ARMS法在检测肺癌晚期患者肿瘤组织和血浆表皮生长因子受体基因突变中的应用

目的 应用探针扩增阻滞突变系统聚合酶链反应（ARMS-PCR）检测晚期肺癌患者血清游离DNA和肿瘤组织中表皮生长因子受体（EGFR）基因突变,探索两者间的一致性。方法 同时收集53例未经治疗的肺癌Ⅲb～Ⅳ期患者的原发灶肿瘤组织和外周血,分别提取DNA,采用ARMS-PCR扩增EGFR基因的第18、19、20和21外显子突变,对结果不一致的标本用微滴式数字PCR法对外周血标本进行验证。结果 血浆EGFR基因突变检测的灵敏度为51.4%（17/33）,特异度为100%;血浆EGFR基因的突变率为29.4%;16例血浆和组织结果不一致的标本,数字PCR检测的结果与血浆游离DNA检测的结果一致。结论 血浆游离DNA为监测Ⅲb～Ⅳ期肺癌患者原发肿瘤中EGFR基因突变提供了新的来源,ARMS法是检测血浆游离DNA中EGFR基因突变的可靠有效方法。

一种人类K-ras基因突变检测试剂盒的质量标准研究

目的评价和分析一种新的人类K-ras基因突变检测试剂盒质量,确定该类试剂质量标准和评价方法。方法利用实时荧光定量PCR方法,检测7种K-ras基因单一突变点质控品的准确性、特异性、最低检测量和重复性。分别检测7例肠癌患者K-ras基因突变阳性组织样本和10例阴性样本的准确性和特异性。结果试剂盒准确性、特异性、最低检出量和重复性均符合质量标准。能准确和特异的检出单一点突变,具有较好的灵敏度和重复性。结论该试剂盒质量标准设定较合理,在指导K-ras基因突变检测方面具有较好的应用前景。

液体活检：规范与精准同行

2016年3月4-5日,中国临床肿瘤学会（ChineseSociety of Clinical Oncology,CSCO）和中国抗癌协会肺癌专业委员会联合主办了第13届“中国肺癌高峰论坛”。本次论坛的主题是“规范与精准同行：液体活检和二代测序步入临床”。

ARMS法检测同一位点连续突变的病理解决方案

扩增受阻突变体系（amplification refractory mutation sys—tern，ARMS）法是分子病理检测领域发展最快的方法之一，其是建立在RT—PCR基础上的检测方法，灵敏度高。ARMS法作为RT—PCR检测方法的发展和延伸，也具有RT．PCR法的缺点，即污染对检测结果的影响。在我科日常的分子病理检测中，曾出现一起连续检测到多例同一位点发生突变的事件，在本科科主任的带领下，与临床医师、受检患者、医院主管领导、试剂生产与供货方沟通后，妥善解决一起可疑污染事件，形成一套较为完备的分子病理预警处理方案，现报道如下。

新型环状引物荧光定量PCR检测乳腺癌组织HER2基因mRNA表达方法的建立

目的研究建立一种基于实时荧光定量PCR技术和新型环状引物的简捷、准确、廉价、易于标准化检测乳腺癌组织人表皮生长因子受体2（HER2）基因mRNA表达水平的方法，为临床上肿瘤个性化分子靶向药物治疗提供用药指导。方法设计HER2和内参基因的新型特异性环状引物，通过Excel在乳腺癌组织标本中随机抽取5份标本检测候选内参基因的表达，同时用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件筛选和评估乳腺癌组织中稳定表达的内参基因，设置Mg“浓度和引物浓度梯度对PCR体系进行优化，建立乳腺癌HER2基因mRNA表达水平的新型环状引物EvaGreen染料实时荧光定量逆转录（FQRT）一PCR检测方法（以下简称“自建FQRT。PCR”法），并对其灵敏度、特异性、稳定性进行评价；同时用自建FQRT—PCR法与免疫组织化学（IHC）法平行检测2008至2012年厦门大学附属中山医院普外科收集的55份乳腺癌组织和其中32份同一患者匹配的正常组织（距癌组织1〉5cm）中HER2基因的表达水平，并评价自建FQRT—PCR法对乳腺癌的诊断效能。结果自建FQRT—PCR法对HER2基因和核糖体蛋白L37a（RPL37A）基因的最低检测限均为10^6拷贝／μl，线性范围均为10。～10。拷贝／pJ（r=0．997）；HER2和RPL37A基因的高、低浓度标准品（10^6拷贝／μl和10^1拷贝／μl）批内变异系数（CV）分别为（5．93±0．57）％和（5．11±0．59）％、（2．49±0．81）％和（2．984-0．97）％；批间CV为（5．76±0．58）％和（7．71±0．61）％、（3．75±0．76）％和（4．40±0．96）％。FQRT—PCR法与IHC法平行检测87份乳腺癌组织标本HER2基因表达水平，FQRT—PCR法的敏感度为96．36％（53／55），特异度为78．13％（25／32），阳性预测值为88．33％（53／60），阴性预测值为92．59％（25／27），与IHC检测结果总符合率为89．66％（78／87）。且与IHC法具有较高的一致性（Kappa=0．770，P〉0．05）。结论成功建立了FQRT—PCR检测乳腺癌HER2基因mRNA表达水平的方法，该方法敏感度高、特异度好且快速、价廉，适合临床检验实验室进行肿瘤标本的HER2基因表达检测。