甲病毒作为基因工程载体的研究进展

披盖病毒科的甲病毒用作基因工程载体有许多特殊的优点,在疫苗制备和基因治疗方面有巨大的应用潜力。最近已证明该系统可用于阻断虫媒病毒的传播,从而开辟了一个全新的研究领域。该系统可能特别适用于制备高效而安全的核酸疫苗。

HIV-1 gp41基因的高效表达及表达产物的纯化

为了获得高效表达的人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ１）ｇｐ４１蛋白，从而为ＨＩＶ１基因工程诊断抗原的国产化打下基础，用ＰＣＲ的方法从ＨＩＶ１全基因序列中扩增出编码ｇｐ４１Ｎ端的６９０ｂｐ片段。经酶切后，克隆到ｐＥＴ２８ａ载体中，再将重组质粒转化到表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，经ＩＰＴＧ诱导，高效表达出ｇｐ４１蛋白。间接ＥＬＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＳＤＳＰＡＧＥ电泳证实，该表达产物具有良好的抗原性和特异性，且表达量约占总菌体蛋白的４５％。重组蛋白经金属鏊合纯化，纯度达９９％。

狂犬病毒分子流行病学研究进展

本文综述狂犬病毒分子流行病学的新进展，包括该病毒的最新分类系统、ＰＣＲ技术的应用、各基因／血清型之间以及血清１型内各毒株的亲缘关系及流行特点等。

用脊髓灰质炎病毒作表达载体的研究进展

用脊髓灰质炎病毒(PV)减毒株构建的表达载体可分3种类型;PV抗原嵌合体、有缺损的PV杂交复制子和非缺损的PV杂交病毒。本文对这3种类型PV表达载体的研究进展进行综述。

腺病毒载体研究新进展

与其他真核基因表达载体相比,腺病毒载体在基因治疗方面已显示出独特优越性,并被广泛研究和应用.但由于未经改进的腺病毒载体往往诱导机体产生破坏性细胞免疫应答,从而导致重组腺病毒在体内表达短暂.近年来,一些新型腺病毒载体和宿主细胞系相继问世,腺病毒载体在基因治疗方面的应用也日益广泛,并成为基因治疗研究的焦点之一.一些进展主要表现在尽可能缺失更多的腺病毒基因并建立相应的互补细胞系.本文就近年来腺病毒载体的最新研究进展作一介绍.

湖北省1989～1992年A组轮状病毒分子流行病学研究

对１９８９～１９９２年在湖北省内收集的２４９份婴幼儿腹泻粪便标本用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、碳凝集试验（ＣＡＴ）试剂盒和ＲＮＡ电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳，ＰＡＧＥ）等３种方法检测Ａ组轮状病毒（ＲＶ）。这３种方法各有优点，可基本满足临床检测的需要。对部分阳性样品还用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法进行分型。共检出７种电泳型，３种血清型的Ａ组ＲＶ，另有１种毒株经ＰＣＲ鉴定型别特殊，有待进一步研究。在样品收集期间，有多种电泳型和血清型同时或交替流行，以血清Ｇ１型占优势，Ｇ２型次之，Ｇ３型较少。Ａ组ＲＶ的遗传多样性增加了预防和控制的难度。

人免疫缺陷病毒Ⅰ型包膜糖蛋白gp120基因在大肠杆菌中的高效表达

目的提高人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）包膜糖蛋白ｇｐ１２０基因在原核系统中的表达量。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增出５６０ｂｐ的ＨＩＶ－１ＬＡＶ株ｇｐ１２０Ｎ端基因片段，经ＥｃｏＲⅠ及ＳａｌⅠ酶切后插入高效表达载体ｐＥＴ２８ａ，得到重组质粒ｐＥＴ１２０，并转化表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３），经诱导高效表达出ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因片段。结果间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验表明，表达产物具有良好的抗原性及特异性。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析结果表明，ｇｐ１２０表达量占总菌体蛋白的５０％。

应用PCR-SSCP-EB染色法检测结直肠肿瘤P_53基因突变

运用PCR-SSCP-EB染色法对30例结直肠腺癌和18例结直肠腺瘤中P_53基因外显子5、6、7、8突变分别进行检测,结果显示腺癌、腺瘤中P_53基因突变率分别为66.7%和33.3%(P<0.05),高、中、低分化腺癌中P_53基因突变率分别为37.5%、62.5%和85.7%(P<0.05)。结果提示P_53基因突变与结直肠腺癌分化程度有关,在结直肠腺瘤向腺癌恶变过程中可能起着重要作用。PCR-SSCP-EB染色法是一种快速、简单且安全地检测基因突变的方法,适合在基层医院推广应用。

狂犬病毒糖蛋白及核蛋白在非复制型痘苗病毒天坛株中的共同表达

目的 提高重组痘苗病毒狂犬疫苗的有效性和安全性。方法 利用TK区表达狂犬病毒糖蛋白 (RG)的重组痘苗病毒作为亲本株 ,通过两步同源重组 ,删除痘苗病毒基因组CK片段间与毒力和宿主范围相关的核酸片段 ,同时将狂犬病毒核蛋白 (RN)基因插入C K片段之间 ,获得了含有RG基因和RN基因的非复制型重组痘苗病毒VTKRGΔCKLacZRN。结果 经PCR鉴定 ,RN基因已插入CK区 ;Westernblot结果显示 ,该株病毒能同时表达RG和RN ,相对分子质量 (Mr)分别为 6 5× 10 3 和 5 0 5× 10 3。VTKRGΔCKLacZRN在人源细胞如TK 143细胞中不能正常繁殖 ,在鸡胚成纤维细胞 (CEF)中能正常复制。与非复制型重组病毒VTKRGΔCK相比 ,VTKRGΔCKLacZRN免疫小鼠后能更快地诱生较高滴度的中和抗体 ,效果相当于复制型重组病毒VTKRG免疫组 ;它们均能保护小鼠针对致死剂量狂犬病毒国际标准攻击毒株 (CVS)的攻击。

表达狂犬病毒糖蛋白的非复制型重组痘苗病毒的构建与鉴定

目的提高表达狂犬病毒糖蛋白（ＲＧ）的重组痘苗病毒的安全性。方法将编码中国狂犬病毒５ａＧ株糖蛋白的基因，插入痘苗病毒天坛株的ＴＫ区，获得重组病毒ＶＴＫＲＧ，通过两步同源重组，删除ＣＫ片段间与痘苗病毒毒力及宿主范围相关的基因，得到非复制型重组痘苗病毒ＶＴＫＲＧ△ＣＫ。结果经ＰＣＲ鉴定，ＣＫ间的核酸片段被成功删除，其缺失性状能稳定地遗传。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ及间接免疫荧光结果表明，ＶＴＫＲＧ△ＣＫ能有效地表达ＲＧ。该病毒在鸡胚成纤维细胞中繁殖，在人源细胞如ＴＫ１４３中几乎不增殖。动物实验证实，ＶＴＫＲＧ△ＣＫ免疫小鼠后能诱生中和抗体并能保护小鼠抵抗致死剂量狂犬病毒（ＲＶ）的攻击。结论ＶＴＫＲＧ△ＣＫ具有良好的免疫原性和更高的安全性。