积雪草酸对高脂血症金黄地鼠的血脂调节及肝脏保护作用研究

目的研究积雪草酸(asiatic acid,AA)对饮食性高脂血症金黄地鼠的血脂调节和肝脏保护作用,探讨其降脂机制。方法将48只叙利亚金黄地鼠随机分为6组,分别为正常对照组、高脂血症模型组、阳性对照药血脂康组(250 mg/kg)、AA低剂量组(8 mg/kg)、AA中剂量组(16 mg/kg)和AA高剂量组(32 mg/kg)。正常组给予普通饲料,其余各组均给予高脂饲料造模,自由进食和饮水。同时灌胃给药,正常组和模型组按体重给予溶媒(Tween 80:去离子水=1∶19),其余各组给予相应受试药物。4周后测定血清总胆固醇(total cholestrol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(10w-density lipoprotein)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein)、谷草转氨酶(aspartate transaminase)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase)水平,肝脏超氧化物歧化酶(superoxide dismutase)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)水平以及观察肝脏结构变化。同时采用实时荧光定量PCR方法考察肝脏中卵磷脂胆固醇酰基转移酶(lecithin cholesterol fatty acyl transferase)和B类Ⅰ型清道夫受体(class B typeⅠscavenger receptor)mRNA的表达。结果与模型组相比,除AA高剂量组外,其余各给药组TC、TG、LDL-C、TC/HDL、AST、ALT水平均显著降低,SOD活性及GSH-Px水平均显著升高(P<0.01)。HE染色结果显示AA给药后抑制了高脂血症金黄地鼠的肝脏脂肪性病变。荧光定量PCR结果显示AA各给药组金黄地鼠肝脏中LCAT和SR-BⅠmRNA表达水平增加。结论 AA可有效调节血脂,并通过降低AST、ALT水平和抗氧化作用减轻高脂血症金黄地鼠的肝脏损伤。AA的降血脂机制及保护肝脏作用,可能与其增强LCAT和SR-BⅠmRNA的表达有关。

红杜仲不同乙醇浓度提取物对HaCaT细胞抗氧化作用的比较及其抗氧化机制的研究

目的本研究对红杜仲不同乙醇浓度提取物抑制H_2O_2诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤作用进行筛选。方法以不同浓度乙醇进行回流提取分别获得了30%、50%、70%及95%乙醇提取的四种红杜仲醇提取物(Parabarium micranthum ethanol extract,PEE),利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH)法测定其体外清除自由基的能力。以人永生化表皮细胞HaCaT为研究对象,通过不同浓度H_2O_2处理细胞并筛选以200μmol/L作为建立H_2O_2诱导的氧化应激损伤模型的最适浓度。设立对照组、H_2O_2损伤组和红杜仲-H_2O_2组。通过微板法和比色法测定内源性抗氧化酶活力及细胞存活率,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针检测细胞内氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平,逆转录PCR测定Nrf2 mRNA表达量。结果不同乙醇浓度提取的PEE在体外均具有清除DPPH自由基的作用,效果最强的70%乙醇提取的PEE的IC(50)为7.6 mg/L;在细胞水平上,H_2O_2诱导使得HaCaT细胞内抗氧化酶SOD及CAT活力降低,50%、70%及95%乙醇提取的PEE能够显著提高细胞内抗氧化酶活力。其中70%乙醇提取的PEE的作用最为显著,抗氧化酶活力的提高表现出剂量依赖性,并且能显著提高细胞存活率、降低细胞内ROS的水平(与氧化应激组比,P<0.05或P<0.01)。同时,70%乙醇提取的PEE能够显著诱导抗氧化相关信号通路基因Nrf2 mRNA的表达。结论 70%乙醇提取的PEE可能通过激活Nrf2抗氧化信号通路,提高抗氧化酶活性,降低ROS水平,从而具有保护HaCaT细胞免受H_2O_2诱导的氧化损伤作用。

红杜仲的美白活性及其途径研究

目的研究红杜仲的不同乙醇浓度醇提物对黑色素瘤B16细胞系酪氨酸酶活性、黑素合成的影响,初步探讨红杜仲作为皮肤美白剂或色素沉积药物的可行性。方法以不同浓度乙醇进行回流分别获得30%、50%、70%、95%乙醇提取的得到4种红杜仲醇提物(PEE30、PEE50、PEE70、PEE95),选取对蘑菇酪氨酸酶抑制活性最强的提取物;再以B16造模,采用MTS法、Na OH裂解法、L-DOPA氧化法分别测定其对B16细胞的影响;Western blot检测PEE作用后Tyrosinase、TRP-1蛋白表达水平的变化。结果各红杜仲醇提物在体外均具有抑制蘑菇酪氨酸酶的作用,效果最强的为PEE70。在不影响B16细胞的浓度内,PEE70明显降低B16细胞酪氨酸酶活性和黑素的合成量(P<0.001)。Western blot结果表明,PEE70能够显著抑制黑素合成相关蛋白Tyrosinase、TRP-1的表达。结论 PEE能直接抑制B16细胞黑色素的合成,可用于美白产品或者色素沉积药物的开发,且上述变化通过抑制酪氨酸酶活性来完成。

大麻素受体2在油酰乙醇胺抗动脉粥样硬化中的作用

观察PPAR-α激动剂油酰乙醇胺(N-oleoylethanolamine,OEA)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)抗炎相关受体大麻素受体2(cannabinoid receptor 2,CB2)的作用。从新生儿脐带中提取HUVECs,给予不同剂量OEA,RT-PCR及Western blotting检测CB2基因和蛋白表达。采用PPAR-α阻断剂MK886或CB2阻断剂AM630分别阻断PPAR-α或CB2信号通路,给药组和阻断剂组给予OEA,用TNF-α诱导模型组、给药组和阻断剂组炎症产生,Western blotting法测定各组VCAM-1蛋白表达或进行THP-1黏附实验。结果表明,OEA(10和50μmol·L-1)组的CB2表达上升,100μmol·L-1 OEA组较空白组无明显变化;OEA抑制VCAM-1蛋白表达及THP-1细胞黏附;分别给予PPAR-α、CB2阻断剂MK886/AM630后,OEA对VCAM-1及单核细胞黏附的抑制作用明显降低。结果提示,OEA可能通过激活CB2通路起到抗动脉硬化的作用。