免疫磁珠分离技术在微生物学检测中的应用

免疫磁珠分离技术(IMBS)是近年来国内外研究较多的一种新的免疫学技术。本文主要介绍了免疫磁珠分离技术的基本原理及其在微生物学检测中的应用概况。

碘化钾与酚/氯仿提取外周血基因组DNA方法的比较

目的建立碘化钾快速提取外周血基因组DNA的方法。方法采用碘化钾法和酚/氯仿提取法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行人类生长激素(HGH)基因片段的扩增及鉴定。结果此方法提取的DNA量大,DNA体外扩增结果稳定。结论该方法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备。

肇庆地区汉族人群CD36基因突变状况的初步调查

目的调查肇庆地区汉族人群CD36基因突变状况。方法从100份EDTA抗凝全血中提取DNA标本,采用PCR-SSP方法分别检测其CD36基因突变类型。结果 95例标本CD36基因无异常,5例(5%)标本检测出可致CD36抗原缺失的基因突变,其中3例在外显子4第329核苷酸位置发生G→C突变,2例在外显子2第268核苷酸位置发生C→T突变,并且1例标本同时存在上述2种突变。结论初步得出肇庆地区汉族人群CD36基因突变位点和频率(5%),对探讨CD36基因突变导致血小板CD36抗原缺失而引起的同种异体免疫性疾病有重要的诊断意义,对开展临床血小板同型输血具有指导意义。

自身免疫性溶血性贫血患者实验室诊断及输血1例

1病例资料患者,女,49岁,因自身免疫性溶血性贫血、溶血危象住院治疗。实验室检查发现红细胞计数0.63×1012,血红蛋白26g/L,需输血治疗。对其进行血型鉴定及抗体筛检发现患者红细胞直抗阳性,且体内存在自身抗体（无同种抗体）。经进一步实验确定血型后采用卡式法配血共计1 200 ml同型洗涤红细胞,输注后未发生输血反应。抗A抗B试剂、ABO反定型试剂、筛检细胞、

人类血小板同种抗原1-5和15系统的同步基因分型

目的:通过对人类血小板同种抗原(HPA)1-5和15系统进行基因分型分析,建立可靠的PCR-SSCP同步基因分型方法,为临床安全、有效输注血小板提供配型手段。方法:采用KI法制备基因组DNA模板,利用含有基因突变位点的等位基因特异性引物进行多聚酶链反应,利用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行分析。结果:检测的DNA样本HPA1系统中aa纯合子出现频率为85%,ab杂合子出现的频率是15%,未见bb纯合子;HPA2系统中aa纯合子出现频率最高为5%,bb纯合子出现的频率为30%,ab杂合子出现的频率是6%;HPA3系统中aa纯合子出现频率为47.5%,ab杂合子出现的频率为32.5%,bb纯合子20%;HPA4系统中全部是aa纯合子,未见ab或bb情况;HPA5系统中aa纯合子出现频率为52.5%,ab杂合子出现的频率是45%,bb纯合子是2.5%;HPA15系统中aa纯合子出现频率为35%,ab杂合子出现的频率是60%,bb纯合子是5%。结论:PCR-SSCP可快速准确地对HPA1-5和15系统进行同步基因定型。

广西地区汉族人群Duffy血型基因分型

Duffy血型在人类学研究中是一个有用的工具。1950年在多次输血的血友病患者血清中发现的抗Fya和1951年在一名产妇血清中发现的抗Fyb是Duffy血型系统中最常见的两个抗体〔1〕。Duffy血型系统有6个抗原,即Fya（FY1）、Fyb（FY2）、Fy3（FY3）、Fy4（FY4）、Fy5（FY5）、Fy6（FY6）。Duffy血型的基因位于染色体1q22-23,由于44号氨基酸的改变出现FY1和FY2这两种基因型〔2〕。近些年分子生物学技术在血型研究领域的应用越来越多,

金雀异黄素抗人肝癌SMMC-7721细胞侵袭作用的研究

目的研究金雀异黄素用于抑制肝癌浸润、转移的可能性。方法用Western blot法检测人肝癌SMMC-7721细胞在金雀异黄素作用下侵袭能力的改变。结果金雀异黄素可降低SMMC-7721细胞的侵袭能力,抑制MMP-2、MMP-9、NF-κB的分泌,促进TIMP-2的分泌。结论金雀异黄素通过调控人肝癌细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-2、NF-κB表达,在一定程度上可以抑制人肝癌细胞的浸润与转移。

解淀粉芽孢杆菌YF03产蛋白酶发酵培养基及发酵条件的优化

研究旨在提高菌株产中性蛋白酶的能力,采用单因素实验和正交实验,对一株高产中性蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌进行了发酵培养基和发酵条件的优化,确定其最适培养基配方为玉米粉5%、棉粕3%、麸皮3%、KH2PO4 0.4%、Na2HPO4 0.05%、MgSO4 0.1%、MnCl2 0.01%,最适摇瓶培养条件为初始pH值7.0、种龄8 h、接种量5%、装液量100 ml/500 ml、30℃、240 r/min培养48 h,中性蛋白酶的摇瓶发酵酶活力最高可达16 826 U/ml,是初始发酵酶活力的3.98倍。

复合型β-甘露聚糖酶的开发及其对断奶仔猪生长性能和血清生化指标的影响

试验旨在探讨酸性与中性β-甘露聚糖酶组合效果及其不同添加量对断奶仔猪生长性能及血清生化指标的影响,为复合型β-甘露聚糖酶的开发提供依据。试验一体外仿生消化试验采用单因素试验设计,分为6个组别,对照组为不加酶组,5个加酶组β-甘露聚糖酶添加量均为4 U/g基础日粮,酸性与中性β-甘露聚糖酶活力比分别为0100、2575、5050、7525、1000,以对基础日粮还原糖释放量为依据选择最佳的复合型β-甘露聚糖酶;试验二选择8 kg左右杜长大杂种断奶仔猪300头,根据体外仿生消化试验结果,采用单因素完全随机设计,分为4组,每组5个重复,每个重复15头猪。对照组饲喂基础日粮,3个试验组在基础日粮中分别添加复合型β-甘露聚糖酶2 000、4 000、6 000 U/kg,正式试验期28 d。结果表明:在仿生消化试验中,酸性与中性β-甘露聚糖酶酶活比为5050时,对日粮还原糖释放量的提高最为明显,达7.64%;在断奶仔猪生产试验中,添加4 000、6 000 U/kg复合型β-甘露聚糖酶能显著提高断奶仔猪末重、日均采食量、日增重(P<0.05),同时三种剂量添加均能显著降低仔猪腹泻率(P<0.05);添加4 000、6 000 U/kg复合型甘露聚糖酶可显著提高血清中血糖和总蛋白含量(P<0.05)。综合各项指标,酸性与中性β-甘露聚糖酶酶活比以5050进行添加,且在日粮中的添加量为4 000～6 000 U/kg时,能显著改善断奶仔猪的生长性能,降低仔猪腹泻率,提高血清中血糖和总蛋白含量。

正确诊断骨髓增生异常综合征患者ABO血型的方法

骨髓增生异常综合征（MDS）是血液系统的恶性疾病，常常伴有不同程度的血液各系统细胞的贫血而需要输血治疗。在骨髓增生异常综合征疾病的发生发展过程中，患者的血型抗原往往出现减弱或丢失的情况，通常抗原减弱仍可正确定型，抗原丢失往往出现正反定型不符而无法正确诊断，只有对血型的正确诊断，才能确保患者安全输血达到治疗的目的。

仔猪专用复合酶的开发及其对乳仔猪作用效果的研究

研究旨在开发一种仔猪专用复合酶,并对其作用效果进行研究。运用仿生消化系统筛选乳猪复合酶酶谱,然后采用随机区组设计,选用健康均匀的(杜×长×大)三元杂交31日龄断奶仔猪432头,随机分为3个处理组,A组饲喂基础日粮,B组基础日粮+500 g/t乳猪复合酶,C组基础日粮+1000 g/t乳猪复合酶,每个处理6个重复,每个重复24头猪,试验期35 d。当酶谱为蛋白酶10000 U/g、淀粉酶500 U/g、β-葡聚糖酶300 U/g、木聚糖酶15000 U/g、β-甘露聚糖酶2000 U/g、α-半乳糖苷酶150 U/g时,体外营养物质消化率结果最优。动物试验结果表明,与A组相比,B组和C组的日采食量均无显著变化,C组的料肉比显著降低(P<0.05);添加乳猪酶的B组(4.62%)和C组(0.96%)腹泻率比A组(7.40%)分别显著降低了37.57%(P<0.05)和87.03%(P<0.05);仔猪发病率呈下降趋势,其中C组(1.00%)较A组(4.80%)显著降低了79.17%(P<0.05)。结果提示,乳猪复合酶可以通过仿生消化系统科学地筛选,且该仔猪专用复合酶对于乳仔猪的生长性能和抗病能力具有较好的改善作用。

基因分型在正反定型不符病例中的诊断意义

ABO血型鉴定是临床患者输血前的一项重要检查。在某些疾病的影响下,可以导致ABO血型中的抗原或抗体减弱,出现ABO血型正反定型不符而鉴定困难的情况,从而影响输血配型。广西贵港市中心医院2009年10月-2010年1月收治的2例骨髓增生异常综合征的患者正反定型不符,采用PCR-SSP基因分型方法正确定型后输血,现报告如下。

基因诊断在MNS血型系统中的应用

MNS血型系统的抗原取决于寡糖和多肽构成的唾液糖蛋白（sialocophorins）,存在于红细胞膜的血型糖蛋白A（glycophorin A,GPA）,受控于4号染色体的GPA基因,在临床输血和遗传学研究中具有重要意义。

野战用血型快速鉴定纸卡的稳定性观察

目的:研究ABO及RhD血型快速鉴定纸卡的稳定性,以改进和确定试剂的存放条件和有效期。方法:选择3批血型快速鉴定纸卡,分别存放于-40℃、2～8℃、20～25℃、37℃、60℃等不同温度条件下,于放置的不同时间分别进行外观、特异性与亲和力检测。结果:ABO、RhD血型快速鉴定纸卡分别在-40℃、2～8℃、20～25℃、37℃、60℃条件下放置1个月、2个月后,外观与1周内制备的纸卡基本一致;特异性均合格,1min凝集强度均合格。结论:该ABO、RhD血型快速鉴定纸卡制备技术稳定,在-40～60℃存放2个月,对纸卡中的试剂无显著影响。

血型快速鉴定单克隆抗体的选择与优化

目的:筛选特异性好、亲和力强、效价高、质量稳定,且能批量生产的抗A、抗B及抗D抗体。方法:对抗A、抗BMcAb细胞株生产出的高效价抗A、抗B及抗D抗体,从特异性、亲和力和效价等方面进行检测和选择。结果:3种抗A、抗B单克隆抗体试剂和两种抗D抗体试剂的特异性和亲和力试验均合格;3种抗A、抗B单克隆抗体试剂的效价均为1∶256,两种抗D抗体试剂的效价均为1∶64;ABO、Rh(D)血型快速检测纸卡的抗A、抗B抗体效价为1∶256比较合适,抗D抗体的效价为1∶64比较合适。结论:通过特异性、亲和力和效价检测,3种抗A、抗B单克隆抗体试剂差异不显著,两种抗D抗体试剂差异也不显著。

牛心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及其单克隆抗体的制备

目的提取、纯化牛心肌肌钙蛋白T(Cardiac troponin T,cTnT),并制备其单克隆抗体。方法采用组织匀浆、蛋白层析技术提取、纯化牛cTnT,紫外分光光度法检测其浓度;SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA法检测其反应特性。将纯化的牛cTnT免疫小鼠,进行细胞融合,间接ELSIA法筛选阳性杂交瘤细胞株,采用小鼠体内法制备腹水。结果纯化的两批牛cTnT浓度分别为0.246和0.336 mg/ml;相对分子质量约为37 000,纯度分别为86.02%和93.77%;纯化的cTnT蛋白可与鼠抗牛cT-nT单克隆抗体结合。共获得5株分泌抗牛cTnT单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,阳性杂交瘤细胞株3B10腹水抗体效价达1∶10 240。结论已成功提取、纯化了牛cTnT,并建立了稳定分泌抗牛cTnT单抗的杂交瘤细胞株,为cTnT检测试剂盒的国产化奠定了基础。

血型快速检测卡模拟野战条件的应用研究

目的:观察ABO、RhD血型快速检测卡在野战环境下进行血型鉴定的准确度和稳定性,为野战及紧急状况下的血型鉴定研制快速血型检测卡。方法:检测卡存放条件:-40℃、20～25℃、50℃;溶解单抗使用的水:生理盐水、自来水、河水。使用不同条件下放置30天的血型检测卡对同一批血样进行血型鉴定,溶解抗A、抗B使用不同水源的水。对比血型鉴定结果和1 min凝集强度。结果:不同温度(-40℃2、0-25℃、50℃)下存放1个月的ABO、RhD血型快速检测卡,其血型鉴定结果未受显著影响;单抗溶解水使用河水对鉴定结果影响不显著,对1 min凝集强度影响显著,但仍符合标准。结论:所研制的ABO、RhD血型快速检测卡鉴定结果稳定,在不同温度保存,以及使用不同的水源对血型的鉴定结果无显著影响,适于野战条件下的血型鉴定,且操作简单、结果稳定可靠。