治疗用武汉(Wu)抗人T淋巴细胞单克隆抗体与人体组织反应性的体外研究

应用免疫组化法及免疫细胞荧光法体外检测了WuT_3(抗CD_3)、WuT_4(抗CD_4)、WuT_3(抗CD_3)、WuT_9(抗CD_(71)或TfR)及WuTac(抗CD_(25)或IL-2R)等5种小鼠抗人T淋巴细胞单克隆抗体与25种正常人体组织的反应性。结果显示,上述单抗均与淋巴组织中各自靶细胞呈特异性阳性反应。此外,睾丸中散在分布个别WuT_3阳性淋巴细胞,WuT_9与26％的骨髓细胞及小肠粘膜肠腺底部细胞是阳性反应。本文尚探讨了上述单抗在临床治疗器官移植排斥反应等中的应用价值。

用单克隆抗体观察慢性肝炎患者细胞免疫状况的变化

本文用多种单克隆抗体对32例慢性肝炎患者的细胞免疫状况进行了研究。结果发现患者肝组织内淋巴细胞和单核、巨噬细胞浸润明显增加,坏死区浸润细胞主要是T_3^+和T_8^+细胞。B淋巴细胞浸润极少,浸润淋巴细胞表面IL—2受体阳性细胞与外周血淋巴细胞表面IL—2受体阳性细胞率均无改变。患者外周血单个核细胞改变为T_3^+下降,T_4/T_8比例下降,单核、巨噬细胞、B淋巴细胞及淋巴细胞表面HLA—DR、DP、DQ标志与正常人无差异。

武汉(Wu)系列抗入T细胞及其亚群单抗

本文报告了Wu系列抗人T及其亚群单抗按国际第三次人白细胞分化抗原专题讨论会要求进行检定的结果。这是国内第一套较全的OKT样系列单抗,即WuT1(OKT1,CD5);WuT3(OKT3,CD3);WuT4(OKT4,CD4);WuT6(OKT6,CD1a):WuT8(OKT8,CD8);WuT9(OKT9,抗转铁蛋白受体,抗TfR);WuT10(OKT10,CD38);WuT11(OKT11,CD2)及Wu-Tac(Tac,CD25)。

神经白细胞素的生物学功能

近年来,有关脑和免疫系统在分子水平上联系的研究日益受到重视。很多T细胞或B细胞表面的重要分子,诸如T细胞和B细胞抗原受体、MHC基因产物及CD4、CS8抗原等都存在与免疫球蛋白(Ig)的同源性区域,也就是说这些分子属于Ig超基因家族,该家族中的某些分子(如Thy-1和MRCOXZ抗原)同时在淋巴细胞和神经元上表达(1)而在神经系统中,对于细胞粘附起重要作用的神经元细胞粘附分子(N-CAM)和髓鞘相关糖蛋白(MAG)亦属于Ig超基因家族(2)。

外源性指导序列体外转换临床大肠杆菌氯霉素抗性表型的实验研究

目的 研究外源性指导序列(EGS)体外逆转临床分离大肠杆菌氯霉素抗性的能力。方法 构建针对氯霉素(Cm)乙酰转移酶(cat)并含卡那霉素(Km)抗性基因筛选指标的EGS重组质粒以及只含Km抗性基因但不含EGS的对照质粒。采用CaCl2方法将重组质粒导入临床分离的耐Cm大肠杆菌株中。通过质粒抽提、菌落PCR鉴定EGS阳性克隆子,分光光度计A600检测导入EGS质粒后耐Cm菌株在液体培养基中的生长率以及KB法检测在固体培养基中的药物敏感试验,探讨EGS分子逆转耐药菌的逆转效应。结果 以pEGFP-C1-EGS cat1+cat2重组质粒对16株临床分离的CmR大肠杆菌供试菌进行转化试验,EGS转化子在含Km的培养基上筛选。其中4株转化菌在Cm 100—200 μg/ml的液体培养基中生长受抑;在Cm 100-200μg/ml的固体培养基中药敏试验对Cm敏感;转化菌质粒抽提检测出特异EGS条带;菌落PCR扩增鉴定存在EGS。表明16株供试菌中4株临床分离株获得了耐药菌型的表型转换、耐Cm的大肠杆菌临床分离株恢复了对Cm的敏感性。结论EGS分子具有逆转临床耐药菌为敏感菌的能力。

杂交瘤细胞核糖核酸抗病毒作用

目的：从分泌抗狂犬病毒糖蛋白单克隆抗体（ＩｇＭ）杂交瘤细胞中提取核糖核酸，研究其抗狂犬病毒的作用。方法：腹腔注射该种核糖核酸４ｗ后用狂犬病毒ＣＶＳ株进行颅腔攻击。结果：该核糖核酸能明显延长动物的生存时间。结论：该核糖核酸对狂犬病毒且有一定的抵抗作用。

小鼠单克隆IgM抗体Fabμ片段的制备及其初步应用

在37℃和4℃下用胰蛋白酶消化小鼠单克隆IgM 4h和24h。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实,37℃下制备的小片段分子量(Mr)近50000(Fab),但免疫活性较低;4℃下制备的小片段Mr为80000～110000(Fabμ),免疫活性与原IgM基本一致。选用在4℃下经胰酶消化IgM 24h制备的Fabμ与辣根过氧化物酶连接,其结合物用于双抗体夹心酶联免疫吸附试验,取得了满意的结果。

应用人工合成的HIV nef蛋白肽制备抗nef单抗

本文用人工合成的HIV nef蛋白肽免疫Belb/c小鼠,应用活体融合法制备了11个抗nef单克隆抗体。ELISA测定表明,11个单抗均能与nef肽和nef蛋白反应,其中3、7、9、10和11号抗体与nef肽和nef蛋白的反应性相近似;4、5、6和7号抗体与nef蛋白的反应性明显比肽强。所有单抗均不与HIV的其它蛋白反应。应用免疫荧光检测抗nef单抗与HIV感染细胞的反应性表明,大部分抗体均与细胞浆着色,而无一般膜荧光的典型征象。

单克隆抗体Wu174的建立

用Ｎｕｌ细胞系Ｒｅｈ细胞免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＮＳ－１融合，运用人肾脏冰冻切片免疫酶染色法进行筛选，获得了一株能稳定分泌ＩｇＧ１亚类抗人普通型急性淋巴母细胞性白血病抗原（ＣＡＬＬＡ）单克隆抗体的杂交瘤细胞系，即Ｗｕ１７４。文中叙述了对单克隆抗体Ｗｕ１７４特异性的鉴定，并对其初步应用价值和抗细胞性单克隆抗体筛选方法的选择进行了讨论。

转铁蛋白受体在肝癌细胞上的表达

作者用抗转铁蛋白受体单克隆抗体抗TfR McAb,(D71)检测17例原发性肝癌患者肿瘤组织。发现14例肝癌细胞呈现特异性结合,阳性率为82.4％。其余3例肝癌细胞未检测到转铁蛋白受体(TfR),可能与肝癌细胞的分化程度或分泌程度有关。同时用抗A-FP单克隆抗体与CD71进行比较,发现肝癌胞细TfR含量高于A-FP含量。该发现为肝癌的诊断及导向治疗提供了新的较好的载体。

计算机在杂交瘤技术上的应用

本文首次报导了用DBASEⅢ语言设计的、在IBMXT计算机上实现的两个处理系统,即测定处理系统(TDS)和冻存处理系统(FDS)。在杂交瘤工作中,使单抗测定结果的记录和细胞冻存的信息实现了计算机化。文中还对TDS和FDS的特点和计算机在实验室中的应用前景进行了讨论。

抗纤维连接蛋白单克隆抗体的研制和应用

本文报道应用含血清培养液及无血清培养液进行细胞融合,共获得8株稳定分泌抗纤维连接蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株。Western Blot证实McAb仅识别220KD的Fn。角膜冰冻切片,McAb经PAP法显色,Fn分布带与文献报道相同。ELISA双抗体夹心法测定18例献血员血浆Fn含量,结果为0.342±0.026mg/ml,与文献报道极为相近,且重复性好。

一组分泌抗人粒细胞单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用正常人的外周血粒细胞免疫Balb/c小鼠,取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,用间接免疫荧光法及扁桃腺冰冻切片免疫过氧化物酶染色技术,从2次细胞融合中筛选并经克隆化得到一批稳定分泌抗粒细胞单抗的杂交瘤细胞系。对其中4株(FPMNI-FPMN4)杂交瘤细胞系所分泌的单抗作了系统的鉴定,证实它们是粒细胞特异性的单抗。

单克隆与多克隆双抗体夹心法测定可溶性白细胞介素2受体试剂盒的研制

采用抗白细胞介素2受体(IL-2R)的单克隆与多克隆抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG,建立了高特异性及高灵敏度的双抗体夹心法测定可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)。结果,酶联免疫吸附试验(ELISA)测得兔抗人IL-2R多克隆抗体效价达1:10~4,免疫双向扩散法测得羊抗兔抗体效价高达1:256。本试剂盒检测sIL-2R的特异性强,灵敏度为100U/ml,在28C存放一年,稳定性不变。此方法操作简单,适用于临床和基础研究。

用CD38单抗纯化膜抗原制备分泌不同同种型CD38单抗的杂交瘤

根据单抗的应用目的不同,人们常常需要免疫球蛋白不同类或亚类的单抗。因此,应用已知某一类型免疫球蛋白的单抗纯化相应抗原,建立分泌不同免疫球蛋白类或亚类的杂交瘤细胞系,具有实际应用价值。本文介绍用已知ISG_1亚类CD 38单抗建立分泌IgG2a亚类单抗杂交瘤细胞系的方法。

计算机在杂交瘤技术上的应用

本文首次报道了用DBASEⅢ语言设计的、在IBM XT计算机上实现的两个处理系统,即测定处理系统(TDS)和冻存处理系统(FDS)。在杂交瘤工作中,使单抗测定结果的记录和细胞系冷冻保存的信息实现了计算机化。文中还对TDS和FDS的特点和计算机在实验室中的应用前景进行了讨论。

CD4和CD8分子

CD_4和CD 8糖蛋白是免疫球蛋白(Ig)基因超家族的非多态性成员,存在于不同功能的T琳巴细胞亚群的细胞膜上。作为不同单克隆抗体(单抗)识别的分化抗原,在人类CD 4和CD 8又称为T 4/Leu 3和T 8/Leu 2。

免疫组化技术分析人淋巴组织的多种分化抗原

用间接免疫过氧化物酶和PAP技术检测本室制备的31种抗人分化抗原单抗与淋巴组织的反应性.结果表明,CD3、CD5单抗与扁桃腺和淋巴结的T细胞、大部分成熟髓质胸腺细胞和脾白髓的中央动脉周围淋巴鞘呈非常强的反应.CD4^+细胞在扁桃腺的分布与CD3^+细胞类似,但数量稍少.只有少部扁桃腺和淋巴结T细胞与CD8单抗反应,CD8单抗主要染大部分胸腺皮质细胞,但抗CD8单抗与脾窦的内皮细胞呈强阳性交叉反应.Wu59单抗同时与扁桃腺、淋巴结和脾脏的T、B细胞呈非常强的膜染色,并与胸腺皮质和髓质细胞呈阳性反应,该单抗可能识别白细胞共同抗原或LFA-1.Wu 26.145单抗除与扁桃腺生发中心呈弱阳性反应外,还与脾红髓窦状结构内的血小板呈强阳性反应.此外,抗B细胞及其亚群单抗与扁桃腺、淋巴结、脾白髓生发中心呈强阳性反应.抗IL-2受体单抗与上述组织基本上呈阴性反应。

细胞粘附分子的结构与功能

细胞粘附分子(CAMs)是一类能介导细胞间粘附的细胞表面糖蛋白。CAMs 种类繁多,依其在不同胚胎发育阶段的表达,可分成一级和二级 CAMs,本文着重介绍了神经元 CAM(NCAM)肝 CAM(LCAM)和神经元-神经胶质 CAM(NgCAM)的分子结构及部分功能。其中 NCAM 含有3个密切相关但又不完全相同的多肽链,分别称为(?)d、sd 和 ssd,3种多肽链的氨基末端区域的顺序相同,它们的差异仅表现在羧基末端区域,在氨基末端区 NCAM 还含有5个与 Ig 结构域具有同源性的环状结构。LCAM 则含有3个链内同源区。NgCAM 是一种二级 CAMs,它的表达能被神经生长因子增强,在结构上与小鼠 Ll 抗原相似。

抗人CD3单链抗体的构建、表达及纯化

采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从鼠抗人CD3杂交瘤细胞WuT3中扩增克隆出抗体重、轻链可变区基因,测序结果证实:V_H属鼠抗体重链可变区亚组Ⅱ(β)、V_L属鼠抗体Kappa轻链可变区亚组Ⅵ.将V_H、V_L基因片段克隆到单链抗体表达载体POPE51中,使V_H、V_L基因片段分别直接与一多肽连接子的两端相连,构建成单链抗体(ScFv)基因.克隆筛选证明,阳性克隆近100%.细菌用20μmol/L IPTG诱导培养,经固定金属离子亲和层析和分子筛凝胶过滤,从细胞间质中提取纯化ScFv,每升培养液可获得5mg纯度大于90%的ScFv.FACS活性检测结果表明,纯化的WuT3 ScFv与亲代结果一致.