GⅡ.17型诺如病毒样颗粒的制备及鉴定

[背景]诺如病毒(Norovirus,NoV)是引发全球人类急性胃肠炎的主要食源性致病原,具有广泛的遗传多样性,其中GⅡ.17型是亚洲地区的优势流行株,危害最为严重。研究表明,通过基因工程技术制备的诺如病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)具有良好的免疫保护作用,是目前NoV疫苗研发的主要思路。[目的]利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统制备GⅡ.17型诺如病毒的VLP,为GⅡ.17型NoV疫苗的研发奠定基础。[方法]合成GⅡ.17型NoV衣壳蛋白VP1的基因并克隆入pET28a-MsyB原核表达质粒中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,通过烟草蚀纹病毒(tobacco etch virus,TEV)蛋白酶去除融合标签,利用His-Tag镍柱纯化获得天然VP1蛋白,利用SDS-PAGE、Western Blot和透射电镜对纯化后的VP1蛋白反应原性及其形成的结构进行初步鉴定。[结果]MsyB-VP1融合蛋白能够以可溶形式大量表达,其最适表达条件为:IPTG浓度0.8 mmol/L,37℃诱导8 h;TEV蛋白酶酶切后的VP1纯化蛋白能够与鼠抗GⅡ.17型NoV VP1多克隆抗体特异性结合,并能够自组装形成直径约为40 nm的病毒样颗粒。[结论]利用原核表达系统成功制备了GⅡ.17型诺如病毒VLP,有望成为GⅡ.17型诺如病毒的候选疫苗。