基于寨卡病毒NS2B蛋白特异抗原多肽的荧光素酶免疫吸附法检测寨卡病毒抗体

目前国内外针对寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的研究多集中于E蛋白与NS1蛋白,而对于其他非结构蛋白的研究则相对较少。为了进一步了解ZIKV感染免疫机制,为ZIKV免疫学检测和流行病学研究提供新的工具方法,本研究建立了基于NS2B蛋白多肽抗原荧光素酶免疫吸附试验(Luciferase immunosorbent assay,LISA)的新方法,应用于检测抗ZIKV IgG抗体(anti-ZIKV IgG)。通过构建NS2B蛋白特异性多肽抗原与新型荧光素酶融合表达的载体,转染真核细胞后获得含有目标抗原与荧光素酶融合蛋白的细胞裂解物,建立anti-ZIKV IgG检测的LISA法。采用正常人血清、ZIKV感染的阳性血清、乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染阳性血清,登革病毒(Dengue virus,DENV)感染阳性血清,评价该方法的特异性、灵敏度与重复性及交叉反应,并与基于NS1纯化抗原的商业化ELISA试剂盒(NS1-ELISA)进行平行比较。成功建立的NS2B-LISA方法,检测灵敏度和特异度分别为92%和96.2%,通过阳性样本倍比稀释评价两种检测方法灵敏度,NS2B-LISA的灵敏度比NS1-ELISA高16倍。重复性实验显示NS2B-LISA法检测anti-ZIKV IgG板间变异系数为(3.1±0.7)%,板内变异系数为(2.6±0.9)%。本研究基于NS2B蛋白多肽抗原成功建立了anti-ZIKV IgG检测的LISA新方法,该方法简便、特异、灵敏、重复性好,易于高通量自动化,可用于anti-ZIKV IgG感染的免疫学诊断与流行病学研究。