.0-20.0 mm间行扳机能获得较高的排卵率和临床妊娠率。

卵泡期高效孕激素下超促排卵和CC+Gn方案对卵巢储备功能减退患者IVF治疗结局的比较

目的:探讨卵泡期高效孕激素下超促排卵(progestin-primed ovarian stimulation,PPOS)和克罗米芬(clomiphene,CC)+促性腺激素(gonadotropin,Gn)两种方案在卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserved,DOR)患者中的促排卵效果和全胚冷冻后行冻融胚胎移植(freeze embryo transfer,FET)的临床妊娠结局的差异。方法:回顾性分析2016年1月—2018年12月在南通大学附属医院行体外受精(in vitro fertilization,IVF)助孕的DOR患者244个周期,促排方案为:PPOS组予醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate,MPA)+人绝经期促性腺激素(human menopausal gonadotropin,HMG)/丽申宝83个周期,CC+Gn组161个周期;FET共140个周期,PPOS组51个周期,CC+Gn组89个周期,比较两组的促排卵实验室结局和FET的妊娠结局。结果:PPOS组患者在扳机日的促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平低于CC+Gn组[(3.85±2.59)mIU/mL vs(6.55±5.73)mIU/mL](P<0.05);卵泡期PPOS组第5天(day 5,D5)优质胚胎数显著高于CC+Gn组[(0.56±0.77)个vs(0.3±0.55)个](P<0.05)。全胚冷冻后行复苏移植,两组间临床妊娠率、胚胎种植率及分娩率差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:对于DOR患者,PPOS方案较CC+Gn方案扳机日LH值明显降低,D5优质胚胎数明显增加,可为患者提供更多的胚胎移植机会。PPOS方案可作为DOR患者行IVF辅助生殖技术时促排卵方案的一种选择。