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人源抗菌肽LL-37表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达
被引量:
4
1
作者
陆建荣
王惠民
+4 位作者
吴萍
黄松平
常秋月
凌勇武
倪晓蓉
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第8期833-837,共5页
目的:构建人源抗菌肽LL-37的表达载体pPIC9-LL-37,将其转化毕赤酵母GS115,诱导LL-37表达。方法:根据抗菌肽LL-37氨基酸序列及毕赤酵母偏爱密码子,应用互补延伸PCR技术扩增抗菌肽LL-37基因,定向克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9上,转化E.coli...
目的:构建人源抗菌肽LL-37的表达载体pPIC9-LL-37,将其转化毕赤酵母GS115,诱导LL-37表达。方法:根据抗菌肽LL-37氨基酸序列及毕赤酵母偏爱密码子,应用互补延伸PCR技术扩增抗菌肽LL-37基因,定向克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9上,转化E.coli DH5a.构建重组分泌型酵母表达载体pPIC9-LL-37.PCR鉴定并测序;原生质球法转化毕赤酵母GS115.PCR扩增鉴定:甲醇诱导LL-37表达,筛选最高表达株.检测表达产物对大肠杆菌的抑菌活性,并对其进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印迹分析。结果:pPIC9-LL-37载体构建成功:转化毕赤酵母后PCR鉴定出LL-37基因:0.5%甲醇能诱导LL-37高表达,筛选出最高表达株,发酵上清约含LL-37 0.5μg/ml,对E.coli具有较强的抑菌活性,电泳及Western印迹分析证实表达产物为LL-37。结论:成功构建pPIC9-LL-37载体.转化毕赤酵母后.经甲醇诱导能高表达分泌LL-37,表达的LL-37蛋白具有较强的抑菌活性。
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关键词
LL-37
毕赤酵母
遗传载体
基因表达
下载PDF
职称材料
5′-非转录区序列改建提高毕赤酵母表达抗菌肽LL-37
被引量:
2
2
作者
陆建荣
王惠民
+4 位作者
吴萍
黄松平
常秋月
凌勇武
倪晓蓉
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第12期1329-1334,共6页
目的:探讨5′-非转录区(5′-UTR)序列改建对毕赤酵母表达外源蛋白LL-37的影响。方法:去除毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9 5′-UTR内GGATCCAA序列,转化E.coli DH5α,构建改良的毕赤酵母分泌表达载体pPIC9-EDIT;PCR鉴定及测序确认后与酵母偏...
目的:探讨5′-非转录区(5′-UTR)序列改建对毕赤酵母表达外源蛋白LL-37的影响。方法:去除毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9 5′-UTR内GGATCCAA序列,转化E.coli DH5α,构建改良的毕赤酵母分泌表达载体pPIC9-EDIT;PCR鉴定及测序确认后与酵母偏爱密码子编码的LL-37基因片段连接,构建改良的重组表达载体pPIC9-EDIT-LL-37;原生质球法转化毕赤酵母GS115,PCR扩增鉴定后诱导LL-37表达,筛选最佳表达条件,对表达产物进行凝胶电泳和Western印迹分析;比较转入pPIC9-EDIT-LL-37及pPIC9-LL-37后毕赤酵母表达产物的抑菌活性,间接测定改建前后LL-37蛋白表达量的变化。结果:PCR鉴定及测序证实pPIC9-EDIT改建成功,成功构建重组载体pPIC9-EDIT-LL-37;转化毕赤酵母后表达产物PCR鉴定出LL-37基因,最佳诱导甲醇浓度为0.5%,最佳诱导表达时间为72h,电泳及Western印迹分析证实表达产物为LL-37;改建后LL-37蛋白表达量提高了约35倍。结论:pPIC9 5′-UTR序列的改建能明显提高毕赤酵母表达LL-37蛋白,值得进一步研究以应用于其他外源蛋白表达。
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关键词
抗菌肽LL-37
毕赤酵母
5'-非转录区
下载PDF
职称材料
题名
人源抗菌肽LL-37表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达
被引量:
4
1
作者
陆建荣
王惠民
吴萍
黄松平
常秋月
凌勇武
倪晓蓉
机构
南通市第三人民医院感染病实验室
南通
大学附属
医院
检验科
南通市
中心血站
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第8期833-837,共5页
基金
江苏省南通市科学技术委员会资助项目(No.S40032)~~
文摘
目的:构建人源抗菌肽LL-37的表达载体pPIC9-LL-37,将其转化毕赤酵母GS115,诱导LL-37表达。方法:根据抗菌肽LL-37氨基酸序列及毕赤酵母偏爱密码子,应用互补延伸PCR技术扩增抗菌肽LL-37基因,定向克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9上,转化E.coli DH5a.构建重组分泌型酵母表达载体pPIC9-LL-37.PCR鉴定并测序;原生质球法转化毕赤酵母GS115.PCR扩增鉴定:甲醇诱导LL-37表达,筛选最高表达株.检测表达产物对大肠杆菌的抑菌活性,并对其进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印迹分析。结果:pPIC9-LL-37载体构建成功:转化毕赤酵母后PCR鉴定出LL-37基因:0.5%甲醇能诱导LL-37高表达,筛选出最高表达株,发酵上清约含LL-37 0.5μg/ml,对E.coli具有较强的抑菌活性,电泳及Western印迹分析证实表达产物为LL-37。结论:成功构建pPIC9-LL-37载体.转化毕赤酵母后.经甲醇诱导能高表达分泌LL-37,表达的LL-37蛋白具有较强的抑菌活性。
关键词
LL-37
毕赤酵母
遗传载体
基因表达
Keywords
LL-37
Pichia
genetic vectors
gene expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
5′-非转录区序列改建提高毕赤酵母表达抗菌肽LL-37
被引量:
2
2
作者
陆建荣
王惠民
吴萍
黄松平
常秋月
凌勇武
倪晓蓉
机构
南通市第三人民医院感染病实验室
南通
大学附属
医院
检验科
南通市
中心血站
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第12期1329-1334,共6页
基金
江苏省南通市科学技术委员会资助项目(S40032)~~
文摘
目的:探讨5′-非转录区(5′-UTR)序列改建对毕赤酵母表达外源蛋白LL-37的影响。方法:去除毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9 5′-UTR内GGATCCAA序列,转化E.coli DH5α,构建改良的毕赤酵母分泌表达载体pPIC9-EDIT;PCR鉴定及测序确认后与酵母偏爱密码子编码的LL-37基因片段连接,构建改良的重组表达载体pPIC9-EDIT-LL-37;原生质球法转化毕赤酵母GS115,PCR扩增鉴定后诱导LL-37表达,筛选最佳表达条件,对表达产物进行凝胶电泳和Western印迹分析;比较转入pPIC9-EDIT-LL-37及pPIC9-LL-37后毕赤酵母表达产物的抑菌活性,间接测定改建前后LL-37蛋白表达量的变化。结果:PCR鉴定及测序证实pPIC9-EDIT改建成功,成功构建重组载体pPIC9-EDIT-LL-37;转化毕赤酵母后表达产物PCR鉴定出LL-37基因,最佳诱导甲醇浓度为0.5%,最佳诱导表达时间为72h,电泳及Western印迹分析证实表达产物为LL-37;改建后LL-37蛋白表达量提高了约35倍。结论:pPIC9 5′-UTR序列的改建能明显提高毕赤酵母表达LL-37蛋白,值得进一步研究以应用于其他外源蛋白表达。
关键词
抗菌肽LL-37
毕赤酵母
5'-非转录区
Keywords
antimicrobial peptide LL-37
Pichia pastoris
5'-untranslated regions
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人源抗菌肽LL-37表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达
陆建荣
王惠民
吴萍
黄松平
常秋月
凌勇武
倪晓蓉
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
下载PDF
职称材料
2
5′-非转录区序列改建提高毕赤酵母表达抗菌肽LL-37
陆建荣
王惠民
吴萍
黄松平
常秋月
凌勇武
倪晓蓉
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
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职称材料
已选择
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