绞股蓝、乌龙茶抗肿瘤实验研究

侧重探讨药物在体内环境中产生效应的过程 .以地产绞股蓝和当地习惯饮用的乌龙茶直接给动物饮用 ,观察它们的抗肿瘤作用 .结果 :饮用 15 0 mg/只 /日绞股蓝、30 mg/只 /日乌龙茶的荷瘤鼠生存期较饮水组明显延长 (P<0 .0 5 ) ,开始发生死亡的时间推迟 7～ 8d,并对瘤体早、中期增长速度有明显抑制作用 (P<0 .0 5～ 0 .0 0 1) ,且外观生存质量也好于饮水组 .但绞股蓝在 30 mg/只 /日浓度时却无上述作用 .另外 ,乌龙茶体外对于多种肿瘤细胞株增殖均有较强抑制作用 ,以 2 0 0 μg/ m L浓度作用最强 ,抑制率均 >86 .2 %

Fas/FasL的特性及其与免疫系统和肿瘤细胞的相关性

研究肿瘤的最大困惑之一就是为什么体内免疫系统几乎不能消灭肿瘤细胞,肿瘤细胞如何逃逸免疫系统的监测而生存?最新研究表明,肿瘤细胞逃逸免疫系统攻击的重要机制之一就是由于存在Fas/FasL系统[1,2].

恶性肿瘤患者血清中免疫球蛋白类型的剖析观察

目的：评价恶性肿瘤患者的免疫球蛋白反应类型。方法：将血清免疫球蛋白（Ｉｇ）剖解为游离和复合两部分进行研究。以食管癌、喉癌、胃癌、乳腺癌、子宫癌、鼻咽癌、卵巢癌和非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）与健康者分别为实验组和对照组。结果：患者游离Ｉｇ的变化与总Ｉｇ一致，而复合Ｉｇ则与之不同，对其的检测更有利于对患者免疫状况的评价。从而说明，既往有关血清Ｉｇ含量的测定，主要反映游离Ｉｇ部分的免疫反应状况。结论：免疫反应产物的剖解分析可以更进一步认识免疫反应本质。在对肿瘤患者Ｉｇ比例的研究中，发现肿瘤患者的复合ＩｇＧ普遍严重下降。从而认为特异性ＩｇＧ水平的明显下降是患者免疫功能降低的重要原因，并提出深入研究其机理。

视黄酸对胃癌细胞生长和p53及c-myc基因表达的影响

目的：探讨视黄酸对胃癌细胞生长和基因表达的影响。方法：以ＭＴＴ法测定细胞生长，软琼脂集落形成实验测定癌细胞恶性程度，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ测定ｐ５３及ｃｍｙｃ基因表达水平。结果：１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）能够有效地抑制ＭＧｃ８０３和ＢＧＣ８２３细胞生长，但不能抑制ＭＫＮ４５细胞生长；ＡＴＲＡ还能够降低３株胃癌细胞形成集落的能力。ＭＧｃ８０３和ＢＧＣ８２３细胞经ＡＴＲＡ诱导后，ｐ５３基因的表达水平提高，ｃｍｙｃ基因的表达水平下降，但ＭＫＮ４５细胞中ｐ５３基因和ｃｍｙｃ基因表达与ＡＴＲＡ诱导无关。视黄酸受体ＲＡＲα基因在３株细胞中呈低水平表达，经ＡＴＲＡ诱导后，在ＭＧｃ８０３和ＢＧＣ８２３细胞中表达水平提高，但在ＭＫＮ４５细胞中表达水平不变。

视黄酸对胃癌细胞周期的调控

视黄酸(RA)能够抑制许多类型癌细胞生长、诱导细胞凋亡和调节细胞周期。本文研究了全反式视黄酸(ATRA)对人胃癌细胞的作用机理。结果表明,ATRA通过诱导细胞滞留在G_0/G_1期而显著抑制胃癌细胞生长,但ATRA不能诱导胃癌细胞凋亡;ATRA调控细胞周期与c-myc、磷酸化Rb水平的下调和p21^(WAF1/CIP1)、p53水平的上调有关,而cyclinD_1和CDK_4水平没有明显变化。在RA抗性细胞中,ATRA不能调节这些基因表达。结果证实,ATRA对胃癌细胞生长抑制与其诱导细胞滞留在G_0/G_1期有关,而与细胞凋亡的诱导无关,许多重要的、与周期相关的分子,包括cmyc、p21~(WAF1/CIP1、p53和Rb等参与细胞周期的调控。

视黄酸对胃癌细胞的诱导分化及其相关酶活性的影响

目的研究视黄酸对胃癌细胞的诱导分化及其相关酶活性的影响。方法１０－６ｍｏｌ／Ｌ的全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）处理胃癌细胞株ＢＧＣ８２３和ＭＫＮ４５，用流式细胞术检测细胞周期的分布，以酶标仪测定相关分化标志酶的活性，用３ＨＴｄＲ掺入法测定ＤＮＡ合成速度和ＭＴＴ法检测细胞的生长。结果ＡＴＲＡ使ＢＧＣ８２３细胞出现Ｇ０／Ｇ１期停滞，分化标志酶ＬＤＨ、ＡＬＰ和βＧ的活性下降，抑制率分别为２２４％，３２９４％和４１３５％，使ＤＮＡ合成速率下降４１４３％，生长抑制率为６１０３％；但不能改变ＭＫＮ４５细胞的上述指标。结论ＡＴＲＡ能诱导ＢＧＣ８２３细胞分化并抑制其恶性生长，对ＭＫＮ４５细胞则没有这种作用。

二色桌片参酶解液对转化细胞的效应

用二色桌片参（Mensamariaintercedens）酶解液处理转化的人胚肺成纤维细胞（NLF）后，细胞生长受到显著抑制，抑制率达64．84％，光镜下细胞透光性加强，铺展较好，细胞核形更为规则，核畸形现象减少；线粒体结构趋于正常；软琼脂集落实验表明，细胞集落形成率由23ｘ10－5下降至12．5ｘ10－5，裸小鼠致瘤实验显示抑瘤率为82．39％，差异显著（p＜5％）。结果提示，二色桌片参酶解液可能逆转转化的HLF细胞的恶性表型，对其有一定的诱导分化作用。

bax基因促进细胞编程死亡的机理研究

ｂａｘ基因促进细胞编程死亡的机理研究曾桂生，陈亚兵，温龙平，俞春东，蔡毓（厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室厦门３６１００５）１９８０年ＷｙｌｌｉｅＡ．Ｈ．等通过糖皮激素诱导胸腺细胞死亡的实验，提出了细胞编程死亡（ＰｒｏｇａｍｍｅｄＣｅｌｌＤｅａｔｈ...

全反式视黄酸对癌细胞凋亡的诱导

目的：探讨全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）对乳腺癌细胞生长抑制和对细胞凋亡诱导的机理。方法：采用荧光显微术、流式细胞术、ＭＴＴ测定和ＲＮＡ印迹等方法，检测细胞凋亡、细胞生长和ｍＲＮＡ的表达水平。结果：１）ＡＴＲＡ能够有效地诱导ＺＲ－７５－１乳腺癌细胞凋亡，但不能诱导ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳腺癌细胞凋亡。２）ＡＴＲＡ能够有效地抑制ＺＲ－７５－１细胞的生长，但不能抑制ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞生长。３）ＡＴＲＡ能够诱导ＺＲ－７５－１细胞的视黄酸受体ＲＡＲβ的表达，但不能诱导ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞的ＲＡＲβ表达。结论：ＡＴＲＡ诱导的细胞凋亡与其对ＺＲ－７５－１细胞生长抑制有关，对ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞生长及凋亡无影响，ＲＡＲβ的表达可能介导ＡＴＲＡ诱导的细胞凋亡和细胞生长抑制过程。

Bcl-2基因加强表达对SK细胞编程死亡的效应

TNF和OA诱发人神经母细胞瘤SK细胞编程死亡(PCD)。将编码Bcl-2完整蛋白质的cDNA植入pXJ 41neo载体中,由HCMV病毒启动子控制其表达。形成的正向(pBcl-2-S)及反向(pBcl-2-AS)表达质粒经转染导入SK细胞中获得稳定转染子。Western印迹表明正向转染子表达较大量的26kd Bcl-2蛋白,而反向转染子则不表达。增强表达的Bcl-2基因产物能抑制由TNF引发的PCD,但不影响由OA引发的PCD,从而证明Bcl-2基因产物抗细胞死亡效应的特异性。

利用GFP示踪细胞内源性P53活性检测DNA损伤

ＤＮＡ损伤的检测对预防癌症和遗传病等非常重要。采用分子克隆技术，将报告基因—绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）置于ＳＶ４０基本启动子调控下，构建成对照载体ｐＳＶ－ＧＦＰ。在ＳＶ４０基本启动子上游插入寡核苷酸Ｐ５３ＲＥ，构建成示踪载体ｐ５３ＲＥ－ＧＦＰ。转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，以ＧＦＰ示踪细胞内源性Ｐ５３的转录激活活性。紫外线照射或Ｈ２Ｏ２处理转化细胞使ＤＮＡ损伤，诱导细胞内源性Ｐ５３的表达。用激光扫描共聚焦成像系统（ＬＳＣＩＳ）对细胞进行红、绿、蓝三色光融合成像，并测定ＧＦＰ经４８８ｎｍ激发后发出的绿色荧光光密度，验证ＧＦＰ示踪Ｐ５３的特异性。ｐ５３ＲＥ－ＧＦＰ转化细胞３Ｔ３－ＲＥＧ经紫外线照射或Ｈ２Ｏ２处理后，ＧＦＰ的表达增高，处理后１ｈｒ光密度即达到最高水平，随后逐渐降低。血清“饥饿”—非ＤＮＡ损伤处理的３Ｔ３－ＲＥＧ细胞，以及经紫外和Ｈ２Ｏ２处理的对照载体ｐＳＶ－ＧＦＰ转化细胞３Ｔ３－ＳＶＧ，ＧＦＰ的表达无明显增强。实验表明：ＧＦＰ示踪内源性Ｐ５３转录激活活性用于检测ＤＮＡ损伤有很高的灵敏度和特异性，适宜推广应用。

CDKs和CKIs在胃癌细胞周期调控中的相关性

研究 CDKs和 CKIs在调节胃癌细胞周期进程中的作用表明 ,全反式视黄酸 ( ATRA)通过诱导细胞滞留在 G1/G0 期而抑制胃癌细胞生长 .Western blot分析显示 ,ATRA可上调 p2 1 waf1/ cip1的表达 ,而抑制 p1 6ink4 的表达 .免疫沉淀及活性测定表明 ,CDK2 激酶活性可被 ATRA抑制 ,而CDK4 活性先被诱导上升 ,2 4 h后逐渐下降 .另外 ,ATRA可以调节 Rb蛋白的磷酸化和 c- myc蛋白的表达 .由此证实 ,ATRA诱导胃癌细胞滞留于 G1/G0 期与其上调 p2 1 waf1/ cip1的表达和抑制CDK2 和 CDK4 激酶活性 ,进而抑制 Rb蛋白的磷酸化和 c- myc的表达有关 . Rb蛋白是 ATRA抑制胃癌细胞生长的下游调节因子 .另外 ,p1 6ink4 的功能在胃癌细胞中可能丧失 .

二色桌片参酶解液的抗胃癌细胞MGc80-3作用

用二色桌片参［Ｍｅｎｓａｍａｒｉａｉｎｔｅｒｃｅｄｅｎｓ（Ｌａｍｐａｒｔ）］酶解液处理培养的人胃腺癌细胞ＭＧｃ８０－３后有如下效应：对其生长的抑制率可达３２．７５％，经处理后细胞铺展更好，透光性较好，细胞表面较光滑，微绒毛少，核膜规则而光滑，核仁明显．在软琼脂中的集落形成率由０．０１６７％下降为０．００４５％．Ｃｏｎ－Ａ介导的细胞凝集率在１００μｇ／ｍＬ浓度中下降４０．２个百分点，在２００μｇ／ｍＬ中下降３５．４个百分点；对裸小鼠致瘤的瘤重下降３３．０７％．结果表明二色桌片参酶解液对该胃癌细胞的生长有一定的抑制作用，对其恶性表型有一定的逆转作用．

Caspase家族与细胞凋亡

Caspase家族的研究,对于了解细胞凋亡途径及各种相关疾病的诊治和药物的开发有重要作用。本文概述了这一家族的研究进展,介绍它们成员、分布、作用底物、抑制剂、可能的作用途径等。

Bcl—2基因表达对TNF及OA诱发的细胞编程死亡的不同效应

用ＴＮＦ和ＯＡ（Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ）诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞死亡，并证明细胞死亡为编程死亡（ＰｒｏｇｒｍｍｅｄＣｅｌｌＤｅａｔｈ，简称ＰＣＤ）。将编码Ｂｃｌ－２全长蛋白的ｃＤＮＡ植入ＰＪＸ４１ｎｅｏ载体中，使其表达由ＨＣＭＶ病毒起动子控制。形成的顺义（ｐＢｃｌ－２－Ｓ）及反义（ｐＢｃｌ－２－ＡＳ）表达质粒经转染导入ＳＫ细胞中获得稳定转染子。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹表明顺义转染子表达大量的２６ｋｄＢｃｌ－２蛋白，而反义转染子则不表达。增强表达的Ｂｃｌ－２蛋白能抑制由ＴＮＦ引发的ＰＣＤ，但不影响ＯＡ引发的ＰＣＤ，从而证明了Ｂｃｌ－２基因产物抗细胞死亡效应的特异性。

视黄素诱导的癌细胞凋亡及其对癌细胞生长抑制的相关性

以不同的受体选择性视黄素处理乳腺癌细胞，通过荧光显微术、ＴｄＴ测定和细胞生长测定，分析视黄素诱导的癌细胞凋亡及其对癌细胞生长抑制的相互关系；将受体ＲＡＲα基因转染乳腺癌ＭＢ－２３１细胞，发现受体转染与细胞凋亡诱导有关；ＲＡＲ和ＲＸＲ受体选择性视黄素联合使用，对诱导癌细胞凋亡和抑制癌细胞生长具有加强作用．结果证实，视黄素能够诱导乳腺癌细胞的细胞凋亡，并与抑制癌细胞的恶性生长相一致，这可能是视黄素抗癌作用的机制之一．

Tat碱性结构域-Bcl-Xs融合蛋白与细胞短暂共培养可诱导细胞程序性死亡

艾滋病毒的 Tat蛋白碱性结构域的 1 3个氨基酸的多肽能自主穿越细胞膜并将与之融合表达的其他蛋白带入细胞 .为探讨融合表达的蛋白是否可保持原有的主要生物学功能 ,将 Bcl- Xs蛋白与 Tat碱性结构域在大肠杆菌中融合表达 ,重组蛋白 Tat- Bcl- Xs与 CHO、CNE、Hela和 772 1细胞共温育一段时间后 ,细胞均可见明显生长抑制 ,同时细胞变圆、变小、细胞核收缩 ,并有染色体凝聚、边缘化 ,或细胞核分裂为小核的现象 ,同时出现梯状 DNA,为较典型的细胞程序性死亡 ( PCD)表现 .同时发现放线菌素 D、雷公藤内脂醇与 Tat- Bcl- Xs在诱导细胞 PCD时存在交互作用 .提示Tat- Bcl- Xs蛋白可自主进入细胞内 ,并保持了 Bcl- Xs蛋白的 PCD诱导作用 ,初步证实了利用 Tat碱性结构域进行药物设计的可行性 ,同时也提示 Tat- Bcl-

COUP-TE和RAR β受体的表达影响癌细胞对视黄酸的敏感性

视黄酸(RA)通过其受体RARs和RXRs发挥作用。Northern blot显示,RARβ的表达介导RA对癌细胞的生长抑制作用。然而,其它的结果表明,RARβ的表达还不能完全驱动癌细胞对RA的应答,由此提示,癌细胞的RA敏感性除了受RARβ影响外,还受其它因子影响。COUP-TF则是其中的一个因子。凝胶阻抑测定和CAT测定表明,COUP-TF通过降低βRARE的基础转录活性来加强癌细胞的RA敏感性。结果证实,RARβ和COUP-TF受体的表达能够调节癌细胞对RA的敏感性。