NRP1生物学功能及其与肿瘤放射敏感性关系的研究进展

神经菌毛素1(NRP1)是神经菌毛素(NRP)家族的重要成员之一,通过与血管内皮生长因子(VEGF)、信号素(Sema)和其他多种细胞因子间的相互作用影响肿瘤细胞的辐射抗性。本文总结了NRP1在相关领域的最新研究进展,并对NRP1的结构、表达、生物学功能和与肿瘤放射敏感性的关系等方面作一综述。

三维适形放疗急性放射性食管炎影响因素的临床研究

目的探讨胸部恶性肿瘤三维适形放疗所引起的急性放射性食管炎的发生率和影响因素。方法60例非小细胞肺癌和食管癌患者进入本研究,单纯三维适形放疗39例,放疗、化疗同期治疗21例,化疗采用CMV或FP方案。患者临床特征和治疗参数指标包括:性别、年龄、是否同期化疗、射野内食管长度、整个食管的平均剂量、食管的最大剂量点剂量。针对RTOG分级≥2级的急性放射性食管炎患者分析上述指标。结果26例(43.3%)患者出现了≥2级的急性放射性食管炎,其中2级18例(69.2%);3级7例(26.9%);4级1例(3.9%)。发现同期放疗、化疗和整个食管的平均剂量对急性放射性食管炎的发生是有统计学意义的影响因素(P<0.05)。结论在三维适形放疗中,同期放疗、化疗和整个食管的平均剂量是急性放射性食管炎发生的影响因素。

肿瘤微环境与肿瘤细胞放射敏感性关系的研究进展

肿瘤放射治疗(放疗)是肿瘤治疗的重要手段之一。然而,电离辐射等因素可改变肿瘤微环境,而其微环境对电离辐射产生抵抗性,降低肿瘤细胞的放射敏感性,这已成为肿瘤放疗的瓶颈、复发的根源。为此,本文主要综述肿瘤微环境中肿瘤细胞放射敏感性的差异、缺氧微环境诱导肿瘤细胞的辐射抗性、肿瘤细胞DNA损伤修复与放射敏感性、肿瘤基质和干细胞对放射敏感性的影响及肿瘤细胞凋亡和自噬与放射敏感性等方面内容,以加深对肿瘤微环境与肿瘤细胞放射敏感性之间关系的理解,并对辐射抗性的肿瘤细胞及其肿瘤干细胞采取可能的干预措施,达到有效治疗肿瘤的目的。

酸性成纤维细胞生长因子的生物学特性

酸性成纤维细胞生长因子作为成纤维细胞生长因子家族的成员之一,不但具有促使DNA的合成、细胞分裂和分化等促分裂活性,而且还具有舒张血管、缺血保护、神经调节和保护等内分泌激素样活性。促分裂活性与其多肽的三维结构紧密相关,其中受体结合区、核转位区和肝素结合区在促分裂活性中具有重要地位。

骨髓间充质干细胞对放射性胸腺损伤的修复作用

目的观察骨髓间充质干细胞（MSCs）对放射性胸腺损伤的修复作用.方法 C57BL/6小鼠行1.75 Gy X线全身照射,每周1次,连续4周.实验设正常对照组、照射组及照射＋MSCs组,于末次照射后30、60、90 d称量各组小鼠体质量.取胸腺组织,计算胸腺质量指数,并通过组织学观察MSCs对胸腺组织损伤的修复作用.结果辐射组和MSCs组在照射期间体质量下降,在观察期间内,小鼠体质量随时间逐渐增加,并且MSCs组小鼠体质量略高于辐射组.对照组小鼠胸腺指数随周龄增大而逐渐减小,辐射组和MSCs组小鼠随照射后时间的延长胸腺指数逐渐增加,MSCs组90 d时胸腺指数与对照组小鼠接近.通过观察病理结果可知,正常对照组小鼠胸腺组织皮、髓质结构清楚.辐射组小鼠30 d时胸腺组织淋巴细胞可见变性、坏死,细胞数量减少;60 d时辐射组可见胸腺淋巴细胞出现修复性再生与增生;90 d时辐射组可见胸腺瘤癌前病变.MSCs移植30 d时胸腺组织皮质高度增生,髓质缩小,皮髓质内可见新生的淋巴组织;60 d时胸腺结构趋于正常.结论 MSCs可促进损伤胸腺再生与修复.

pNEgr-mIL-12真核表达载体的体外和体内生物学活性检测

肿瘤的基因 放射治疗是近年来发展起来的新技术 .分别于体外和体内检测含辐射敏感启动子和mIL 12基因的真核表达载体 (pNEgr mIL 12 )的生物学活性 .体外经酶联免疫吸附试验 (enzymelinkedimmunosorbentassay ,ELISA)法检测转染 pNEgr mIL 12重组质粒的COS 7和B16细胞可经辐射诱导mIL 12p70表达 ,于 1 5～ 2 0Gy照射后表达增高最明显 ,COS 7细胞于照后4h达峰值 ,B16细胞的表达水平随照射后时间延长而逐渐增高 ;pNEgr mIL 12重组质粒联合电离辐射治疗小鼠移植肿瘤 ,单次或多次注射pNEgr mIL 12重组质粒 ,联合局部照射能够抑制小鼠移植肿瘤生长 ,与单纯照射组比较肿瘤生长速度减慢 ,瘤重降低 ,尤以多次给予质粒治疗组效果明显 .

辐射诱导细胞周期调控和DNA损伤反应相关基因表达变化的实验研究

采用实时定量PCR技术检测小鼠胸腺和脾脏基因表达对X射线全身照射的反应,为探索可行的辐射生物标志物打下实验基础。研究中选用细胞周期调控和DNA损伤反应相关基因Cdkn1a、Ccnd1、Ccnb1、Gadd45a、Atm和Fdxr,以Gapdh为参考基因,观察0.5、1、2、4、6 Gy X射线全身照射后4和24小时上述基因在胸腺和脾脏的相对表达量的变化。同时计数骨髓细胞涂片嗜多染红细胞(PCE)的微核率进行对比。结果显示,上述6种基因对电离辐射全身作用都出现变化,但以Cdkn1a、Ccnd1和Ccnb1三者对全身照射的剂量效应关系较为明显,其中Cdkn1a和Ccnd1基因的表达随辐射剂量增加而升高,Ccnb1基因的表达随辐射剂量增加而下降。剂量效应曲线可拟合为线性-平方方程,其相关系数r为0.851～0.998,p<0.05～0.01。但与嗜多染红细胞微核率进行对比,Ccnd1和Ccnb1的表达只有部分结果与之具有显著的相关关系。Cdkn1a的表达量则不仅随辐射剂量增加而升高,而且与嗜多染红细胞微核率的剂量-效应曲线明显相关,在两器官和两时间点其相关系数为0.950～0.975,p<0.01。另一方面Cd-kn1a表达量变化的幅度较大,照射后4小时和24小时胸腺的最高表达量分别为11.2和11.3倍,脾脏的最高表达量分别为20.6和9.3倍。鉴于实时定量PCR技术适用于快速、高通量检测,通过进一步在人体观察验证,Cdkn1a基因表达变化有可能成为研制新的辐射生物剂量计的候选者。

可溶性人TRAIL基因表达载体的构建及其诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的构建可溶性肿瘤坏死因子(TNF)相关凋亡诱导配体TRAIL基因表达载体并研究其瞬时转染对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用重叠延伸PCR法克隆含有TNF-α信号肽的人TRAIL基因,并将其连入pUCm-T载体,测序正确后克隆入表达载体pcDNA3.1中,采用Gene-CompanionTM非脂质体型聚阳离子转染试剂体外瞬时转染人膀胱癌EJ细胞,RT-PCR法检测目的基因mRNA水平的表达,Westernblot检测细胞培养上清中目的基因的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞存活。结果成功构建了可分泌表达的人可溶性TRAIL表达载体,体外转染TRAIL的EJ细胞凋亡率均显著高于未转染细胞及转染空载体细胞的凋亡率,并明显抑制细胞存活,细胞存活率为51.34%,明显低于未转染细胞及转染空载体的细胞存活率。结论所构建的可溶性TRAIL表达载体转染肿瘤细胞可诱导细胞凋亡及抑制肿瘤细胞的生长存活。

帕金森病体外实验细胞模型的建立

目的:探讨1-甲基-4-苯基-四氢吡啶离子(MPP+)对小鼠胚胎中脑原代培养多巴胺能神经元的毒性作用及其机制。在体外建立帕金森病(PD)实验研究的细胞模型。方法:采用小鼠胚胎(孕14d)中脑进行原代细胞培养,实验分为对照组和不同浓度(0.1、1、10和15μmol.L-1)MPP+药物实验组,应用酪氨酸羟化酶(TH)免疫化学细胞染色方法和Hoechst33342荧光染色对多巴胺能神经元的损伤及凋亡进行测定。结果:对照组中多巴胺能神经元的数量为(875±23)个/孔。在0.1、1、10和15μmol.L-1MPP+实验组,多巴胺能神经元的数量分别为(612±25)、(586±32)、(459±16)和(435±19)个/孔,与对照组比较,MPP+实验组多巴胺能神经元数量均明显降低(P<0.05),多巴胺能神经元突起的数目和长度明显减少。Hoechst33342染色发现,对照组中凋亡细胞数占总细胞数的(5.45±0.29)%,10μmol.L-1MPP+药物治疗组细胞凋亡率为(26.97±1.36)%,显著高于对照组水平(P<0.05)。结论:0.1、1、10和15μmol.L-1MPP+均引起多巴胺能神经元的数量显著减少,随着药物浓度的增加,多巴胺能神经元减少的程度越显著。MPP+引起的多巴胺能神经元的变性死亡可能通过凋亡途径所诱导。

pEgr-IFNγ基因-放射治疗对荷瘤小鼠抑瘤效应的研究

探讨pEgr-IFNγ基因-放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜照射剂量和质粒注入量。观察不同剂量X射线照射及瘤内不同量pEgr-IFNγ重组质粒注入,基因-放射治疗在接种B16黑色素瘤小鼠体内抑瘤效应的差异,并用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测各组小鼠外周血IFNγ含量。结果表明,质粒注入后接受20Gy X射线照射组照后3—27d,肿瘤生长速率明显低于2Gy和10Gy照射组(p<0.001),且小鼠平均生存时间明显延长(p<0.001)。质粒注入量为20μg或30μg的联合治疗组照后3—27d,肿瘤生长速率明显低于注入量为10μg的联合治疗组(p<0.05—0.001),且平均生存时间明显延长(p<0.01)。基因-放射联合治疗组受照射后第1天和第3天外周血IFNγ含量明显高于单纯基因治疗组均为(p<0.05)和对照组,分别为(p<0.01,p<0.05)。结果显示,pEgr-IFNγ基因-放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜照射剂量为20Gy,质粒注入量为20μg;联合治疗组可能通过诱导瘤内IFNγ基因表达增强,使血液中的IFNγ浓度升高,进而增强机体免疫功能和抗肿瘤能力。

多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用

目的：探讨多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗对荷Lewis肺癌小鼠的抑瘤效应。方法：将荷瘤小鼠随机分为对照组、10Gy照射组、4次2．5Gy照射组、4次质粒组、质粒＋10Gy组和4次（质粒＋2．5Gy）组。小鼠肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒后36h，接受X射线照射，观察各组小鼠治疗后不同时间肿瘤生长速率，18d后计数各组小鼠肺转移结节数，并称量瘤重。结果：治疗后12～18d，4次（质粒＋2．5Gy）组肿瘤生长速率明显低于质粒＋10Gy组（P〈0．001）。治疗后18d，4次（质粒＋2．5Gy）组小鼠肺转移结节数和瘤重明显低于质粒＋10Gy组（分别为P〈0．001和P〈0．01）。结论：多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量基因-放射治疗。

pEgr1-hsTRAIL质粒对肺腺癌A549细胞放射敏感性及DR4和DR5表达水平的影响

目的:检测转染pEgr1-hsTRAIL质粒的人肺腺癌A549细胞放射敏感性变化及其对死亡受体(DR)4和DR 5mRNA和蛋白表达的影响,探讨pEgr1-hsTRAIL质粒的辐射增敏效应和诱导细胞凋亡的可能机制。方法:实验分为正常对照(Normal control)组、pEgr1-hsTRAIL组、6Gy X线照射组和pEgr1-hsTRAIL+6GyX线照射组。A549细胞经过阳离子脂质体转染、X线深部治疗机照射后,利用平板克隆形成试验检测细胞放射敏感性,反转录RCR(RT-PCR)法检测DR4和DR5mRNA表达变化,Western blotting法检测DR4和DR5蛋白表达的变化。结果:正常对照组和pEgr1-hsTRAIL组A549细胞的平均致死剂量(D0值)分别为3.26和1.91Gy,说明pEgr1-hsTRAIL质粒能够增强A549细胞的放射敏感性。RT-PCR显示,转染pEgr1-hsTRAIL质粒对DR4和DR5mRNA和蛋白表达水平无明显影响,而6Gy X线照射后DR4和DR5mRNA表达均显著高于正常对照组(P<0.05),转染pEgr1-hsTRAIL质粒后再进行6Gy X线照射,DR4和DR5mRNA表达水平均显著高于正常对照组(P<0.05),但只有DR5mRNA表达水平显著高于6Gy X线照射组(P<0.05)。Westernblotting结果显示,与正常对照组比较,DR4和DR5蛋白在pEgr1-hsTRAIL组无明显变化,而在6Gy X线照射和pEgr1-hsTRAIL+6Gy X线照射组表达增加,其中DR5蛋白在pEgr1-hsTRAIL+6Gy X线照射组增加更明显。结论:重组表达质粒pEgr1-shTRAIL能够增强A549细胞放射敏感性,且能增强DR5辐射诱导表达,而对DR4的辐射诱导表达无明显增强作用。

TRAIL和endostatin双基因-放射治疗对人血管内皮细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的:观察重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES携带的双基因TRAIL和endostatin联合X射线照射后,对血管内皮细胞ECV304增殖、周期和凋亡的影响。方法:实验分为对照组、空载体pshuttle转染组、TRAIL单基因重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL转染组、endostatin单基因重组质粒pshuttle-Egr1-shES转染组和TRAIL、endostatin双基因重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES转染组。细胞转染采用脂质体介导的方法进行,对照组不转染。细胞转染后给予X射线照射(照射剂量分别为0、0.1、0.5、1.0、2.0和5.0Gy),采用ELISA法检测转染细胞中TRAIL和endostatin蛋白的表达,并分别采用MTT及PI单染或/和AnnexinⅤ双染流式细胞术(FCM)检测TRAIL、endostatin单/双基因治疗联合放射治疗对ECV304细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。结果:2.0Gy X射线照射后与0h比较,各时间点转染pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES的ECV304细胞上清中TRAIL和endostatin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),分别于12和24h达峰值;不同剂量X射线照射可诱导TRAIL和endostatin蛋白表达,且蛋白表达水平随照射剂量的增加而明显升高(P<0.05或P<0.01)。MTT结果显示,X射线照射后,pshuttle-Egr1-shTRAIL、pshuttle-Egr1-shES和pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES组ECV304细胞A490值均明显低于对照组和pshuttle组,并显示一定的时间-效应和剂量-效应关系,并伴有细胞凋亡率明显增加、G2+M期细胞百分数明显上升和G0/G1期细胞百分数明显下降。上述细胞效应,尤以pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES组变化最为明显,与pshuttle-Egr1-shTRAIL和pshuttle-Egr1-shES组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:TRAIL和endostatin双基因联合放射治疗可抑制ECV304细胞生长,影响细胞周期进程,促进细胞凋亡,且其治疗效果优于单纯放射治疗或TRAIL/endostatin单基因-放射治疗。

IL-12联合B7-1基因放射治疗对小鼠B16移植肿瘤生长的影响

目的：探讨基因联合放疗对小鼠B16移植肿瘤的抑制作用。方法：碱裂解法提取纯化质粒DNA，微量注射法直接将质粒DNA导入体内肿瘤；建立荷瘤小鼠模型，于小鼠右后肢皮下接种5×10^5个B16黑色素瘤细胞，待肿瘤直径达0．3～0．5cm时开始治疗；肿瘤局部注射pNE-mIL-12和pcDNA—B7—1质粒3次，并给予3次X线照射，观察小鼠移植肿瘤的生长情况。结果：pNE-mIL-12重组质粒与pcDNA—B7—1质粒联合2Gy放射治疗组肿瘤生长速率最低，小鼠生存时间明显延长（P〈0．01～P〈0．001），末次照射后31d小鼠死亡率仅为22．2％，而且其中有1只小鼠肿瘤消退。结论：多基因联合放疗可有效抑制小鼠B16移植肿瘤的生长，其效果好于单基因治疗和单纯放疗。

多次小剂量pEgr-IFN-γ基因-放射治疗的抑瘤效应及其机制的研究

目的:探讨多次小剂量pEgr-IFN-γ基因-放射治疗对接种B16黑色素瘤小鼠的抑瘤效应及其免疫学机理。方法: 肿瘤局部注射脂质体包裹的重组质粒pEgr-IFN-γ后36 h,接受不同剂量X射线照射,观察各组小鼠照后不同时间肿瘤生长速 率和平均存活时间。照后第3天用RT-PCR法检测瘤内IFN-γ转录水平,ELISA法检测小鼠血清中IFN-γ含量,并于照后第15 天检测小鼠部分免疫学指标。结果:照后第9-15天,4次(质粒+5Cy)组小鼠肿瘤生长速率明显低于质粒+20 Gy组,且平 均生存时间明显延长;照后第3天质粒+20 Gy组瘤内IFN-γ转录水平明显高于质粒组,照后第1,3天血清中IFN-γ含量明显 高于质粒组和对照组,照后第15天脾脏NK细胞毒活性、IL-2和IFN-γ分泌活性均明显高于20 Gy照射组。结论:多次小剂 量基因-放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量基因-放射治疗。基因-放射治疗组可能通过诱导瘤内IFN-γ表达增强,使血液中 IFN-γ浓度升高,从而提高荷瘤机体免疫功能和抗肿瘤能力。

低剂量X射线诱导小鼠胸腺细胞蛋白质表达及生物活性

目的 :观察低剂量X射线照射的昆明小鼠胸腺细胞蛋白质表达及生物活性。方法 :采用SephadexG- 10 0凝胶过滤和高效液相分析 75mGy全身照射组和假照射组小鼠胸腺细胞蛋白质的表达 ,通过小鼠脾淋巴细胞转化和人外周血淋巴细胞染色体畸变检测蛋白质表达的生物活性。结果 :高效液相分析发现胸腺细胞 2 4 5kD蛋白质照射组明显低于假照射组 ,这种降低的蛋白质组分在终浓度为 6 2 5mg/L时 ,对ConA刺激正常小鼠脾淋巴细胞转化和X射线损伤人外周血淋巴细胞所致染色体畸变分别具有抑制和保护作用。结论 :低剂量辐射兴奋效应可能与2 4 5kD蛋白质的表达下调有关。

睫状神经营养因子cDNA的克隆、表达、纯化及生物活性测定

目的 :利用基因工程技术获得有较高生物学活性的睫状神经营养因子 (CNTF)蛋白。方法 :应用反转录 PCR技术直接扩增出人 CNTF c DNA,克隆入 p UC19载体中 ,用双脱氧法进行手工序列分析 ,构建表达菌株 p BV2 2 0 - CNTF/ DH5α。表达的蛋白质得到纯化 ,用鸡胚背根节无血清培养法检测表达蛋白生物学活性。结果 :所克隆的 CNTF基因序列与文献报道完全一致 ,p BV2 2 0 - CNTF/ DH5α能特异表达分子量大约为 2 6 0 0 0的蛋白质 ,表达量约为菌体总蛋白量的 35 %。 CNTF蛋白质经纯化后纯度约 95 % ,而且表达蛋白有很高的生物学活性。结论 :该研究结果为

骨髓间充质干细胞对放射性回肠损伤的病理观察

目的观察骨髓间充质干细胞（MSCs）在电离辐射诱发的空肠组织损伤中的迁徙、定居及修复作用。方法大鼠5GyX线全腹部照射，每隔72h照射1次，共5次，制备放射性回肠损伤动物模型。大鼠随机分成正常对照组、模型组及MSCs治疗组，在激光共聚焦显微镜下观察MSCs在回肠组织中富集情况。病理学观察MSCs对放射性回肠损伤的修复作用。结果MSCs经尾静脉注入2d即富集回肠组织内，7d后广泛分布在肠系膜血管周围。正常大鼠回肠黏膜结构清楚，模型组黏膜上皮细胞坏死脱落，以3d较重，累及全层细胞变性：治疗组的黏膜较相应的模型组厚，7d肠黏膜坏死较模型组轻。结论MSCs可以迅速地富集在放射性损伤的回肠组织中，促进回肠再生与修复。

同种异体大鼠骨髓间充质干细胞移植对放射性空肠损伤的修复作用

目的观察同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对放射性空肠的修复作用。方法全骨髓贴壁体外培养大鼠MSCs并进行DAPI标记。对大鼠行5 Gy X线全腹部照射,每隔72 h照射1次,共5次,制备放射性空肠损伤动物模型。取40只大鼠,随机分成正常对照组、模型及MSCs治疗组及DAP标记组。激光共聚焦显微镜下观察DAPI标记的MSCs在空肠组织中富集情况。病理学观察MSCs对放射性空肠损伤的修复作用。结果正常大鼠空肠黏膜结构清楚,隐窝深遂,腺体丰富,模型组7 d黏膜上皮细胞坏死脱落,隐窝几乎完全破坏,治疗组7 d黏膜坏死组织较少,黏膜增厚,30 d治疗组核分裂相增加,较模型组增加明显。结论成功建立放射性空肠损伤动物模型,MSCs可以促进空肠再生与修复。

诱导型一氧化氮合酶抑制剂抑制胃癌细胞增殖的实验研究

目的 :研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)选择性抑制剂氨基胍 (aminoguanidine ,AG)胃癌细胞增殖效果。方法 :采用MTT法观察AG在不同时间点对MFC细胞增殖的影响 ,Greiss反应法检测对细胞培养上清液中一氧化氮 (NO)含量的影响。应用HE和免疫组化 (SP法 )染色 ,计数肿瘤组织中微血管密度 (MVD)和iNOS阳性率 ,并分析其与AG抑瘤效应的关系。结果 :1)在 0 1～ 10 0mmol/L浓度下 ,AG对MFC细胞生长抑制率与 0 0 0 1mmol/LAG比较 ,P <0 0 1;AG对MFC细胞合成NO具有明显的抑制作用 (与 0mmol/LAG比较 ,P <0 0 1) ,但其作用并不呈时间依赖性。 2 )大、中、小剂量AG对小鼠胃癌移植瘤的抑瘤率分别为5 2 9%、47 1%和 3 5 3 %。MVD阳性率AG大 、AG中 组同对照组比较差异有统计学意义 ,P <0 0 1。iNOS阳性率AG大 、AG中 组同对照组比较差异有统计学意义 ,P <0 0 1。结论 :AG在体外通过阻断NO途径显著抑制MFC胃癌细胞的生长 ,在体内明显抑制小鼠胃癌移植瘤的生长和肿瘤组织中iNOS表达 ,并且能显著降低MVD。