大黄鱼病原副溶血弧菌单克隆抗体制备及其应用

用甲醛灭活副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和溶藻弧菌(V.alginolyticus)制成免疫原免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得1株特异的针对副溶血弧菌的单克隆抗体,命名为D6F3H5。腹水及培养上清液抗体的ELISA效价分别为:1∶5 120和1∶1 280,该单克隆抗体与其它细菌没有明显的交叉反应。利用该单克隆抗体和兔抗副溶血弧菌多克隆抗体,建立了检测副溶血弧菌的双抗体夹心ELISA方法。该方法对副溶血弧菌的最小检出量为5×104个/mL。用双抗体夹心ELISA检测大黄鱼(Pseudosciaena crocea)样品,14尾患病大黄鱼中有11尾检出副溶血弧菌,而10尾健康大黄鱼都没有检出副溶血弧菌。由此可见,本试验制备的高特异性的抗副溶血弧菌单克隆抗体,可以用于患病大黄鱼副溶血弧菌的快速诊断。

弧菌和大肠杆菌感染对杂色鲍无细胞血淋巴中几种酶活力的影响

将杂色鲍(Haliotisdiversicolor)注射感染大肠杆菌(E.coli)和副溶血弧菌(Vibrioparahemolyticus),在感染后第4、8、12、24、48、96、192小时分别采集无细胞血淋巴,测定碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)和超氧化物岐化酶(SOD)的活力。结果表明,弧菌组ACP的活力在第24小时比对照组显著增高;弧菌组的ALP与对照组相比,在第8小时显著增高,第48小时极显著升高,第96小时显著下降。弧菌组的SOD活力在24小时与对照组相比显著降低。而大肠杆菌组ALP、ACP和SOD的活力跟对照组相比,各个时相均无显著差异。由此可见,杂色鲍对致病菌和非致病菌可能有着不同的免疫机制。

急性氨氮胁迫对于草鱼sod和hsp90基因表达及鳃部结构的影响(英文)

实验通过测定草鱼的24h半致死浓度,鳃的细胞结构以及sod和hsp90的表达模式研究了草鱼在组织学和分子生物学水平上对高浓度氨氮暴露的响应。经过半致死实验确定的氨氮24h LC50为243 mg/L试验中草鱼被置于5个浓度的处理组中(50、72、104、151、220 mg/L),之后取鳃组织进行组织切片分析,取肝脏、肠和鳃来测定sod和hsp90的表达情况。经过高浓度的氨氮暴露处理,鳃组织的细胞排列和结构产生了明显的变化,并且sod和hsp90的表达受到了显著的上调。这些结果表明,高浓度的氨氮能够损害鳃部的细胞结构并且诱导应激蛋白的表达。这个结果同样显示出,sod和hsp90可以作为评估草鱼氨氮暴露水平的良好指标。

七带石斑鱼染色体核型研究

采用PHA体内直接注射法制备了七带石斑鱼(Epinephelus septemfasciatus)头肾组织染色体标本并分析其核型。结果表明,七带石斑鱼二倍体染色体数为48,24对染色体均为端部着丝粒染色体,其染色体臂数(NF)为48,核型公式为:2n=48t,NF=48。未发现与性别相关的异型染色体,第24对染色体长度明显小于其他染色体。通过与其他22种石斑鱼染色体核型进行比较,发现七带石斑鱼具有石斑鱼属鱼类的原始核型特征,属于石斑鱼属鱼类的原始类群。

混合污染物联合毒性研究进展

环境污染物几乎都以混合物的形式存在。文章以污染物联合毒性研究的发展为主线,介绍了联合毒性定性研究方法(毒性单位TU法、加和指数AI法、混合毒性指数MTI法及相似参数λ法)和定量研究方法(以TU和λ为参数的方法和混合化合物的定量结构-活性相关QSAR法),简要概述了各方法的优缺点。发现目前已有的研究方法大都还停留在定性并逐步向定量发展的阶段,指出了其中借鉴单一化合物QSAR模型而发展起来的混合化合物定量结构———活性相关(M-QSAR)模型尚处在开始成型的"初级"阶段,但它是21世纪可持续发展的新生力量,它的发展必将推动我国环境污染化学的进一步发展,为污染物的生态风险评价提供更为可靠的科学方法和理论依据。

金门水厂原水中臭味物质去除的中试研究

金门地区水库富营养化严重影响饮用水水质。夏天藻类所产生的臭味以土霉味为主。土霉味主要来自于藻类代谢物二甲基异冰片和土臭素。利用活性炭处理工艺分别使二甲基异冰片、土臭素及嗅值的去除率达92%、83%及72%;而利用臭氧一生物活性炭工艺则可使二甲基异冰片、土臭素及嗅值的去除率分别达96.3%、100%及96.7%。组合工艺可有效去除臭味物质,但清水池加氯消毒所产生的氯臭味,使嗅值无法达到台湾地区的饮用水水质标准,因此要特别注意控制加氯量。

黄鳍金枪鱼巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的克隆与序列分析

采用同源克隆的方法、利用RACE技术从黄鳍金枪鱼(Thunnus albacares)肝脏中克隆了其MIF(TaMIF)的cDNA序列。TaMIF的cDNA全长706 bp含一个345 bp的开放阅读框,编码一个长115氨基酸的蛋白质。信号肽预测分析表明TaMIF没有信号肽。序列分析与进化分析表明,黄鳍金枪鱼与近海养殖鱼类MIF的氨基酸序列高度相似、进化地位相近,预示着深海鱼类TaMIF与近海养殖鱼类具有相似的生物学功能。研究结果是对深海鱼类MIF基因信息资料的重要补充。

中国近海习见头足类DNA条形码及其分子系统进化

应用DNA条形码通用引物扩增了11种中国近海习见头足类(Cephalopoda)共计97个个体的线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(Cytochrome CoxidaseI,COI)基因片段,与GenBank收录的19种95条头足类同源序列进行比对。结果表明,头足类COI基因存在碱基插入缺失现象,杜氏枪乌贼(Uroteuthis duvauceli)插入缺失位点数多达33个;碱基组成偏倚明显,A+T含量(66.70%)显著高于G+C(33.30%)含量。基于Kimura双参数模型计算,29个物种的种内平均遗传距离为0.0072,种间平均遗传距离(0.2024)是种内遗传距离的28.11倍。针对剑尖枪乌贼(Loligo edulis,Uroteuthis edulis,Photololigo edulis)分类和命名的分歧,DNA条形码分类结果显示,该物种与枪乌贼属(Loligo)和尾枪乌贼属(Uroteuthis)的COI基因同源性较低,不支持将其划归到Loligo或Uroteuthis。近爱尔斗蛸属(Pareledone)6个代表物种的种间遗传距离较小(0.0120～0.0385),对于此类变异程度较低的物种,DNA条形码仍可准确区分,但其种间遗传距离的阈值尚待深入探讨。系统发育树的聚类分析结果表明,COI基因在种、属水平的分类鉴定及其系统进化关系与传统方法所得结果一致性较高,分别为100%、91.67%;科、目水平的一致性略低,分别为80%和66.67%。可见,线粒体COI基因作为头足类DNA条形码在物种鉴定中适用性较高,亦适用于种属水平的系统进化分析,是形态学分类系统的必要补充和佐证。

硬骨鱼类渗透压的内分泌激素调节机制

在400多科20 000多种海淡水硬骨鱼类中,有些鱼类只能生活在淡水或海水中,有些鱼类则能自由出入海淡水。这些鱼类能够在盐度变化很大的环境中生存主要依靠鳃等渗透调节器官对盐分的调节。鱼类的鳃上皮组织绝大部分为扁平细胞,但具有离子调节功能的细胞却是那些为数不多的氯细胞。

雌雄半滑舌鳎脑垂体基因表达差异研究

为研究半滑舌鳎雌雄个体大小和生长速度差异悬殊的分子机理,采集来自同一亲本、同一发育阶段的半滑舌鳎雄鱼和雌鱼脑垂体,分别与Affymetrix的斑马鱼基因芯片杂交,筛选差异表达基因。芯片杂交结果显示二者共有1 051个基因检测到明显的杂交信号,其中上调基因486个,下调基因561个。进一步比较雄鱼和雌鱼杂交信号的比值(Ratio值),有39个基因的Ratio值小于0.6或大于1.5,其中sh3gl1b、meis2.1、acta1、Noxa、slc25a5这5种上调基因和col1a2、klf7、acta2这3种下调基因可能与半滑舌鳎雌雄生长差异相关。这一结果为深入研究半滑舌鳎雌雄性别分化与生长调控机制提供了新思路。

绵羊白细胞介素2基因的克隆与表达载体构建

从绵羊血中分离白细胞,提取绵羊白细胞RNA,利用RT-PCR、PCR扩增绵羊白细胞介素2(OvineIL-2)基因。将OvineIL-2PCR产物与TE载体定向连接,用SaLI和BamHI双酶切重组TE,利用低溶点胶回收500bp大小的片段;将其补平后与PPSD质粒连接,用EcoRI酶切鉴定,找出正向连接重组质粒。用BamHI酶切重组PPSD质粒,低熔点胶回收2500bp大小的片段;将其与经BamHI酶切去磷酸化的PME290表达质粒连接,筛选出阳性重组PME290,即为OvineIL-2基因表达载体。

腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊IL-2融合基因的分泌型表达

用改进的 Mg Cl2 法制备宿主菌株PAK/ 2 pfs感受态细胞 ;由 JM10 5工程菌中提取纤毛蛋白与绵羊白细胞介素 2 ( Pilin-IL-2 )融合基因表达载体 ,转化宿主细胞 PAK/ 2 pfs,筛选出具有 Pilin-IL-2融合基因表达载体的阳性克隆菌株 ;在营养肉汤中进行 Pilin-IL-2融合基因的表达。培养 16～ 18h后 ,离心 ,向上清液中加入饱和 ( NH4) 2 SO4提取 Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳 。

腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因在PAK/2pfs细胞中的表达与鉴定

将前期工作中筛选出的含有腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2(Pilin-IL-2)融合基因表达载体的PAK/2pfs工程菌[1]接种于营养肉汤,40℃培养16～18h,离心,向上清液中加入饱和(NH4)2SO4提取Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳,证明该融合蛋白具有特异性,且有较高的表达量。经SDS-PAGE电泳和Westernblot确证其为Pilin-IL-2融合蛋白。

饮料中合成色素赤藓红的快速检测

食品加工过程中添加的人工合成色素不仅不能提供营养物质,而且某些合成色素会危害人体健康,诱发中毒甚至癌症。赤藓红即是人工合成色素中的一种,常用于食品加工制品和饮料中,部分厂家为了改变产品外观,吸引消费者购买,滥用赤藓红色素。基于表面增强拉曼光谱(SERS)方法和便携式拉曼光谱仪,提出了一种赤藓红的现场快速筛查方法。该方法只需对疑似含有赤藓红的饮料进行简单的前处理,即可进行SERS检测。前处理和测试的总时长不超过15 min,检出限在0.5 mg/kg水平,有效满足现场快速检测的需要。