基于网络药理学和分子对接技术探究侧柏叶防治慢性牙周炎的作用机制

目的:基于网络药理学和分子对接方法探讨侧柏叶防治慢性牙周炎的作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP),筛选侧柏叶中的活性化学成分及可能作用的蛋白质靶点,通过UniProt数据库转换为Gene Symbol,利用OMIM数据库和GeneCards网站收集慢性牙周炎相关基因。选取交集靶点,利用Cytoscape软件绘制慢性牙周炎-侧柏叶-活性成分-靶点的网络图。利用STRING数据库构建基于交集靶点的蛋白质间相互作用(PPI)网络。借助Metascape平台,对靶点进行基因本体(GO)功能分类和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路的富集分析。利用MCODE插件确定关键基因簇,最后通过分子对接方法找到可能作用的靶点。结果:通过筛选得到侧柏叶主要活性成分7个,共获得98个防治慢性牙周炎的潜在靶点,KEGG通路富集、基因本体论(GO)分类富集结果显示,侧柏叶防治慢性牙周炎的机制涉及多个生物学过程,包括细胞对无机物的反应、细胞对化学刺激的反应等过程。蛋白-蛋白互作后发现关键基因簇,包括TP53、AKT1、白细胞介素(IL)-6等。分子对接结果表明,各靶点皆具有较为良好的亲合能。结论:侧柏叶治疗慢性牙周炎通过多成分、多靶点、多通路协同起效。

槲皮素通过PTEN/PI3K/JNK信号通路减轻小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症

目的:探讨槲皮素(quercetin,Que)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠巨噬细胞炎症模型的抗炎效应及其与第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号通路联合抗炎的效果和机制。方法:以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象。采用CCK-8实验确认0~100μmol/L Que的安全实验浓度。将细胞分为对照组、LPS炎症细胞模型组(LPS组)和不同浓度的Que处理LPS炎症细胞模型组(Que组)。Griess法检测各组细胞内一氧化氮(nitric oxide,NO)的分泌;ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达;RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法检测Que对各组细胞内PTEN/PI3K和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路蛋白的调节作用;利用PI3K抑制剂LY294002及PTEN外源过表达质粒探索Que与PI3K/PTEN的联合抗炎作用。结果:(1)对比LPS组,Que呈浓度依赖性地降低RAW264.7细胞内NO的分泌(P<0.05);(2)Que能显著降低LPS引起的iNOS、IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA表达(P<0.05);(3)与LPS组相比,Que组PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05),p-PI3K和p-AKT及p-JNK的蛋白水平显著下降(P<0.05);(4)LY294002的作用证实Que在RAW264.7细胞内抑制炎症反应与调控PI3K信号通路有关;(5)PTEN过表达实验证实PTEN可增强Que在RAW264.7细胞内的抗炎作用。结论:(1)Que在体外培养的小鼠RAW264.7细胞内具有抗炎活性,其机制与活化PTEN的表达、阻断PI3K/AKT及JNK信号通路有关。(2)PTEN可增强Que在RAW264.7细胞内的抗炎能力。