基质金属蛋白酶7在肝癌细胞迁移及免疫细胞浸润中的作用与预后价值

目的评估基质金属蛋白酶7(MMP7)在肝癌细胞迁移及免疫细胞浸润中的作用及预后价值。方法分别构建下调或上调靶基因MMP7的MMP7_siRNA、pMMP7转染肝癌细胞株(MHCC97H)。采用RT-qPCR、Western Blot分别检测细胞中靶基因mRNA及蛋白的表达水平。扫描电镜和Transwell小室实验分别观察细胞伪足和迁移能力的变化,并采用生物信息学的方法,在TCGA、TIMER数据库分析MMP7与免疫细胞及肝癌患者免疫浸润评分之间的相关性,并进一步研究MMP7与肝癌患者预后的相关性。相关性分析采用Spearman方法。Sanger Box在线工具评估MMP7在肝癌总体生存期、疾病特异性生存期方面的意义。Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Log-rank检验评估不同组样本之间的预后差异。结果构建的MMP7_siRNA、pMMP7转染MHCC97H细胞后均能有效下调或上调靶基因MMP7的表达,在MHCC97H细胞中MMP7被干扰后细胞伪足明显减少,并且变短,但是过表达MMP7之后细胞表面丝状伪足数量明显增多,并且伪足长度变长,放射状排列。Transwell小室结果发现,MMP7_siRNA2能够显著降低细胞迁移能力(P<0.05),而转染pMMP7后,细胞迁移能力显著增加(P<0.05)。MMP7的表达与B淋巴细胞(r=0.37)、CD4+T淋巴细胞(r=0.40)、中性粒细胞(r=0.49)、巨噬细胞(r=0.49)、树突状细胞(r=0.47)显著相关(P值均<0.05)。在TCGA数据库中,基于总体生存期最佳截断值将肝癌患者分成MMP7高表达组(n=267)和MMP7低表达组(n=146),结果发现,MMP7高表达组的总体生存期明显低于MMP7低表达组(P<0.05);基于疾病特异性生存期最佳截断值将肝癌患者分成MMP7高表达组(n=257)和MMP7低表达组(n=145),结果发现,MMP7高表达组的疾病特异性生存期也低于MMP7低表达组(P<0.05)。结论MMP7促进了肝癌细胞的迁移,并在免疫细胞浸润中发挥主要作用,MMP7的表达也与肝癌的预后具有明显相关性。

以壳聚糖和明胶为复合生物墨水3D打印的脊髓仿生支架及其生物相容性研究

目的:探究3D打印脊髓仿生支架的复合生物墨水配方及生物相容性和可靠性评估。方法:利用3D打印技术,以壳聚糖(chitosan,C)和明胶(gelatin,G)为基础复合生物墨水,比较不同配比复合生物墨水的理化性能:孔隙率、溶胀率、流变性能、降解速率、力学性能分析。通过优化打印参数,打印出特定空间构型的脊髓外形仿生支架。接着运用仿生支架材料浸提液与SH-SY5Y细胞共培养方法,通过扫描电子显微镜和CCK-8实验评估该支架材料的细胞毒性及其对细胞增殖能力的影响。结果:通过比较最终选择4%浓度的C和6%浓度G(4C6G)组为最适的复合生物墨水配方并进行后续的研究。在打印速度1.5 mm/s、压强0.09~0.11 MPa、层厚0.1 mm、间距1 mm、针头0.11 mm的参数下,可以实现打印出5 mm×5 mm×0.9 mm尺寸的蝴蝶形状高保真度的脊髓仿生支架。扫描电子显微镜可见SH-SY5Y细胞黏附在支架内部,并且能正常生长;CCK-8结果显示,浸提液无细胞毒性。结论:以C和G为复合生物墨水有望成为脊髓损伤修复仿生支架的原材料。

胃神经鞘瘤11例临床病理分析

目的:探讨胃神经鞘瘤的临床特征,免疫组化特征,病理诊断及间叶性肿瘤鉴别诊断,治疗方法及预后。方法:收集11例经手术确诊胃神经鞘瘤的临床资料,并行S-100、Vim、CD34、CD117、SMA和Des检测。光镜观察,结合文献进行回顾性分析。结果:所有11病例胃镜检查均考虑胃肠道间质瘤可能性大,术前诊断都不确定,经手术获取标本,术后经病理免疫组化进一步确诊。患者女性7例、男性4例,年龄49-61岁,中位年龄52岁,3例位于胃窦,一例为远端胃大弯侧浆膜面,6例位于胃体。巨检:肿瘤直径1-6cm,平均3.5cm,均无明显包膜,切面均实性。结论胃神经鞘瘤是一类发生于胃肠道的间叶性肿瘤大多为良性,预后良好,很少有恶变及复发,影像学检查及胃镜检查缺乏特异性,诊断主要依据病理检查,镜下形态主要由梭形细胞组成,呈小束状,多排列编织状结构,小束的两端及瘤细胞之间有粗细不等的胶原纤维,间质内均见少数弥漫淋巴细胞、浆细胞浸润,肿瘤周边可见淋巴细胞,+反应带。免疫组化:vimetmin和S-100强(+),3例CD34少数瘤细胞灶状(+)。结论:胃神经鞘瘤与发生于软组织部位的临床、巨检、及形态学有不同之处,镜下很难与胃肠道间质瘤、平滑肌肿瘤相鉴别,诊断主要借助免疫组化检测。手术切除是主要的治疗方式,术后注意随访。

食管鳞癌中存活素的表达及临床病理学意义

目的:探讨食管鳞癌存活素(Survivin)的表达与临床病理因素的相关性。方法:应用免疫组化法检测80例食管鳞癌中Survivin的表达。结果:80例食管鳞癌Survivin阳性率为65.0%,Survivin的表达与淋巴结转移、TNM分期呈正相关(P<0.05),还与癌组织分化程度有关(P<0.05)。结论:Survivin在食管鳞癌中高表达,与淋巴结转移密切相关。

肿瘤相关成纤维细胞在乳腺浸润性导管癌中的临床意义

目的 :探讨乳腺浸润性导管癌中肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)的临床意义。方法:选取乳腺癌改良根治手术标本102例,采用免疫组织化学方法检测浸润性导管癌组织及癌旁组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达,分析与临床病理参数的相关性及预后意义。结果:在乳腺浸润性导管癌组织中α-SMA阳性细胞率47.06%,而癌旁正常乳腺组织中无阳性细胞,差异有统计学意义(P=0.000)。癌组织中α-SMA表达与肿瘤直径、淋巴结转移及TNM分期显著相关(P<0.01)。单因素Log-Rank检验显示组织学分级、淋巴结转移、TNM分期、ER表达与预后相关(P<0.01)。多因素Cox回归分析显示组织学分级、淋巴结转移、TNM分期均具有独立预后意义(P<0.05)。结论:浸润性导管癌组织中CAFs增多促进肿瘤的发生发展及侵袭转移,有望成为乳腺癌免疫治疗的新靶点。

肾周及肾窦黏液性假瘤临床病理学特征分析

目的探讨肾周及肾窦黏液性假瘤的临床病理学特征、诊断及鉴别诊断。方法收集南京医科大学第一附属医院诊断的分别发生在肾周及肾窦的黏液性假瘤2例患者的临床病理资料,光镜下观察HE切片及免疫组织化学染色结果,应用荧光原位杂交(FISH)法检查MDM2基因扩增情况,并复习相关文献进行分析。结果男女各1例,年龄分别为49岁和69岁,病变部位分别位于肾周及肾窦内。镜下观察:肿瘤由成熟脂肪、黏液样基质、梭形或星芒状纤维母细胞及间质炎性细胞混合组成,间质炎性细胞主要为淋巴细胞和浆细胞,可见淋巴滤泡形成。肿瘤细胞形态温和,染色质细腻,缺乏核分裂象及坏死。免疫组织化学:肿瘤细胞表达平滑肌肌动蛋白和CD34,不表达S-100蛋白、SOX10、STAT6、广谱细胞角蛋白(CKpan)、上皮细胞膜抗原、PAX8、MUC4、结蛋白及间变性淋巴瘤激酶(ALKp80),Ki-67阳性指数约为5%。FISH法检测显示肿瘤细胞MDM2基因无扩增。2例患者术后随访均未复发。结论肾周及肾窦黏液性假瘤是一种少见病变,可伴有肾脏基础性疾病,认识到此病变的意义在于避免误诊,特别容易误诊为脂肪肉瘤。

孕期血糖管理对妊娠期糖尿病胎盘超微结构的影响

目的探讨孕期血糖管理对妊娠期糖尿病胎盘超微结构的影响,为优化孕期管理提供科学佐证。方法将2013年1月至2014年12月于南通市第一人民医院常规产检至分娩的妊娠期糖尿病孕妇,根据血糖控制情况分为血糖控制满意组及血糖控制不满意组;同期产检的正常孕妇为对照组。检测3组孕妇的血糖水平并采用透射电镜观察相应的胎盘超微结构。结果 (1)经整个孕期的管理及追踪,最终共有57例孕妇纳入研究。妊娠期糖尿病孕妇占56.14%(32/57),其中血糖控制满意组占35.09%(20/57),血糖控制不满意组占21.05%(12/57);对照组孕妇占43.86%(25/57)。(2)3组孕妇的年龄、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)检查时孕周、分娩时孕周、血压及体质量指数差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)经孕期血糖管理,3组孕妇的空腹血糖差异无统计学意义(P=0.099);血糖控制满意组与对照组的餐后2h血糖、夜间血糖及糖化血红蛋白差异均无统计学意义(P>0.05);血糖控制不满意组的餐后2h血糖、夜间血糖及糖化血红蛋白均高于血糖控制满意组及对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。(4)血糖控制满意组与对照组的胎盘超微结构有改变者所占比例差异无统计学意义(P>0.05),血糖控制不满意组的胎盘超微结构有改变者所占比例与血糖控制满意组、对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论高血糖是胎盘超微结构改变的危险因素,孕期需加强血糖管理,减少或避免妊娠期糖尿病孕妇胎盘超微结构的改变,减少不良妊娠结局的发生。

骨桥蛋白、survivin及bcl-2在宫颈病变中的表达及临床意义

目的研究骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、survivin及bcl-2在宫颈病变中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法,检测74例宫颈癌、20例高级别上皮内瘤变、20例低级别上皮内瘤变以及24例慢性宫颈炎组织中OPN、survivin、bcl-2的表达。结果 OPN、survivin、bcl-2在四组中阳性率的表达差异均有统计学意义(P<0.01)。组间分析显示宫颈癌、高级别上皮内瘤变、低级别上皮内瘤变与慢性宫颈炎相比,三者阳性率的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。低级别上皮内瘤变与宫颈癌之间差异有统计学意义(P<0.05),而高级别上皮内瘤变与宫颈癌之间差异无统计学意义(P>0.05)。OPN的表达与sur-vivin、bcl-2的表达呈正相关(P<0.01)。OPN、survivin的表达与宫颈癌组织学分级、FIGO分期和淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。结论 OPN在宫颈癌中高表达,提示OPN与宫颈癌的发生、发展密切相关。宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中OPN的表达与survivin、bcl-2的表达密切相关。

食管鳞癌中CD105标记的微血管密度、cyclinD1的表达及其预后因素分析

目的探讨食管鳞癌中CD105的表达及其标记的微血管密度(microvessel density,MVD)和cyclinD1表达与食管鳞癌临床病理因素和预后的相关性。方法应用免疫组化SP法检测80例食管鳞癌中CD105和cyclinD1的表达,并对CD105标记的MVD进行图像分析记数。结果 80例食管鳞癌、10例正常食管组织CD105标记的MVD均数分别为36.363±8.227、9.900±2.331,食管鳞癌组明显高于正常食管组(P<0.01)。80例食管鳞癌中cyclinD1阳性率为61.25%。CD105标记的MVD值和cyclinD1表达阳性率与淋巴结转移、TNM分期均呈正相关(P<0.01)。单因素(Logrank)检验结显示食管鳞癌CD105标记的MVD和cyclinD1是影响其预后的因素(P<0.05)。多因素(Cox比例风险模型)生存分析显示食管鳞癌CD105标记的MVD和cyclinD1是独立的预后因素(P<0.05)。结论 CD105和cyclinD1在食管鳞癌中高表达。单、多因素分析显示CD105标记的MVD和cyclinD1是影响预后的主要因素,且有独立的预后意义。

D2-40和生存素在宫颈癌中的表达及与预后的相关性

目的研究D2-40和生存素(survivin)在宫颈癌中的表达及与预后的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测97例宫颈癌中D2-40、survivin的表达,对D2-40标记的LVD进行图像分析。对有随访结果的56例作单、多因素相关生存分析。研究设宫颈上皮内瘤变、慢性炎作为对照组。结果 D2-40标记的LVD值及survivin表达在三组中差异均有统计学意义(P<0.01)。D2-40、survivin在宫颈癌中的表达与浸润深度、组织学类型、FIGO分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.01)。D2-40的表达与sur-vivin蛋白的表达呈正相关(P<0.01)。在随访的56例中,单因素分析显示:宫颈癌中D2-40标记的LVD、survivin表达、浸润深度、组织学类型、FIGO分期及淋巴结转移均与患者生存率有关,多因素Cox比例风险分析显示除浸润深度外均具有独立的预后意义。结论 D2-40在宫颈癌组织中高表达,提示D2-40与宫颈癌的发生、发展及转移密切相关。D2-40的表达与宫颈癌组织中survivin蛋白的表达密切相关。两者均是影响宫颈癌预后的因素,并有独立的预后意义。

Kif2a和淋巴结转移密度对乳腺癌的预后价值研究

目的探讨驱动蛋白家族成员2a(Kif2a)和淋巴结转移密度(ND)对乳腺癌的临床病理学意义及预后评估。方法采用免疫组织化学法检测116例乳腺癌组织中Kif2a蛋白的表达,按ND分为ND=0组、ND≤40%组和ND>40%组,分析Kif2a蛋白的表达、ND与乳腺癌患者的临床病理因素(年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型、TNM分期)、内分泌表型(雌激素受体、孕激素受体)、HER-2及预后的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线分析,评价Kif2a蛋白表达、ND与乳腺癌患者的预后。结果乳腺癌组织中Kif2a蛋白的表达、ND均与患者TNM分期及HER-2的阳性表达呈正相关(rs=0.251、0.489、0.536和0.245,P=0.007、0.000、0.000和0.008),与其他临床病理因素无关(P>0.05)。Kif2a的表达与ND呈正相关(rs=0.484,P=0.000)。生存曲线分析结果显示,Kif2a蛋白表达越强、ND越高,无瘤生存时间越短(P<0.05)。结论驱动蛋白Kif2a、ND可能是乳腺癌患者预后的独立因素,其对判断乳腺癌患者的预后具有一定价值。

妊娠高血压综合征孕妇胎盘组织中血红素氧合酶-1缺氧诱导因子-1α的表达及临床意义

妊娠期高血压综合征（简称：妊高征）是妊娠期特有疾病,发病后主要出现血压升高、小腿以下凹陷性水肿、腹腔积液等症状,孕产妇严重时造成全身水肿、胸腹腔积液等。在孕妇妊娠期间,滋养细胞会对子宫内膜进行浸入,但如果滋养细胞浸入过浅,或出现子宫螺旋动脉重塑障碍,此时孕妇即会出现妊高征,上述症状也成为妊高征孕产妇胎盘的病理特点,出现滋养细胞浸入过浅的原因,与孕产妇滋养细胞浸润能力下降有关。

驱动蛋白Kif2a在乳腺癌组织芯片中的表达及临床意义

目的:研究乳腺癌组织芯片中驱动蛋白Kif2a的表达及临床意义。方法:采用组织芯片技术及免疫组织化学方法检测102例乳腺癌及癌旁组织中Kif2a的表达。对有随访结果的62例作单因素、多因素相关生存分析。结果:乳腺癌组织与癌旁组织中Kif2a的表达比较差异有统计学意义。Kif2a在乳腺癌中的表达与淋巴结转移、HER2表达呈正相关(P<0.05)。在随访的62例中,单因素分析显示:乳腺癌中Kif2a表达、淋巴结转移、HER2表达均与患者生存率有关,多因素Cox比例风险分析显示均具有独立的预后意义。结论:Kif2a在乳腺癌组织中的表达与淋巴结转移、HER2表达呈正相关(P<0.05)。Kif2a表达水平的检测对乳腺癌的预后判断具有重要意义。

叉头框蛋白J2在非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达及临床意义

目的探讨叉头框蛋白J2（forkhead box J2，Foxj2）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者癌组织中的表达及其临床意义。方法收集50例 NSCLC患者手术切除肺癌组织标本，用免疫印迹法（western blot）和免疫组化法检测 Foxj2在癌组织和癌旁组织中的表达。结果 western blot显示 Foxj2在癌旁组织中的表达高于癌组织，两组间差异具有统计学意义（P＜0.05）；免疫组化结果表明 Foxj2在癌旁组织中的阳性细胞数明显高于癌组织，且无淋巴结转移组 Foxj2的表达强度高于有淋巴结转移组，两组间差异具有统计学意义（P＜0.01）。结论 Foxj2参与 NSCLC的发生发展过程，并且可能与 NSCLC淋巴结转移有关。

三种获取方法对脂肪细胞损伤程度的比较

目的:比较3种获取脂肪方法对脂肪细胞损伤的影响程度,选择理想的获取脂肪的方法,以提高脂肪颗粒注射移植效果。方法:实验于2003-03/2004-12在南通大学附属南通第三医院整形烧伤外科和南通市第一人民医院整形烧伤科、病理科进行。①用亚甲蓝于脐下缘标记一长约1cm的弧形切口,在下腹部局部脂肪堆积隆起明显处标记出吸脂范围、并设计左上、左下、右上、右下4个相邻区域。标记后碘酊固定。分别采用切取脂肪剪碎法、注射器法和电动式脂肪抽吸法获取脂肪颗粒。②手术切取脂肪剪碎法:沿弧形切口切开皮肤,适当分离,在切口处用新的手术刀片切取一块约1cm×1cm×0.6cm大小的脂肪组织,用整形专用剪刀(锋利)剪碎成直径3.0～4.0mm大小的脂肪颗粒。③注射器抽吸脂肪颗粒法:在左上、右下两个区域,常规用接有20mL脂肪移植用的专用吸脂针,抽活塞至注射器20mL处,用卡簧固定,抽吸针在皮下往返抽动,抽取脂肪约20mL,尽量在同一部位由深至浅循序一次性抽足所需脂肪量,皮下保留0.5cm厚度的脂肪,已经抽吸的部位压迫止血。④电动脂肪抽吸法:在左下、右上两个区域,用电动脂肪特制抽吸管置入待抽吸区域皮下脂肪组织内,调节负压为-75kPa,防止漏气以保持相对稳定的负压,往返抽动抽吸管12次,抽吸脂肪约30mL。所得脂肪颗粒的纯化,分别用生理盐水冲洗、4层纱布吸附过滤,去除其中的血液、肿胀麻醉液、脂质、细胞碎片等。所获标本做成石蜡切片,van-giesn染色,镜下观察脂肪细胞的损伤程度。结果:切取脂肪剪碎法、注射器法获取脂肪,对脂肪细胞的损伤率(均值)比较,差异无显著性意义犤(12.3±1.6)%,(16.6±2.5)%犦,均显著低于电动式脂肪抽吸法犤(52.8±6.8)%,P<0.05犦。结论:3种获取脂肪的方法对脂肪细胞损伤的程度不同,注射器法和切取脂肪剪碎法对脂肪细胞损伤的程度相似,均比电动式脂肪抽吸法轻。

紧密连接蛋白Claudin-4在子宫内膜异位症组织中的表达

目的 探讨紧密连接蛋白Claudin-4在子宫内膜异位症（内异症）在位、异位内膜与正常内膜中的表达,及其在内异症发病中的作用。方法采用RT-PCR的方法检测35例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的在位、异位内膜组织中紧密连接蛋白Claudin-4 mRNA的表达,并与30例正常对照子宫内膜比较。结果 ①Claudin-4 mRNA在在位、异位及对照组织中表达量分别为12.38±6.12,4.59±1.35和13.05±6.48。异位内膜组织中Claudin-4 mRNA的表达量低于在位和对照组内膜组织,差异有统计学意义（P〈0.01）。在位与对照内膜组织比较,Claudin-4mRNA的表达量差异无统计学意义（P〉0.05）。②在异位内膜组织中,Ⅰ,Ⅱ期患者的Claudin-4 mRNA的表达量（6.74±1.92）较Ⅲ,Ⅳ期患者（3.82±1.01）明显升高,差异也有统计学意义（P〈0.01）。③在位与对照内膜组织中,增生期Claudin-4 mRNA的表达量（14.01±7.02）较分泌期（11.14±5.48）明显升高,差异也有统计学意义（P〈0.05）; 异位组内膜组织中,增生期与分泌期Claudin-4 mRNA的表达量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 Claudin-4在异位内膜中低表达可能与子宫内膜异位症的发生发展有关。

大肠癌中NET-1与PCNA的表达及其临床意义

目的探讨NET-1基因蛋白及PCNA在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理因素的关系。方法对88例大肠癌手术切除标本行常规病理检查及采用免疫组化检测大肠癌中NET-1基因蛋白与PCNA表达。结果NET-1的表达与癌分化程度、Dukes分期,淋巴结是否转移以及肿瘤组织内坏死及癌间质中炎症反应有关。脉管中转移癌栓及神经侵犯的癌细胞NET-1基因蛋白多呈强阳性表达。PCNA表达与肿瘤的分化、Dukes分期及淋巴结转移情况均有显著相关性。结论NET-1和PCNA表达有协同作用,促进癌细胞分裂增殖。

BMP4、HIF-1α在上皮性卵巢癌中的相关性研究

目的:检测上皮性卵巢肿瘤组织中及体外不同缺氧浓度下卵巢癌细胞株SKOV-3细胞中骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein4, BMP4)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)的表达,分析探讨BMP4、HIF-1α在上皮性卵巢癌转移、侵袭中的作用及与卵巢上皮癌预后的关系。方法:回顾性分析2014年1月-2017年12月在南通市第一人民医院诊治且资料完整的卵巢癌患者82例。采用免疫组织化学方法检测卵巢肿瘤组织BMP4、HIF-1α的表达。利用二氯化钴(CoCl2)构建缺氧模型,按实验要求培养SKOV-3细胞,置于0、50、100、150、200μmol/L含CoCl2的DMEM培养基中培养。其中将用0μmol/L CoCl2培养基的细胞设为常氧对照组,其余均为缺氧组。培养8 h,提取蛋白,用Western Blot检测,定量分析不同缺氧浓度下卵巢癌细胞株SKOV-3中BMP4、HIF-1α的表达情况。结果:BMP4、HIF-1α在正常卵巢中不表达,其阳性表达率随卵巢肿瘤恶性程度、临床分期、病理分级升高依次递增。体外不同缺氧状态下,随着CoCl2浓度的增高,卵巢癌细胞株SKOV-3中HIF-1α、BMP4的蛋白水平表达均逐渐增强(均P<0.05)。结论:BMP4、HIF-1α的表达与卵巢肿瘤发生发展、浸润转移密切相关,缺氧微环境可促进上皮性卵巢癌侵袭和转移。