生物制品研究进展

1 我国生物制品发展概况 新中国成立后提出“预防为主”的卫生方针,生物制品事业获得蓬勃发展。卫生部在全国先后建立了北京、上海、武汉、长春、兰州、成都6个生物制品研究所及中国药品生物制品检定所、中国医学科学院昆明医学生物学研究所。培训了生物制品人员,经过40余年的努力,我国生物制品事业逐步走上轨道,不断研制出大量人民急需的生物制品。由于坚持“质量第一”的方针,制品质量不断提高。1988年卫生部颁布了《生物制品 GMP》,进一步加强了全面质量管理,我国生物制品逐步达到WHO标准,充分发挥了生物制品在防病、治病和诊断疾病上的作用。一些严重威胁人民健康的传染病,由于能用疫苗有效预防已多数被控制。

冷藏库在生物制品中的应用

冷藏库在生物制品中的应用于新国（卫生部北京生物制品研究所１０００２４）１．前言在生物制品的研究和生产中都离不开对冷库的使用。除了它按不同的制品提出不同的使用库温外，大多数还与洁净厂房相连通。生物制品在生产中直接从洁净厂房入库出库，因此要求冷库不能破坏...

重组人肿瘤坏死因子α(hTNFα)衍生物发酵条件的研究

本文对一种新型重组人肿瘤坏死因子衍生物（命名为ｈＴＮＦＤ）的发酵条件进行了初步研究。通过实验优化选择了适宜该衍生物表达的培养基、ＩＰＴＧ使用浓度、诱导时期以及诱导时间的长短等，并在５０Ｌ发酵罐进行了中试规模的放大培养，菌体的收获量湿重可达１６４３ｇ／Ｌ，ｈＴＮＦＤ表达量占总蛋白的６０％，纯化的衍生物比活为１０１×１０１０Ｕ／ｍｇ，比原型ｈＴＮＦα提高了４６５倍，具有潜在的临床应用价值。

北京生研所昆明小鼠(KM鼠)生产性能研究

在普通的饲养条件下，对昆明小鼠进行了体重增长、脏器重量及生产性能的研究。结果表明：昆明小鼠平均产仔数13．72只／胎，平均初生重1．89g、乳仔成活率98．41％。体重增长快，日增重：2周内0．665g；2周至6周，雄鼠0．7g，雌鼠0559；7周至10周，雄鼠0．38g，雌鼠0．32g。雌鼠生产胎间隔：平均23．33d.

人肿瘤坏死因子α的结构和衍生物研究进展

对人肿瘤坏死因子α（hTNF-α）结构研究表明,生理条件下具有生物学活性的hTNF-α是一个紧密的三聚体,其活性位点位于两个相邻亚基之间的V形结构域。hTNF-α有两种不同的受体,分别介导不同的生物学活性。在对hTNF-α结构与功能研究的基础上,人们对其N末端、C末端和p75受体结合位点进行基因改造,研制了一系列衍生物,以提高hTNF-α的抗肿瘤活性,降低毒副反应。

北京生研所昆明小鼠(KM鼠)生产性能研究

本文应用昆明小鼠进行体重增长、脏器重量及生产性能的研究。结果表明：在普通的饲养条件下，昆明小鼠平均产仔数１３．７２只／胎，平均初生重１．８９ｇ、乳仔成活率９８．４１％、体重增长快，日增重：２周内０．６６５ｇ；２周至６周，公鼠０．７ｇ，母鼠０．５５ｇ；７周至１０周，公鼠０．３８ｇ，母鼠０．３２ｇ。母鼠生产胎间隔：平均２３．３３天。

北京株水痘活疫苗的临床反应、血清学及流行病学效果

接种1～6．5岁无水痘病史的健康儿童1056人，对其中的200人进行了副反应观察，除4人注射局部有轻微的红晕反应外，无其它反应或不适。免前抗体阴性的儿童，免后抗体阳转率为94．2％（91．4％～96．3％），其GMT为646．82（497．36～854．80）；接种25pfu剂量的抗体阳转率达85．9％，而接种2．5pfu的阳转率仅30％。疫苗接种组水痘发病率为1％（4／397），对照组发病率为27.6％（156／566），其保护率达96.4％。

明胶微球乙型肝炎疫苗的研究

用明胶作为原材料制备出10～100μm直径的明胶微球，用来包裹乙肝疫苗抗原，其包裹率为90％以上。免疫动物后抗－HBS在3～4个月达到高峰，10个月仍能维持较高水平（S／N为80～90）。微球疫苗优于Al佐剂疫苗，也优于含Al佐剂微球疫苗。明胶微球制备方法简单，抗原不接触有机溶剂。用琼脂糖、明胶＋阿拉伯胶等均能制成微球，且均可包裹成功。明胶微球可以成功地制备出HB－DT微球疫苗，关于它们的制备条件和免疫效果有待进一步观察和改进。

乙肝-白-百-破四联疫苗的实验研究

应用乙肝抗原与白-百-破抗原配制成Al（OH）3吸附四联疫苗，经实验室检测HBsAg能完全被吸附，对小白鼠的免疫效果较单价乙肝疫苗明显增强。应用高pH吸附剂较低pH吸附剂免疫效果更好。在四联疫苗中，四种抗原间无干扰现象。四联疫苗经4℃保存8个月免疫效价无影响。

北京株水痘活疫苗的研制

选择处于对数生长期的人胎肺二倍体细胞（2BS），接种北京-7株水痘-带状疱疹病毒．待受染病毒的细胞出现CPE时，将维持液换为不含牛血清的MEM。接种后的2M细胞，培育36～38小时即可收获较高满度的病毒。采用pH7．2～7．4含25％山梨醇作保护剂、以6000r／min离心30分钟除去病毒液中的细胞碎片，制成减毒活疫苗。

^(188)Re标记CEA嵌合人源化抗体在荷人结肠癌裸鼠的放射免疫显像研究

背景与目的:癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)在多种肿瘤,尤其是在结肠癌中高表达,抗CEA抗体在人结肠癌的诊断治疗中具有良好的应用前景。本研究采用188Re标记CEA嵌合抗体,研究其在荷人结肠癌裸鼠体内的生物分布及放射免疫显像。方法:用氯化亚锡还原法标记CEA嵌合抗体及其亲本鼠单抗C50,薄层层析法鉴定标记抗体的标记率、放化纯度及体外稳定性,ELISA鉴定标记后的免疫活性,研究188Re-CEA嵌合抗体在荷人结肠癌裸鼠体内的分布及放射免疫显像效果,并与C50鼠单抗的显像效果进行比较。结果:188Re-CEA嵌合抗体的放化纯度大于95%;比活为356MBq/mg;免疫活性为61%;薄层层析示其在体外稳定。188Re-CEA嵌合抗体的生物学分布显示:注射后24h,肿瘤与肾脏、血液的放射性比值分别为0.75、0.99,与其余各脏器的放射性比值均大于1.78;48h,肿瘤与肾脏、血液的放射性比值分别为1.02、1.12,与其余各脏器的放射性比值均大于2.08。20h后,肿瘤显影清晰。CEA嵌合抗体的放射生物学特性及显像效果与C50鼠单抗基本相同。结论:188Re-CEA嵌合抗体在裸鼠体内放射免疫显像显示出良好的肿瘤特异性,且显像速度较快,可显示的肿瘤最小可达0.5cm。CEA嵌合抗体降低了免疫原性,在人体内显像更优于其亲本鼠单抗C50。

应用光敏生物素探针检测Vero细胞乙脑疫苗中细胞残余DNA

用国产光敏生物素,标记Veto细胞全DNA,通过与疫苗中同源DNA的狭缝杂交,检测Vero细胞乙脑疫苗中细胞残余DNA含量。检测灵敏度可达1pg。探针稳定长达一年。杂交反应特:异性高,结果重复性好。与同位素探针相比,生物素标记探针简便、经济、快速、稳定。由本法测得,Vero细胞乙脑粗制疫苗中,含DNA为200～400pg/0.5ml;超滤浓缩苗为4×10~4～6×10~6pg/0.5ml;通过柱层析和沉淀法提纯的疫苗则分别低于60pg/0.5ml和1pg/0.5ml。本法同样适用于传代细胞制备的其它生物制品中细胞残余DNA的检测。

应用微载体Vero细胞制备流行性乙型脑炎灭活疫苗最适条件的研究

应用微载体培养Vero细胞研究制备流行性乙型脑炎(简称乙脑)灭活疫苗的最适条件,包括微载体的选择和细胞培养以及细胞日龄、细胞密度、毒种浓度、病毒维持液pH、种毒方式等。并按初步选择的最适条件试生产疫苗,其病毒滴度达log7.33～8.09pfu/ml,其效力(ID_(50))为0.000017～0.000063毫升,均高于现行地鼠肾细胞培养疫苗的水平。

抗rhTNFα杂交瘤细胞的体外培养及抗体分泌的研究

采用非CO2依赖培养基（CO2-IM）在无CO2、37℃条件下培养抗rhTNFα杂交瘤细胞，培养1周PH无显著变化，细胞生长趋势和抗体分泌显著超过DMEM。将CO2－IM与SFPF－HM混合后添加ITSE可以培养抗rhTNF杂交瘤细胞，其细胞生长速率、密度、活力和抗体产量均达到或超过含血清培养。

pRL-hTNF/JM103工程菌发酵和rhTNFα表达的研究

为便于下游中试规模生产，采用温度敏感型启动子PRPL构建rhTNFα工程菌，并对影响工程菌发酵培养和表达的因素进行了初步研究。结果显示，采用RTB培养基，50℃热水快速升温，诱导培养4～4．5h，湿菌体收获率和表达量均达到较高水平；50L发酵罐连续发酵3批，14000r／min连续离心，菌体收获率湿重达16．gg／L培养物，rhTNFα表达量占菌体总蛋白的10.5％，活性达1．35×107U／mg蛋白。.

乙型脑炎灭活疫苗Vero细胞适应毒种的研究

将乙脑P3株鼠脑毒种在Vero细胞中适应性传代，当传至10代时，毒种的CPE和感染性虽无明显变化，但其免疫原性却明显减弱，因此，用在Vero细胞中传递1至2代的几株建立毒种库（P3V1和P3V2），其涵度分别为7．71和78210gpfu／ml。在毒种中加入以山梨醇为主要成分的稳定剂后，4～S℃保存30天，－30℃1年，－60℃2年，滴度降低约0．51ogpfu／ml，在生产中使用效果良好。

伤寒Vi多糖菌苗的安全性和免疫效果研究

对我国首次研究成功的伤寒Vi多糖菌酋进行了人体接种安全性、反应性、血清学效果和流行病学效果观察，各期观察达21万余人，结果证实伤寒Vi多糖茵茵安全世良好，反应轻微。血清学效果显示，30μg一次免疫，Vi抗体4倍增长可达91．6％。两次流行病学效果考核，按血培养伤寒杆菌阳性病例统计，保护率可达70％左右，茵茵的效果指数为3．29～3．49。该菌苗性质稳定，初免只需注射一针，替代现行菌体菌苗推广应用是完全可行的。

Edmonston-Zargreb和沪191麻疹疫苗免疫婴儿的血清学研究

研究目的在于评价两种疫苗免疫婴儿的血清学效果和接种后的反应。所用两种疫苗的滴度均为3．5LogTCID50/0．1ml．婴儿被随机分人接种E-Z0．5ml、沪1910．2ml和沪1910．5ml各组，3个组中和抗体阳转率、＞200mlu／ml阳性率均无显著性差异（x2=0．189，0.886；P＞0005）；沪1910．5ml组血凝抑制抗体的阳转率、＞200mlu／ml阳性率均高于同剂量E-Z组（X2=561，5.4；P＜0.05）。免前未测到抗体者的中和抗体、血凝抑制抗体阳转率显著地高于免前测到抗体者（X2=7．09～36．907，P＜0．01～0．001）。沪191和E-Z麻疹疫苗接种后的皮疹率分别为47.8％和16.5％，差异十分显著。未观察到严重不良反应。

应用生物素—亲和素间接免疫荧光法检测支原体

应用生物素-亲和素系统导入间接免疫荧光法,对不同株的支原体进行了初步检测。结果生物素-亲和素间接免疫荧光法(ABS—IFA)比普通间接免疫荧光法敏感度高百倍以上。在ABS—IFA方法中,阳性支原体部位苹果绿染色明亮、清晰,而背景浅且较干净。