海洋链霉菌次级代谢产物研究进展

链霉菌作为最高等的放线菌,广泛分布于多种生态环境中,具有复杂而独特的形态分化周期和强大的次级代谢能力。链霉菌的次级代谢产物具有抗感染、抗肿瘤、抗炎抗氧化、免疫调节等生物活性,是天然活性产物的主要来源之一。近年来随着对海洋资源的开发,许多新型的海洋链霉菌及其丰富的次级代谢产物被发现。从海洋链霉菌的生物活性物质、育种和发酵培养3个方面综述了海洋链霉菌次级代谢产物的研究进展,以期为缩短海洋链霉菌的发酵周期,提高次级代谢产物产量活性以及开发新型的海洋药物等提供参考和借鉴。

海洋真菌来源杂萜类化合物的研究进展

海洋真菌生活在高盐、高压、低温、弱光的独特海洋环境中,具有结构独特、代谢多样、活性显著等特点,并产生了一系列功能多样、结构新颖的次级代谢产物,是杂萜类化合物的重要来源。海洋真菌体内复杂的次生代谢途径使获得的杂萜类化合物骨架结构多样,具有抗菌、抗肿瘤、酶活性抑制等丰富的生物活性。介绍了海洋真菌来源杂萜类化合物的研究现状,并对其生物合成途径、发酵与分离方法、生物活性等进行了综述,为海洋真菌来源杂萜类化合物的后续研究提供了一定参考。

红毛藻血管紧张素转化酶抑制肽的筛选及其稳定性评价

本实验以红毛藻为原料,利用酶解法及超滤分级制备获得不同分子质量的肽组分,经高效液相色谱法测定体外血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制活性发现F2组分(800~2000 Da)的ACE抑制率最高;采用液相色谱-串联质谱技术和PEAKS Studio软件的de novo从头测序对F2组分进行氨基酸序列鉴定,并结合分子对接筛选出与ACE稳定结合的6个ACE抑制肽。利用固相合成法制备预测肽并经体外ACE抑制活性验证,发现L1(LVLLFLFGE)的ACE抑制活性最高,半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为14.22μg/mL。分子对接结果表明,L1对ACE的抑制主要归因于其能够与ACE的活性口袋形成氢键相互作用。最后,探讨温度、pH值、金属离子、光照类型和模拟胃肠道酶系消化对L1稳定性的影响,结果表明L1具有较好的热稳定性和离子强度稳定性,pH>2时抑制活性逐步减弱,紫外光处理会影响其抑制活性,体外模拟胃肠液处理后L1的ACE抑制率虽然显著降低,但仍具有较高ACE抑制活性。

一株白骨壤内生真菌亮白曲霉CW5\|7代谢产物主成分及其抗氧化活性研究

利用涂布法从厦门红树林植物白骨壤根部分离得到1株内生真菌,编号为CW5-7,通过测定ITS序列鉴定该菌株为亮白曲霉(Aspergillus candidus),对亮白曲霉CW5-7在大米培养基中的代谢产物进行分离纯化,通过波谱学数据分析对主成分结构进行鉴定,并对其抗氧化活性进行评价。结果表明,从亮白曲霉CW5-7的代谢提取物中分离得到2个对三联苯类化合物,分别为3,3″-dihydroxyterphyllin(Ⅰ)和3-hydroxyterphyllin(Ⅱ),均为亮白曲霉特征性代谢产物,且具有较强的抗氧化活性。

稻壳的资源化利用研究进展

稻壳是稻谷加工过程中最大的副产品,我国稻壳资源丰富,但目前并没有被充分有效地利用,即浪费了资源、又污染了环境。稻壳中含有丰富的SiO2、纤维素、脂肪酸等。资源化利用是稻壳有效利用的发展方向和趋势。本文综述了近年来国内外稻壳资源化利用的研究进展。

养殖暗纹东方鲀鱼骨的营养成分分析与评价

为促进养殖河鲀加工副产物的高值化利用,分析了养殖暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)鱼骨的营养成分分析与评价。结果表明,养殖暗纹东方鲀鱼骨具有高蛋白(19.46%)、低脂(2.19%)及矿物质含量较多的特点;氨基酸含量为20.07%,其中必需氨基酸含量和鲜味氨基酸含量分别占总氨基酸含量的34.53%和48.77%,色氨酸为第一限制性氨基酸;鱼骨蛋白的营养价值符合儿童(DIAAS为76)、青少年/成人(DIAAS为98)的需求,胶原蛋白含量丰富,占总蛋白含量的34.92%;脂肪酸含量为0.30%、不饱和程度达70.06%,以C22:6n-3(DHA)、C18:1n-9和C18:2n-6为主,且C20:5n-3(EPA)和C22:6n-3含量之和占总脂肪酸含量的29.20%;饱和脂肪酸(SFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)和多不饱和脂肪酸(PUFA)三者之比为1:0.68:1.66;矿物质中富含钙(20.33 g/kg)、磷(13.92 g/kg)和锌(39.23 mg/kg)元素,钙磷比值为1.46。综上,养殖河鲀鱼骨的蛋白质营养效价良好、胶原蛋白含量高,矿质元素丰富、比例均衡,具有良好的开发应用前景。研究为养殖河鲀鱼骨的高值利用提供了原料特性数据,对养殖河鲀产业发展具有参考价值。

鱼油的绿色制备工艺、标准规范及营养功效研究进展

鱼油富含ω-3多不饱和脂肪酸、维生素A、维生素D和天然色素等营养物质,具有多种营养功效。为促进我国鱼油产业的绿色可持续发展,保障产品质量安全,结合国内外研究进展,分别从鱼油的绿色制备工艺、标准规范和营养功效等方面进行综述,梳理了应用于鱼油生产的水酶法、超临界流体萃取法、超声辅助提取法、微波辅助提取法等绿色制备工艺,基于国内外鱼油相关的标准规范,阐述了鱼油的基本成分和质量指标、污染物限量和添加剂限量等,探讨了鱼油在预防心血管疾病、抗炎和预防脑部疾病方面的营养功效,并针对鱼油应用中存在的问题进行了分析和展望。未来应深入研究鱼油制备新工艺,完善相关标准规范,并进一步探究其生物活性机制。

海蜇的铝吸附行为研究

传统海蜇生产加工需添加明矾(硫酸铝钾),导致成品海蜇铝残留量偏高。为研究海蜇的铝吸附行为,本文以海蜇为主要研究对象,选取蛤蜊、海参、牡蛎、海蛏、鱿鱼、虾等6种代表性海产品为对照,测定了经1%明矾溶液浸渍7 d后其吸附铝量的变化,并分析了各海产品的氨基酸组分和含量。结果表明:海蜇组织吸附铝量显著高于其它海产品,高达2. 11×10~4mg/kg (干基)。氨基酸构成分析表明:海蜇总氨基酸含量最低,为0. 015 7 g/100g,说明海蜇在含有极少干物质下具有较强的铝吸附能力,且这种强铝吸附能力与海蜇的氨基酸构成相关,尤其与甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸的高比例,以及苯丙氨酸、亮氨酸、蛋氨酸的低比例相关。

水酶法提取紫海胆性腺脂质的工艺优化及提取方法对其品质的影响

以福建紫海胆(Heliocidaris crassispina)性腺为研究对象,采用单因素实验和正交实验优化水酶法提取紫海胆性腺脂质工艺,并基于气相色谱-质谱联用(GC-MS)、二醇基硅胶固相萃取(Generik Diol SPE)、高效薄层色谱(HPTLC)和差示扫描量热(DSC)等技术,以脂质得率、理化性质、脂肪酸组成、营养指标、脂质组成、熔融与结晶特性为指标,探讨了水酶法、Folch法和Matyash法对紫海胆性腺脂质品质的影响。结果表明:水酶法提取紫海胆性腺脂质最佳工艺条件为料液比1∶20、中性蛋白酶添加量7500 U/g、酶解时间5 h、酶解温度50℃和pH 7,该条件下脂质得率为23.22%,显著低于Folch法(27.27%)和Matyash法(27.14%);与Folch法和Matyash法相比,水酶法提取的紫海胆性腺脂质过氧化值(0.006 g/100 g)较低,碘值(95.77 g/100 g)较高,饱和脂肪酸含量(51.48%)较低,多不饱和脂肪酸含量(34.53%)较高,EPA与DHA总含量(15.04%)较高,营养指标较好,磷脂含量(4.23%)较低,熔融与结晶温度较低。综上,虽然水酶法提取紫海胆性腺脂质工艺存在得率低、破乳工艺复杂、磷脂选择性差等技术瓶颈,但其反应条件温和、绿色安全,所提取的脂质品质佳,具有较好的营养价值、较低的熔融与结晶温度,适合高品质海洋膳食脂质的研制。

不同干燥方式下海马干燥特性及其数学模型

采用热风干燥、真空干燥和冷风干燥对海马进行干燥,比较不同干燥工艺下海马的干燥特性、水分有效扩散系数以及活化能的区别,并建立海马的干燥动力学模型。获得了50℃、60℃、70℃、80℃、90℃及100℃条件下海马热风干燥特性曲线,50℃、60℃、70℃、80℃及90℃条件下海马真空干燥特性曲线,20℃、30℃及40℃条件下海马冷风干燥特性曲线。以R^2、χ^2和RMSE为评价指标,选用13种典型干燥模型对海马的干燥曲线进行拟合,结果表明Page模型和Midilli模型最适合描述海马热风干燥过程;Page模型和Weibull模型可以准确描述海马真空干燥过程;Page模型、Logarithmic模型和Weibull模型可以很好的描述海马冷风干燥过程。海马热风干燥、真空干燥及冷风干燥的有效水分扩散系数D(eff)分别在1.1714×10^-10m^2/s^6.7873×10^-10m^2/s、4.9252×10^-10m^2/s^10.4920×10^-10m^2/s和2.3510×10^-10m^2/s^4.0174×10^-10m^2/s区间内,活化能分别为37.05 k J/mol、18.75 k J/mol和20.55 k J/mol。

基于低场核磁共振技术对不同干燥方式的海马品质研究

为探究不同干燥方式对海马Hippocampus品质特性的影响,采用热风干燥(100℃)、冷风干燥(40℃)、真空冷冻干燥(-26~-30℃,0.1 kPa)和真空干燥(70℃,133 Pa)等方式对三斑海马Hippocampus trimaculatus(湿体质量2.5~3.0 g)进行处理,测定并分析了海马干在不同干燥方式下的干燥性能、收缩率、水分分布等指标。结果表明:不同干燥方式对三斑海马的干燥性能、收缩率有显著性影响(P<0.05),其中,热风干燥与真空干燥的耗时和耗能分别为15 h、4.03 kW·h/kg和10 h、2.46 kW·h/kg,干燥性能较优,而真空冷冻干燥的收缩率最低;低场核磁检测结果显示,不同干燥方式的干燥过程中海马干的水分含量下降,主要是不易流动水和自由水含量降低;海马干复水过程的结果显示,不易流动水不断上升,热风干燥和真空冷冻干燥的复水速度较快。研究表明,热风干燥与真空干燥用时短,具有节能效果,而真空冷冻干燥处理的海马品质较优,复水性能较好。

索拉菲尼对肝癌HepG2细胞凋亡、耐药及PTEN蛋白表达的影响

目的探讨索拉菲尼(Sorafenib,So)对肝细胞癌HepG2的毒性作用及其机制。方法不同浓度索拉菲尼作用HepG2细胞,CCK-8法测定细胞活性,结晶紫染色观察;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞内蛋白表达采用Western blot检测。结果So剂量依赖地降低HepG2细胞活性并诱导细胞凋亡;Western blot显示So可上调PTEN、Bax蛋白表达,抑制磷酸化AKT、Bcl-2的蛋白以及耐药基因ABCC2和ABCG2蛋白的表达。结论So抑制HepG2细胞存活并诱导凋亡;机制可能与So促进肝癌细胞PTEN以及Bax蛋白表达;抑制Bcl-2以及p-AKT和耐药基因ABCC2、ABCG2的表达有关。

槲皮素通过激活PTEN抑制PI3K/AKT及JNK信号通路诱导人乳腺癌细胞凋亡

目的研究槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞增殖活性以及对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法采用CCK-8法检测(0、20、40、60、80、100)μmol/L槲皮素对MCF-7细胞增殖的影响;Hochesst33342染色观察细胞核数量以及核型的变化,流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光细胞化学染色检测PTEN和磷酸化的JNK(p-JNK)表达,Western blot法检测PTEN、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、p-JNK、磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白水平;加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理后,再次采用以上方法检测对细胞凋亡和相关蛋白表达的影响。结果随着槲皮素浓度的升高,细胞活性下降,细胞生长受到抑制,且具有浓度依赖性;细胞核浓缩增强、细胞凋亡增加;高浓度槲皮素显著增强PTEN蛋白表达和分布,降低p-PI3K、p-AKT蛋白水平,并抑制p-JNK蛋白的核表达。加入PI3K/AKT信号抑制剂LY294002处理细胞后,LY294002和槲皮素联合作用组细胞凋亡率增加,PTEN蛋白的表达也增强,槲皮素能明显增强LY294002对p-PI3K/AKT/PTEN蛋白的作用。结论槲皮素诱导MCF-7细胞凋亡,可能与激活PTEN的表达,抑制PI3K/AKT和JNK信号通路有关。

气相色谱法测定阳离子表面活性剂合成体系中脂肪烷基二甲基叔胺

选用HP-NINOWax毛细管色谱柱及氢火焰离子化检测器(FID),采用程序升温,建立了4种脂肪烷基二甲基叔胺的分析方法。结果表明,4种脂肪烷基二甲基叔胺质量浓度在0.005～1.0 g/L范围内,其峰面积与质量浓度有良好的线性关系,相关系数(R^2)在0.999 6以上。检出限(LODs,信噪比为3)在0.001～0.002 g/L之间,定量限(LOQs,信噪比为10)在0. 003～0.005 g/L之间,回收率在90%～130%之间,相对标准偏差为1.3%～6.9%(n=6)。方法的线性范围宽、回收率高、选择性好,可用于叔胺的产品质量分析及生产过程控制分析。利用该方法对阳离子表面活性剂合成反应中十六烷基二甲基叔胺进行监测,结果很好地符合双分子亲核取代反应。该方法比滴定分析法更快速、精确,与液相色谱法相比,不需要进行柱前衍生或者使用色谱-质谱联用仪器。

双靶点抗阿尔兹海默症药物的设计、合成与体外抑制活性

阿尔兹海默症(AD)是一种多因素的复杂疾病,其具体发生机制尚不明确。目前上市药物主要以乙酰胆碱酯酶为靶点来提高脑中乙酰胆碱(ACh)水平,但仅能缓解疾病症状,寻找多靶点药物成为新的研究趋势。设计并合成了双靶点抗AD药物脱氧鸭嘴花碱酮衍生物Ⅰ1~Ⅰ4、Ⅱ1~Ⅱ4,其结构经1HNMR确证,通过测定其半数最大抑制浓度(IC_(50))评价其体外抑制活性。结果表明,合成的脱氧鸭嘴花碱酮衍生物的IC_(50)值在毫摩尔到微摩尔浓度范围内,对乙酰胆碱酯酶有明显的体外抑制活性;其中体外抑制活性最高的衍生物Ⅱ_(4)的IC_(50)值仅为2.03μmol·L^(-1),其体外抑制活性约为阳性对照加兰他敏的2倍。

脂肪烷基三甲基草酸铵的合成和优化

以脂肪烷基二甲基叔胺和碳酸二甲酯(DMC)为原料,制备了脂肪烷基三甲基碳酸甲酯铵,再将其与草酸反应得到脂肪烷基三甲基草酸铵,并通过~1HNMR对产物结构进行了确认。以合成十六烷基三甲基草酸铵为例,对合成工艺进行了优化。结果表明:在碳酸二甲酯中150℃反应3 h,叔胺质量浓度控制在0.05 kg/L,4种季铵盐产率都能达到85%以上。

养殖叶片山海绵Mycale phyllophila高极性次生代谢产物的研究

目的研究养殖叶片山海绵(Mycale phyllophila)正丁醇萃取组分的化学成分及其抗肿瘤活性,为药源海绵规模化养殖和质量控制提供依据。方法使用多种色谱分离方法对养殖M.phyllophila正丁醇萃取物进行化合物分离制备,通过一维及二维核磁共振波谱、高分辨质谱等技术对化合物结构进行鉴定。结果分离鉴定出8个化合物,分别为epi-plancyindole A(1)、尿嘧啶(2)、胸苷(3)、2′-甲氧基尿嘧啶核苷(4)、2′-脱氧尿嘧啶核苷(5)、鸟苷(6)、2′-脱氧鸟苷(7)、环(脯氨酸-蛋氨酸)二肽(8)。结论化合物1为新化合物,化合物2~8首次从该种海绵中分离得到。化合物1对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)有选择性抑制活性,IC50为44.2μmol/L。

牡蛎胰岛素相关多肽3克隆表达及纯化

目的克隆构建含有胰岛素相关多肽3(IRP3)基因的BL21表达菌株,并对表达蛋白进行分离纯化、鉴定和复性。方法采用DNA重组技术克隆获得IRP3-pET30a阳性BL21菌株,双酶切后琼脂糖凝胶电泳显示IRP3-p ET30a质粒构建成功,利用镍金属亲和层析方法获得IRP3/HIS纯化蛋白,进一步利用SDS-PAGE和Western blot技术确认IRP3/HIS融合蛋白的纯化效果。结果成功克隆IRP3-pET30a质粒,筛选获得含有IRP3-pET30a质粒的BL21表达菌株。从包涵体裂解上清液中获得了纯化的IRP3/HIS融合蛋白并进行透析复性。结论IRP3基因克隆成功及IRP3/HIS融合蛋白表达纯化,为IRP3蛋白的抗体制备和作为体外生长因子添加剂的应用打下基础。

PTEN慢病毒过表达肝癌稳转株的构建及对Huh-7肿瘤活性的影响

目的构建过表达PTEN的人肝癌稳转细胞株,观察PTEN对肝癌细胞生物学行为的影响并探讨潜在机制。方法将编码PTEN的基因编码片段克隆到慢病毒载体pLV-puro-GFP,利用293T细胞得到慢病毒原液感染肝癌细胞Huh-7,嘌呤霉素筛选获得稳定过表达PTEN的Huh-7细胞。用RT-PCR、免疫荧光和Western blot法检测细胞内基因和蛋白的表达;Transwell检测细胞迁移活性;探讨AKT抑制剂MK2206对稳转株的药理作用。结果成功构建了PTEN过表达的肝癌稳转细胞株(Huh-7/hPTEN)。与对照株Huh-7/EGFP相比,Huh-7/hPTEN细胞PTEN的蛋白和mRNA表达升高(P<0.01),P53蛋白表达升高,Slug和AR的mRNA表达水平下降(P<0.01),HNF4α的mRNA表达升高(P<0.01),耐药蛋白ABCB1和ABCC2的表达下降,E-cadherin蛋白和mRNA表达升高(P<0.01),Vimentin的蛋白和mRNA表达下降(P<0.01),细胞迁移性能减少;Huh-7/hPTEN细胞对AKT抑制剂MK2206的利用率升高,并影响相关蛋白的表达。结论成功构建PTEN过表达肝癌稳转株,PTEN过表达可改善肝癌Huh-7细胞肿瘤生物学效应,致癌蛋白表达下降,迁移减弱。

气相色谱法快速测定藻油中二十二碳六烯酸及二十二碳五烯酸含量

文章建立藻油中2种主成分二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)及二十二碳五烯酸(Docosapentaenoic acid,DPA)(DPAn-6)的同时、快速定量检测方法。以十四烷酸甘油三酯为内标物,与样品同时进行甲酯化处理后上机分析,优化分离条件以建立定性定量分析方法。结果显示,与目前现行各类不饱和脂肪酸测定的国家标准相比(>18 min),该方法将单个样品检测时间缩短至8 min。DHA及DPAn-6分别在0.209~1.672 mg/mL、0.05045~1.009 mg/mL的范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9995、0.9999。DHA的检测限及定量限分别为6.27、20.9μg/mL,DPAn-6的检测限及定量限分别为4.97、16.6μg/m L,平均回收率分别为95.6%、100.1%。结论:该方法可快速、稳定、准确地对藻油样品中的DHA及DPAn-6进行定性定量检测,为藻油质量评价体系的完善提供参考。