氢化可的松对人NK细胞增殖及其对胰腺癌SWl990细胞杀伤效率的影响

目的探讨氢化可的松对人外周血NK细胞增殖及其对胰腺癌SW1990细胞杀伤力的影响。方法分离健康人外周血单个核细胞加入到含IL-15细胞因子的NK细胞培养基中诱导培养NK细胞。当NK细胞纯度达到70％以上时，加入10^-6、10^-5、10^-4、10^-3μmoL／L氢化可的松继续培养7d。以未加氢化可的松的NK细胞作为对照组。采用锥虫蓝染色计数细胞；采用流式细胞术检测CD3-CD56＋NK细胞含量及其穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ的表达；以20：1的效靶比将NK细胞与SWl990细胞共培养，用细胞增殖-毒性检验法（CCK-8）检测NK细胞对SW1990细胞的杀伤效应。结果用氢化可的松处理7d后NK细胞量平均达到70．72％-76．39％，与对照组的（72．61±3．76）％差异无统计学意义；10^-6、10^-5、10^-4、10^-3μmol／L氢化可的松处理组NK细胞的增殖倍数分别为（9．13±0．94）、（9．67±1．51）、（10．33±1．07）、（8．40±1．47）倍，均显著高于对照组的（4．23±0．82）倍（P值均〈0．01）；NK细胞对SWl990细胞的杀伤效率分别为（58．58±4．89）％、（62．27±5．63）％、（64．02±5．79）％、（63．88±3．61）％，均较对照组的（57．46±5．11）％增强，其中10^-4μmol／L组的差异具有统计学意义（P〈0．05）；10^-4、10^-3μmol/L氢化可的松处理组NK细胞穿孔素表达分别为（96．71±3．04）％、（97．56±2．18）％，显著高于对照组的（92．40±3．53）％（P〈0．05或0．01）；10^-5μmol／L氢化可的松处理组NK细胞的颗粒酶B表达为（78．23±2．94）％，显著高于对照组（73．68±3．52）％（P〈0．05）；10^-5、10^-4、10^-3μmol／L氢化可的松处理组NK细胞IFN-γ表达分别为（96．61±2．04）％、（97．58±2．17）％、（98．00±1．77）％，均显著高于对照组的（92．44±2．74）％（P值均〈0．01）。结论氢化可的松可促进IL-15活化的NK细胞增殖，适当浓度条件下增强对SWl990细胞杀伤活性，其机制可能与其穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ表达上调有关。

金丝桃苷对NK细胞杀伤人胰腺癌PANC1细胞的增强效应

目的观察金丝桃苷对人NK细胞体外增殖及杀伤胰腺癌PANC1细胞活性的影响，探讨其可能机制。方法分离健康人外周血单个核细胞（PBMCs），应用含IL-2的NK细胞培养液加不同浓度（0.3、1.6、8、40、200 μg/ml）的金丝桃苷溶液诱导PBMCs 12 d，以不加金丝桃苷作为对照组。采用台盼蓝染色观察细胞存活数；流式细胞术检测NK细胞表型及其穿孔素、颗粒酶B的表达，计算NK细胞增殖倍数；乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测NK细胞杀伤活性。结果金丝桃苷各浓度组和对照组NK细胞含量均达到80%左右；NK细胞表型为CD3－CD56＋，0.3、1.6、8 μg/ml金丝桃苷组NK细胞增殖倍数分别为（93.76±8.77）、（106.67±12.35）、（118.50±11.51）倍，显著高于对照组的（73.70±9.43）倍；1.6、8、40 μg/ml金丝桃苷组NK细胞穿孔素水平显著高于对照组[ （82.34±2.90）%、（89.15±3.54）%、（81.78±2.81）%比（72.93±2.06）% ]；1.6、8 μg/ml金丝桃苷组NK细胞颗粒酶B水平显著高于对照组[（87.30±1.70）%、（92.16±3.05）%比（82.35±2.73）% ]；1.6、8 μg/ml金丝桃苷组对PANC1细胞的杀伤活性显著高于对照组[（63.18±3.77）%、（65.34±4.97）%比（52.16±5.48）%]，差异均有统计学意义（P值均〈0.05）。结论金丝桃苷在一定浓度范围内可促进NK细胞增殖，并可能通过上调穿孔素和颗粒酶B的表达增强NK细胞对胰腺癌PANC1细胞的杀伤活性。