丹参酮IIA对人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响

目的:观察中药有效成分丹参酮IIA(Tan IIA)对人成骨肉瘤MG-63细胞形态与超微结构和相关终末分化指标的影响,以鉴定其对肿瘤细胞终末分化的诱导作用。方法:0.5μg/mL丹参酮IIA处理MG-63细胞,光镜、电镜观察和免疫细胞化学检测系统研究MG-63细胞处理前后细胞形态、超微结构变化和成骨细胞相关终末分化蛋白的表达变化。结果:光镜与电镜观察结果显示经Tan IIA处理细胞产生了核质比例减小、异染色质减少、常染色质增多、细胞器丰富发达、细胞表面微绒毛减少等显著变化;免疫细胞化学检测显示处理后MG-63细胞Ⅰ型胶原蛋白、骨粘素和骨钙蛋白的表达呈阳性,并观察到钙化糖原颗粒增多和典型骨结节的形成。结论:丹参酮IIA能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并促进与成骨细胞相关的终末分化指标的表达变化,从而对人成骨肉瘤细胞的终末分化具有明显的诱导作用。

人参皂苷Rg1组合诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中Prohibitin的表达与定位变化

选择性抽提经人参皂苷Rg1组合(RCT)诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质,对prohibitin在核基质中的存在、分布及其与相关基因产物在RCT处理前后MG-63细胞中的共定位关系进行观察研究.蛋白质组学分析结果显示,prohibitin存在于人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在RCT处理后细胞核基质中表达下调;蛋白质印迹杂交确证了prohibitin在MG-63细胞核基质中的存在及其在RCT处理后下调变化;免疫荧光显微镜观察进一步证实prohibitin定位在核基质上,经RCT处理后出现分布位置与表达水平变化;激光共聚焦显微镜观察可见prohibitin与c-Fos、c-Myc、p53和Rb基因产物均存在共定位关系,并在RCT处理后共定位分布区域出现变化.本研究证实了prohibitin是一种新发现的核基质蛋白,其在核基质上的定位与表达在RCT诱导分化前后发生显著变化,并与相关癌基因、抑癌基因产物存在共定位关系.实验表明RCT处理引起的prohibitin的变化与人成骨肉瘤MG-63细胞的诱导分化与调控具有密切关系,为深入揭示RCT等中药有效成分诱导肿瘤细胞分化的机理提供了重要科学依据和深入探索的新方向.

人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响

为了研究人参皂甙Rg1对人成骨肉瘤MG-63细胞(以下简称"MG-63细胞")形态与超微结构及终末分化指标的影响,鉴定其对MG-63细胞的诱导分化作用,以50μg/mL人参皂甙Rg1处理MG-63细胞,光学显微镜与电子显微镜观察MG-63细胞形态、超微结构变化,免疫细胞化学方法检测成骨细胞相关终末分化蛋白的表达变化,并同步以HMBA处理MG-63细胞作为阳性对照.光学显微镜与电子显微镜观察结果显示细胞形态与超微结构产生了细胞形态规则、大小一致、细胞铺展体积增大,核质比例减小、核内核仁数目减少、细胞器丰富发达等与正常细胞相似的恢复性变化.观察到MG-63细胞终末分化指标I型胶原、骨粘素、骨钙蛋白的阳性表达及钙化糖原颗粒的增多与典型骨节结的形成,其变化结果与HMBA处理细胞类似.本研究证实人参皂甙Rg1能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并增强成骨细胞相关的终末分化指标的表达,从而对MG-63细胞的终末分化具有一定的诱导作用.

人参皂甙Rg1、肉桂酸与丹参酮ⅡA组合对体外人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响

目的研究中药有效成分人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮ⅡA组合（RCT）对人成骨肉瘤MG-63细胞的形态与超微结构改变和终末分化的影响，鉴定其对人成骨肉瘤细胞终末分化的诱导作用。方法以中药有效成分组合（33mg／L人参皂甙Rg1＋2mmol／L肉桂酸＋0．3mg／L丹参酮ⅡA）处理MG-63细胞7d，对照组与处理组样本各3次重复，免疫细胞化学检测及光镜与电镜观察系统研究RCT组合对MG-63细胞的细胞生物学效应。环六亚甲基双乙酰胺（HMBA）处理MG-63细胞作为分化诱导效果的阳性对照。结果免疫细胞化学检测显示，成骨肉瘤细胞终末分化指标I型胶原、骨黏素、骨钙蛋白的表达呈强阳性，并观察到钙化糖原颗粒增多与典型骨结节的形成；光镜与电镜观察结果显示，处理后的MG-63细胞产生了细胞形态规则，大小-致，细胞铺展体积增大，核质比例减小，核内核仁数目减少，细胞器丰富发达等趋向正常细胞特征的显著改变。结论RCT组合能显著改变MG．63细胞形态与超微结构恶性特征，并促进终末分化标志物的表达，从而对人成骨肉瘤MG-63细胞的终末分化具有显著诱导作用。

人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮IIA组合对成骨肉瘤MG-63细胞增殖与相关基因表达的影响

研究中药有效成分人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮IIA组合对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制和相关基因表达影响,探索其对肿瘤细胞的生物学效应。以33ìg/ml人参皂甙Rg1、296.32ìg/ml肉桂酸和0.3ìg/ml丹参酮IIA的组合(简称RCT)处理人成骨肉瘤MG-63细胞,以肿瘤细胞分化诱导物HMBA处理MG-63细胞为平行对照,用流式细胞仪、免疫细胞化学检测及光镜观察系统研究RCT组合对MG-63细胞的作用。生长曲线及细胞周期检测显示RCT组合可显著抑制MG-63细胞的增殖,细胞生长抑制率达72.37%,细胞周期阻滞于G0/G1期;免疫细胞化学检测显示RCT组合处理后MG-63细胞的癌基因c-fos、c-myc表达下调,抑癌基因p27、Rb表达上调。RCT组合对MG-63细胞增殖及相关基因表达的影响与分化诱导物六亚甲基双乙酰胺(HMBA)处理组相似。

维甲酸对SK-N-SH细胞增殖和相关基因表达的影响

目的:研究维甲酸对SK-N-SH细胞的增殖和相关基因表达的影响。方法:通过苔盼蓝排除法绘制细胞生长曲线、流式细胞技术测定细胞周期、HE染色光镜观察细胞形态改变以及SABC免疫细胞化学染色法观察维甲酸对SK-N-SH相关癌基因、抑癌基因表达的影响。结果:1μmol/L RA处理后,SK-N-SH细胞的增殖活动受到明显的抑制,处理第7天抑制率达36.16%;周期测定显示处理后出现明显的G0/G1期阻滞,由对照组的49.7%增加至62.7%,增加了26.2%;免疫细胞化学染色结果显示,处理后细胞癌基因c-myc、c-fos的表达较对照组明显降低,而抑癌基因p53、p27的表达则有所加强。结论:维甲酸能有效抑制SK-N-SH细胞的增殖活动,其对细胞的增殖抑制作用与RA下调c-myc、c-fos等癌基因以及上调p53、p27等抑癌基因的表达有关。

苯甲酸及其衍生物对菜青虫多酚氧化酶抑制作用

以菜青虫五龄虫为材料,分离提取多酚氧化酶,研究苯甲酸及其衍生物:p 羟基苯甲酸、p 氰基苯甲酸、p 环已基苯甲酸等对该酶催化L 多巴(L DOPA)氧化活力的影响.测定抑制作用的IC50分别为14.2、11.3、16.1和2.1mmol/L.研究了抑制剂作用的动力学,结果表明:苯甲酸和p 环已基苯甲酸对酶的抑制作用表现为非竞争性类型,其抑制常数分别为14.25和2.21mmol/L;p 羟基苯甲酸对酶的作用表现为竞争型抑制,抑制常数KI为7.21mmol/L;p 氰基苯甲酸对酶的作用表现为混合型抑制,抑制常数KI和KIS分别为14.31和27.34mmol/L.

银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制作用比较

报道银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶活力的影响.结果表明:银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶活力均有显著的抑制作用.测定导致酶活力下降50%的银杏叶和银杏外种皮提取物含量(IC50)分别为:6.59mg/mL和2.73mg/mL.对酪氨酸酶的抑制作用均表现为可逆抑制,抑制类型均为混合型.分别测定银杏叶和外种皮提取物对游离酶抑制常数(KI)和酶底物络合物抑制常数(KIS),并加以比较.

产物类似物对南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

以南美白对虾为材料,分离提纯N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶,研究产物NAG及产物类似物glu、gal、fru等对该酶催化水解pNp β D GlcNAc活力的影响.抑制强度次序为:NAG>gla>glu>suc>fru.研究抑制作用动力学,结果表明:NAG对酶的抑制作用表现为反竞争型,其抑制常数KIS为11.4mmol/L/;gal、glu、fru对酶的作用表现为竞争型抑制,抑制常数KI分别为0.709、0.747和2.94mol/L;suc对酶的抑制作用表现为非竞争型,抑制常数KI=KIS=2.58mol/L.

两种熊果甙同系物的合成及其对酪氨酸酶的影响

熊果甙作为化妆品添加剂具有增白效果,主要是由于它对皮肤酪氨酸酶有抑制作用.以葡萄糖为原料合成了两种熊果甙同系物:1 对异丙基苯基葡萄糖甙和1 对甲氧基苯基葡萄糖甙.并对其结构进行红外光谱分析.以熊果甙及上述其两种同系物为效应物,研究对酪氨酸酶酶活力的影响,以探讨抑制剂分子结构与其对酪氨酸酶抑制效果的关系.结果表明,这3种效应物对酪氨酸酶活性的抑制效果为:熊果甙>1 对异丙基苯基葡萄糖甙>1 对甲氧基苯基葡萄糖甙.

乙醇对南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力与构象的影响

以南美白对虾为材料,分离提纯N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶,研究乙醇对该酶的活力与构象影响.结果表明,浓度低于22%(体积比)的乙醇对该酶活力有明显的激活效应;乙醇浓度为8%时,达到最大激活效应,酶活力为纯酶的180%.动力学研究表明,在30%浓度范围内,乙醇对酶活性的激活及抑制作用均是可逆的.乙醇低浓度下,Km值与Vmax值随乙醇浓度增大而增大;随着乙醇浓度的进一步升高,Km值保持不变,Vmax值则出现下降.紫外光谱与荧光光谱分析表明,低浓度乙醇对N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶的构象产生轻微的影响,而高浓度乙醇则使酶的整体构象趋于松散.由此可以推断,乙醇对该酶的活力影响是微扰酶活性中心产生激活效应与引发整体变构失活效应的共同作用结果.

大孔吸附树脂浓缩火龙果色素的研究

探讨了吸附和洗脱火龙果色素的方法和条件.该色素在535nm处有最大吸收峰.S 8型大孔吸附树脂对火龙果色素具有较好的吸附能力.乙醇浓度对树脂上色素的解吸有影响,当浓度为40%时解吸效果最好.考察了不同进样速度下树脂柱的泄漏和不同的酸浓度对洗脱峰的影响,结果选择1.5mL/min的进样速度及0.2%HCl 40%乙醇溶液为洗脱剂.经吸附-洗脱循环,色素液浓缩17倍以上,回收率达93.4%,且色素浓缩液具有较好的稳定性.

海洋放线菌胞外多糖发酵工艺及其条件研究

以具有明显海洋特性的、产胞外免疫活性多糖的链霉菌2305菌株作为发酵菌种,对其胞外多糖的发酵工艺及其条件进行了研究,考察了不同碳源、氮源、水质、培养基初始pH值、发酵温度、通气量等因素对发酵菌种的生物量及胞外多糖产量等的影响,建立和优化了胞外多糖摇瓶发酵培养基配方、发酵工艺及发酵条件,胞外多糖产量达到4.58g/L,转化率达到6.90％。研究了发酵过程中菌体生物量、底物糖残余量、pH值、产物多糖积累量等的动态变化,分析讨论了2305菌株胞外多糖发酵的动力学类型。

仙蜜果花中酪氨酸酶抑制剂提取的探讨

仙蜜果属仙人掌科植物,可用作水果、蔬菜、花卉等,具有很高的经济效益和市场价值.本文分析比较了仙蜜果花不同部位(花瓣、花苞、花芯)以及不同提取方式对酪氨酸酶活力的影响,从而对仙蜜果中提取酪氨酸酶抑制剂的可行性进行探讨.经过比较,发现超声波萃取法提取酪氨酸酶抑制剂优于传统热回流法,醇提法优于水提法,仙蜜果花中花苞部位对酪氨酸酶抑制效果最好,经过石油醚萃取可进一步提纯酪氨酸酶的抑制剂.

蝾螺β-葡萄糖苷酶性质的初步研究

以海洋蝾螺(TurboPetholatusLinnaeus)内脏为原料,经匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵沉淀初步抽提,再经DEAE cellulose(DE 32)、SephadexG 200等柱层析纯化,获得较纯的β 葡萄糖苷酶.本文对β 葡萄糖苷酶的基本性质进行初步研究,结果表明:β 葡萄糖苷酶催化底物pNP G水解的最适pH及最适温度分别为pH5.5和45℃.β 葡萄糖苷酶在pH为4.5～6.5之间稳定.温度30℃以上则逐渐失活.其反应Km为0.076mmol/L(37℃).活化能Ea为15.4kJ/mol.金属离子对酶的作用表明,Cu2+,Hg2+,Pb2+有强烈的抑制作用,Fe3+,Cd2+,Zn2+浓度小于1.0mmol/L时,抑制较弱,但在浓度大于1.0mmol/L时,抑制明显;Mn2+,Ca2+在低浓度下对酶活力无明显影响,但在高浓度条件下有较强抑制作用,Mg2+略有激活效应.

有机溶剂对菜青虫多酚氧化酶活力的影响

以菜青虫五龄虫为材料,分离提取多酚氧化酶,研究有机溶剂乙醇、正丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇等对该酶催化L 多巴(L DOPA)氧化活力的影响.测定抑制作用的IC50分别为12.4、6.4、24.2、15.5和17.0%.抑制剂作用的动力学研究结果表明:乙醇、乙二醇和丙三醇对酶的抑制作用表现为非竞争性类型,其抑制常数KI分别为12.05、23.50和17.53mmol/L;正丙醇和丙二醇对酶的作用表现为混合型抑制,抑制常数KI分别为4.18和12.79mmol/L,KIS分别为19.45和22.41mmol/L.

H5N1亚型禽流感病毒M基因的克隆与分子进化分析

以一株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板，用RT-PCR方法，扩增M基因全长，将PCR产物克隆于pMD18-T载体，测序结果表明所克隆的982个核苷酸的片段包含了M1和M2基因的完整阅读框架，通过软件推导M1和M2基因分别编码252和97个氨基酸，将M全长序列与Genbank收录的10株H5N1亚型流感病毒M基因序列进行比较，病毒株之间M基因核苷酸序列同源性为92．3％～99．3％，编码的两个蛋白M1和M2氨基酸序列间同源性分别为为96．0％-98．8％和92．9％～99％，分子进化分析揭示了病毒株间的亲源关系．

霍乱弧菌CTB基因的克隆、表达及重组蛋白活性分析

霍乱弧菌CTB蛋白具有免疫佐剂活性。根据已发表CTB基因的序列设计一对引物，从一株霍乱弧菌中扩增出CTB基因，测序后发现该基因全长375bp，与国内分离的六株CTB基因的同源性达96．0％-99．2％。将该基因与pTWIN1连接构建了原核表达载体pTWIN1-CTB，重组表达载体转化BL21（DE3）表达菌株，0．8mmol／LIPTG诱导4h后，收获的细菌总蛋白SDS—PAGE电泳显示CTB在原核表达系统中得到表达，融合蛋白大小与理论值符合，蛋白产量占细菌总蛋白的20％左右，主要以包涵体形式存在，Western杂交和GM1-ELISA结果表明重组蛋白具有免疫原性和粘膜佐剂活性。

LTB融合禽流感病毒M2e基因在毕氏酵母中的表达

禽流感病毒一直是家禽和家畜健康养殖的巨大威胁,之前的研究表明,原核系统中表达的LTB和M2eHBc+融合基因的产物能有效诱导免疫动物对禽流感病毒M2e多肽产生特异性的粘膜免疫应答.酵母作为生物反应器应用于生物制品生产具有独特的优点.本研究构建了pPIC9K-LBM2eHBc+酵母表达载体并对酵母GS115进行了遗传转化,甲醇诱导表达结果表明LBM2eHBc+融合基因在酵母细胞中得到表达,表达出的融合蛋白能够被M2抗体识别.

展示M2e表位的颗粒疫苗制备及其免疫原性分析

疫苗接种是控制禽流感发生的主要措施之一,利用病毒保守的M2蛋白开发具有交叉免疫保护力的基因工程亚单位疫苗。将M2蛋白的膜外区(M2e表位)与HBcAg采用重叠延伸PCR技术构建融合基因M2eHBc+,然后将融合基因进行原核表达并检测了表达产物的动物免疫效果。结果表明,融合基因M2eHBc+能在原核系统中高效表达,表达蛋白能够被M2抗体识别,具有良好的抗原性,纯化出的重组蛋白可以自主包装成病毒样颗粒结构,能诱导小鼠产生M2e特异性抗体。M2e表位在重组蛋白颗粒中得到有效展示,为开发具有交叉保护力的禽流感亚单位疫苗打下了基础。