HO-1在血红素结合蛋白减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的评价血红素氧合酶-1(HO-1)在血红素结合蛋白减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法雄性SD大鼠180只,7~8周龄,体重250~280 g,采用随机数字表法分为5组(n=36):假手术组(SH组)、缺血再灌注组(I/R组)、溶剂组(V组)、血红素结合蛋白组(HPX组)和血红素结合蛋白+HO-1特异性抑制剂ZnPPIX组(HZ组)。采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血120 min后恢复灌注。再灌注即刻I/R组、V组、HPX组和HZ组侧脑室分别注射0.9%生理盐水10μl、0.1%NaN3溶液10μl、血红素结合蛋白1.86 g/L(用0.1%NaN3溶液稀释至10μl)、血红素结合蛋白1.86 g/L+ZnPPIX 20μmol/L(用0.1%NaN3溶液稀释至10μl)。分别于缺血前1 d和再灌注2 d时采用Morris水迷宫实验测试大鼠认知功能。再灌注7 d时,处死大鼠,取脑组织,检测伊文思蓝(EB)渗透率和含水量;采用Western blot法检测缺血半暗带区脑组织血管内皮钙粘蛋白(VE-cadherin)表达水平;采用RT-PCR检测血管生成素1(Ang1)和Ang2的mRNA表达水平,计算Ang1 mRNA/Ang2 mRNA比值;采用CD31/vWF免疫荧光双标染色法测定缺血半暗带区海马组织新生血管密度。结果与SH组比较,I/R组、V组、HPX组和HZ组再灌注2~7 d时逃避潜伏期延长,目标象限停留时间百分比降低,穿越原平台次数减少,再灌注7 d时脑组织EB渗透率升高,含水量、Ang1 mRNA/Ang2 mRNA比值、VE-cadherin表达水平和新生血管密度降低(P<0.05);与I/R组比较,HPX组再灌注2~7 d时逃避潜伏期缩短,目标象限停留时间百分比升高,穿越原平台次数增加,再灌注7 d时脑组织EB渗透率降低,含水量、Ang1 mRNA/Ang2 mRNA比值、VE-cadherin表达水平和新生血管密度升高(P<0.05),V组和HZ组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与HPX组比较,HZ组再灌注2~7 d时逃避潜伏期延长,目标象限停留时间百分比降低,穿越原平台次数减少,再灌注7 d时脑组织EB渗透率升高,含水量、Ang1 mRNA/Ang2 mRNA比值、VE-cadherin表达水平和新生血管密度降低(P<0.05)。结论HO-1参与了血红素结合蛋白减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的过程。