鸡胸腺肽β4、β15基因的原核表达及其生物学活性测定

为获得具有生物学活性的鸡胸腺肽β4、β15,根据大肠杆菌密码子偏爱性,设计合成鸡胸腺肽Tβ4、Tβ15基因片段,采用重叠PCR获得完整的Tβ4、Tβ15基因,将其连接到pET-28a(+)载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定,应用镍柱亲和层析纯化蛋白质,采用E玫瑰花环试验测定其生物学活性。结果显示,成功构建大肠杆菌表达载体pET28a-Tβ4和pET28a-Tβ15,目的蛋白在大肠杆菌中大量可溶性表达,蛋白质分子量大小均为6kD,镍柱亲和层析获得了纯化的蛋白质。E玫瑰花环试验结果显示,重组Tβ4的活力为35.5%,Tβ15的活力为18.7%,均能够明显增强T淋巴细胞的活性。表明Tβ4和Tβ15基因得到成功表达和纯化,并具有良好的生物学活性。