多色探针熔解曲线分析技术检测准广泛耐药肺结核的应用价值

目的:评价多色探针熔解曲线分析技术(multicolor melting curve analysis,MMCA)在准广泛耐药肺结核(pre-extensive drug-resistant pulmonary tuberculosis,pre-XDR-PTB)检测中的应用价值。方法:搜集2019年1月至2020年12月深圳市慢性病防治中心及深圳市各区级结核病防治机构登记的培养阳性且初次被鉴定为耐多药/利福平耐药肺结核(multidrug-/rifampicin-resistant pulmonary tuberculosis,MDR/RR-PTB)的129例患者的129份痰标本。对标本进行3种氟喹诺酮类(fluoroquinolones,FQs)药物[氧氟沙星(ofloxacin,Ofx)、左氧氟沙星(levofloxacin,Lfx)、莫西沙星(moxifloxacin,Mfx)]的表型药物敏感性试验(简称“表型药敏试验”)和MMCA检测,并使用Sanger测序方法对标本的检测结果进行验证。以表型药敏试验结果为参照,分析MMCA检测MDR/RR-PTB患者对FQs耐药性的效能。结果:以表型药敏试验结果为参照,MMCA检测MDR/RR-PTB患者标本对Ofx耐药的敏感度为87.0%(40/46),特异度为94.0%(78/83),Kappa值为0.813;检测MDR/RR-PTB患者标本对Lfx耐药的敏感度为97.3%(36/37),特异度为90.2%(83/92),Kappa值为0.822;检测MDR/RR-PTB患者标本对Mfx耐药的敏感度为92.3%(24/26),特异度为79.6%(82/103),Kappa值为0.565。将3种FQs的表型药敏试验结果合并,任意一种耐药即判定为FQs耐药,则MMCA检测MDR/RR-PTB患者标本对FQs耐药的敏感度为85.1%(40/47),特异度为93.9%(77/82),Kappa值为0.797。对疑似耐药的52份标本进行Sanger测序,其中96.2%(50/52)的标本的测序结果与MMCA一致,3.8%(2/52)的标本在MMCA的非检测区域存在突变。结论:MMCA与FQs表型药敏试验结果的一致性较高,可以用于检测pre-XDR-PTB。