DNMT3B基因异常表达与肝癌发生的相关性研究

目的探讨DNMT3B和肝癌发生的关系。方法用实时荧光定量RT-PCR方法分析正常肝细胞系、肝癌癌旁细胞系及肝癌癌细胞系中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的表达谱,以及DNMT3B表达抑制后在肝癌细胞系SMMC-7721中出现表达上调的与肿瘤发生相关的基因PDCD4和MBD3的表达。结果DNMT1,DNMT3A,DNMT3B在肝癌细胞系中存在高表达的趋势,表达水平一致性的明显高于肝癌癌旁和正常肝细胞系,提示这些酶与肝癌的发生相关。结论DNMT3B表达抑制后肝癌细胞系SMMC-7721中与肝癌发生相关的MBD3和PDCD4基因表达水平上调,表明DNMT3B沉默后,诱导了下游肿瘤抑制基因的过表达,推测DNMT3B在肝癌发生中通过某种机制调控下游肿瘤抑制基因的表达。

KIR及其HLA配体基因多态性与人类肿瘤的相关性

天然杀伤(NK)细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)及人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)配体的多态性与感染性疾病、自身免疫病、生殖系统疾病和肿瘤等多种疾病的发生相关。本文重点介绍KIR及其配体HLA基因与白血病、黑色素瘤、鼻咽癌、宫颈癌、肝癌等肿瘤的相关性研究进展,以及该领域新发现的意义、研究中存在的问题和今后研究方向的展望。

江苏启东地区人群KIR基因型及单倍型与HBsAg清除相关

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)的多态性、KIR基因型及单倍型与乙型肝炎病毒(HBV)感染不同转归之间的相关性。方法以肝癌高发的启东地区HBV感染男性人群为研究对象,随访10年后对其再次进行血清学检测,按照HBsAg是否转阴分为HBsAg转阴组(161例)和HBsAg持续阳性组(493例)。采用序列特异性引物PCR方法进行KIR分型,用χ2检验对KIR等位基因阳性率、KIR基因型、KIR单倍型进行统计学分析。结果 HBsAg转阴组KIR2DS4(d)、单倍型1和基因型AG的频率高于HBsAg持续阳性组(P=0.014、P=0.029、P=0.048);KIR2DL5的频率低于HBsAg持续阳性组(P=0.044)。结论江苏启东地区KIR2DS4(d)、单倍型1和基因型AG可能是HBsAg转阴的保护因素,KIR2DL5可能是HBsAg持续阳性的风险因素。

果蝇Neuroligin 4以非依赖于Neurexin方式调控突触的发育

目的探究果蝇突触黏附分子神经连接蛋白-4(Drosophila neuroligin 4,DNlg4)对幼虫神经肌肉突触发育的调控是否依赖于经典的neuroligin(Nlg)突触前配体分子轴突蛋白(Drosophila neurexin,DNrx)。方法主要利用免疫荧光染色和激光共聚焦显微观测技术,对包括野生型、dnlg4突变体、dnrx突变体和dnlg4,dnrx双突变体等不同基因型果蝇三龄幼虫的神经肌肉接头(neuromuscular junction,NMJ)的形态进行观察,测量其突触分枝总长度并计数突触终扣(bouton)数目。以此作为NMJ发育状态参数,通过比较不同基因型果蝇的NMJ发育缺陷程度,确定DNlg4和DNrx在调控神经肌肉突触发育中的关系。结果DNrx缺失会导致较DNlg4缺失更严重的NMJ发育缺陷;缺失DNlg4会进一步加重因DNrx缺失而导致的NMJ发育缺陷;运动神经元表达外源的DNlg4可部分挽救DNrx缺失造成的NMJ发育缺陷;未检测到两类分子存在在体的相互结合。结论DNlg4与DNrx对果蝇幼虫神经肌肉突触发育的正向调控具有协同效应,DNlg4以非依赖于DNrx的方式调控神经肌肉突触的发育。

肝癌细胞中HLA I类重链基因表达与启动子区域甲基化的相关性

目的:研究肝癌细胞株中DNA甲基化与HLAI类分子异常表达的相关性。方法:应用MSP技术对相关细胞系的HLA I类分子重链A、B、C位点启动子区域CpG岛的甲基化状态进行分析,Real-time PCR检测HLAI类分子重链mRNA水平的表达情况,Western blot检测RNA干扰后HLAI类分子重链表达情况。结果:在8株肝癌细胞系中HLA I类分子重链A、C位点启动子区域CpG岛存在甲基化;将启动子区域的DNA甲基化与相关基因表达数据相比较显示二者没有关联性;在RNA干扰DNA甲基化转移酶3a或3b的肝癌细胞系SMMC7721中,比较基因干扰前后HLA I类分子重链蛋白表达无显著变化。结论:在研究的肝癌细胞系中DNA甲基化没有参与调控肝癌中HLA I类分子的异常表达。

犏牛及其亲本睾丸组织中印记基因SNRPN DMR甲基化与mRNA表达差异研究

【目的】研究犏牛与黄牛、牦牛睾丸组织SNRPN基因DMR甲基化状态、mRNA表达水平的差异,为揭示犏牛雄性不育的表观遗传机制提供依据。【方法】根据黄牛SNRPN基因序列设计引物,通过克隆测序获得牦牛SNRPN基因5'端序列,采用亚硫酸氢钠测序法检测犏牛及其亲本睾丸组织中SNRPN基因5'端DMR的甲基化状态,并采用Real-time PCR检测犏牛及其亲本睾丸组织中SNRPN基因的表达水平。【结果】牦牛SNRPN基因5'端序列长为1137bp,与黄牛的同源性达98.2%;生物信息学分析发现含有YY1和SP1等甲基化敏感位点。犏牛SNRPN基因DMR的甲基化水平(42.22%)极显著高于黄牛(21.08%)和牦牛(20.81%)(P<0.01)。黄牛和牦牛睾丸组织中SNRPN基因mRNA表达水平高于犏牛,但未达到显著水平(P>0.05)。【结论】犏牛睾丸组织SNRPN基因DMR的甲基化水平极显著高于黄牛和牦牛,且mRNA表达水平低于黄牛和牦牛,说明犏牛SNRPN基因可能是通过DMR区的高甲基化抑制其mRNA表达来阻滞精子发生减数分裂过程。

b-Boule基因5′调控序列的克隆与睾丸组织DMR甲基化分析

【目的】研究b-Boule基因5′调控序列的序列特征,以及牦牛、黄牛与犏牛睾丸组织b-Boule基因DMR甲基化状态的差异,为揭示b-Boule基因的表达调控和犏牛雄性不育的表观遗传机制提供依据。【方法】采用PCR扩增和克隆测序技术获得牦牛b-Boule基因5′调控序列,利用生物信息学方法分析b-Boule基因5′调控序列的序列特征,采用亚硫酸氢钠测序法检测牦牛、黄牛与犏牛睾丸组织中b-Boule基因DMR的甲基化状态。【结果】b-Boule基因5′调控序列长度为1 352 bp,核心启动子区含有SP1等甲基化敏感位点,5′端存在一个CpG岛。犏牛b-Boule基因DMR的甲基化水平(17.78%)高于牦牛(7.50%)和黄牛(6.94%)(P<0.01),特别是CpG位点33—35的甲基化水平差异更明显。【结论】犏牛b-Boule基因DMR的甲基化水平高于牦牛和黄牛,结合前期mRNA表达水平和组织学观察结果,认为DMR甲基化在b-Boule基因的表达调控中发挥关键作用,犏牛b-Boule基因可能是通过DMR区的高甲基化抑制其mRNA表达来阻滞精子发生减数分裂过程。

江苏地区汉族献血员杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究

目的分析江苏地区汉族献血员杀伤细胞免疫球蛋白样受体(K IR)基因多态性、基因型及单倍型,为研究K IR基因与疾病相关性提供依据。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对江苏地区163名汉族献血员进行K IR基因低分辨率检测和基因型、单倍型分析。结果共检出除框架基因及假基因外的12个K IR基因,其中2DL1和2DL3存在于所有个体,3DL1和2DS4较为常见;其次为1D、2DL5、2DS1、3DS1及2DS5;2DS2、2DL2及2DS3基因频率较低;检出的17种基因型中,以AJ(2,2)和AF(1,2)型最为常见,其次为AH(5,2)和AG(1,1)型。有3种基因型(New1、New11及New19)在白人中未见报道,其中New19国内未见报道;163例个体中明确检出9种单倍型,最常见的是单倍型2,其次是单倍型1。结论江苏地区汉族人群有其独特的K IR基因频率、基因型频率和单倍型频率分布,并有可能存在新的基因型和单倍型。

不同尺度纳米镍对秀丽线虫的发育毒性

应用模式生物-秀丽隐杆线虫研究金属纳米镍的生殖发育毒性。采用20nm和90nm镍分别以2.5和5.0μg·cm-2两个剂量对秀丽隐杆线虫进行染毒,并以微米镍和生理盐水作对照,采用后代数目、世代时间、形态和体长、寿命和半数致死率等生殖发育相关评价指标,对纳米镍生殖发育毒性进行评价。结果发现,与生理盐水对照组和微米镍组比较,秀丽线虫暴露于20nm和90nm镍的两个剂量组后,均表现出生殖和发育的异常(P<0.01),并有剂量依赖性。且90nm镍暴露对秀丽线虫后代数目、世代时间、形态和体长、寿命和半数致死天数等指标的缺陷作用均显著于20nm镍。研究表明,纳米镍可影响秀丽线虫的生殖和发育功能,这一效应与纳米粒径和暴露浓度有关。此结论可为制定纳米镍的接触限值标准提供参考。

pitx3和nurr1基因在不同年龄大鼠不同脑区的表达变化

目的:探讨正常不同年龄SD大鼠不同脑区pitx3、nurr1基因的表达变化。方法:使用RT-PCR、免疫印迹法和免疫荧光方法检测pitx3、nurr1基因在正常不同年龄SD大鼠不同脑区转录与翻译水平的表达。结果:RT-PCR、免疫印迹法检测显示,pitx3、nurr1基因在各年龄组大鼠中脑、大脑皮质、海马、纹状体、嗅球和下丘脑均有表达,其中在海马和中脑表达较高;在各年龄组中新生组表达最高,并随着年龄的增长表达呈下调趋势;免疫荧光检测E16.5 d组和新生组的中脑和海马区观察到有大量Pitx3或Nurr1单标细胞和Pitx3/TH或Nurr1/TH双标细胞。结论:pitx3、nurr1基因的表达不仅与中脑多巴胺能神经元,而且可能与儿茶酚胺类神经元的发育和生存维持有关;老年期pitx3、nurr1基因表达下降可能与脑老化和神经退行性变疾病,如帕金森病和老年性痴呆等有关。

DNMT3B基因启动子C46359T多态性与食管癌易感性的关联分析

目的：探讨DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性与江苏汉族人群食管癌易感性的关系。方法：提取195例食管癌患者及189例健康体检人员外周血基因组DNA，采用PCR—RFLP结合DNA测序技术检测DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性。结果：正常对照DNMT3BC46359T等位基因TT／CT基因型频率为98．9％／1．1％，病例组为97．9％／2．1％，在对照组与病例组中均未检测到DNMT3B 46359 CC基因型。携带DNMT3B 46359 CT等位基因的个体与对照组相比，其患食管癌的易感性未见明显升高（P=0．43，OR=1．96，95％CI：0．35—10．82）。对比江苏汉族人群和英国、美国白种人群，DNMT3B C66359T单核苷酸多态性频率分布有明显差异（P〈0．01）。结论：DNMT3B基因CA6359T多态性可能不适合作为中国汉族人群食管癌易感性的一个独立风险因素，此位点多态性的分布在不同人种间有显著差异。

侵袭性曲霉病患者Toll样受体4基因变异的初步研究

目的 Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)家族是最重要的病原识别受体,动物实验发现TLR4-/-小鼠更容易感染曲霉。文中探讨我国汉族人群TLR4基因编码区变异情况以及该基因变异与侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)易感性的关系。方法回顾性收集2011年6月至2012年12月南京军区南京总医院确诊为IA的25例住院患者设为IA组,其中男性17例,平均年龄(52.4±12.3)岁,有基础疾病12例、无基础疾病的13例;健康体检者103例设为对照组,其中男性70例,平均年龄(56.0±17.2)岁。所有研究对象均来源于汉族人群。采集研究对象外周静脉血,提取外周血中DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增TLR4基因编码区序列后测序,测序结果与NCBI Gen Bank中的TLR4编码序列进行比对,并分析基因突变引起的氨基酸改变以及对蛋白质功能的影响。比较IA组与对照组TLR4基因突变率的差异。结果研究共发现2个突变点,分别为219 C>G和1420 C>T,均为错义突变。蛋白结构预测结果显示219 C>G突变导致TLR4识别病原体的功能区改变,TLR4 1420 C>T未引起结构域改变。IA组TLR4的突变频率为8%(2/25),2例TLR4基因突变的患者均无基础疾病;对照组未发现突变,2组间比较差异有统计学意义(P=0.037)。结论 IA患者存在TLR4基因编码区错义突变(219C>G与1420C>T),该基因的突变可能增加机体对IA的易感性。

解析基因组如何编码脑的挑战

人脑是自然界生物体内结构和功能最复杂的器官。解析人类基因组如何编码人脑的结构与功能是极具挑战的科学与技术问题,也是从根本上认识脑的本质问题。本文对近年来脑的“断面”组学研究的相关进展进行归纳,提出解析基因组如何编码脑的挑战与展望。

肝癌组织中HLAⅠ类抗原及相关分子的表达

目的研究在抗原提呈过程中HLAⅠ类抗原各相关分子的表达水平及临床意义。方法利用免疫组织化学法(ABC法)对165例肝癌的石蜡组织标本中HLAⅠ类分子的重链、轻链及抗原提呈相关分子calnexin、LMP2等的表达情况进行研究,并分析各表达分子的相关性。结果HLAⅠ类分子(A和B/C位点)的表达为膜型,β_2M的表达为膜浆型,以膜为主,而LMP2和calnexin的表达为浆型。肝癌组织除LMP2分子外,HLAⅠ类各分子均有明显的上调(上调率≥40%),其中以HLAⅠ类分子A位点上调最明显(54%)。肝癌组织中HLAⅠ类各分子之间表达趋势一致。结论肝癌表面HLAⅠ类分子表达增加与抗原提呈过程中多分子的表达增加和协同作用有关,而并非由其中某种单一分子的改变来决定。

肿瘤中胰岛素样生长因子Ⅱ基因印记及其丢失的机制

基因组印记(genomic imprinting)是目前肿瘤医学领域研究的新热点,印记基因胰岛素样生长因子Ⅱ基因(insulin-like growth factor 2, IGF2)与肿瘤相关性的研究也逐渐显现其参与肿瘤的发生、发展过程．IGF2是最早发现的印记基因之一,对个体的生长发育起着重要的作用．近年发现大多数恶性肿瘤中都存在该基因的印记丢失所致的IGF2高表达现象,且IGF2印记丢失可以作为大肠癌等肿瘤发生危险性的分子标记,但肿瘤中IGF2印记形成和丢失的机制尚不清楚,本文将从等位基因差异性甲基化区域(differentially methylated region, DMR)甲基化状态、绝缘蛋白CTCF(CCCTC- binding factor)结合能力及BORIS(brother of the regulator of imprinted sites)共同参与印记形成几个方面,阐述肿瘤中IGF2印记形成及其印记丢失的可能机制．

Tag SNPs在鉴定肿瘤易感性基因研究中的应用

以标签单核苷酸多态性(Tag SNP)为基础的关联研究是鉴定肿瘤易感基因的重要策略,有效地获取和利用Tag SNPs成为肿瘤易感基因领域研究的热点之一。作者对Tag SNPs的获取、检测及其在肿瘤易感性研究中的应用作一综述。

利用子宫内胚胎电转技术研究Frizzled 10在大脑皮质发育中的功能

子宫内胚胎电转技术目前被广泛应用于神经发育的相关研究。本研究利用子宫内胚胎电转的方法对Frizzled 10基因在小鼠大脑皮层发育过程中的作用作了初步的探讨。首先利用PCR扩增获得Frizzled 10的全长cDNA,将cDNA连接到电击载体pCAGIG,构建异位表达载体pCAGIG-Frizzled 10。建立子宫内电击技术:在胚鼠E 14.5 d时,将异位表达载体pCAGIG-Frizzled 10在电压35 V、脉冲时间50 ms、脉冲数5的条件下将质粒电击到背侧皮质的脑室区,4 d后收取胚鼠脑组织,进行冠状切片后在荧光显微镜下检测外源蛋白GFP在鼠胚背侧皮质的表达情况。结果显示,与对照相比,Frizzled 10的异位表达参与了皮质发育的调控。该研究为我们进一步研究Frizzled 10的功能提供了新的线索。

热激胁迫可能通过降低脂肪与糖原的积累抑制涡虫的发育(英文)

目的:探讨热激胁迫对于涡虫发育以及脂肪和糖原积累的影响。方法:涡虫的发育通过体长与体质量来评价。分析35℃热激胁迫处理涡虫的体长与体质量变化以及实质细胞中脂肪与糖原积累情况,并评价热激胁迫处理涡虫中发育与脂肪或糖原积累之间可能的相关性。结果:与未经历热激处理的对照相比,热激胁迫处理不同长度时间(16、20、24、28与32 h)后涡虫体长与体质量显著减少或降低。与对照相比,热激胁迫处理导致涡虫实质细胞中的脂肪颗粒数量明显降低、尺寸显著变小。类似地,热激胁迫处理还导致涡虫实质细胞中的糖原积累的显著降低。进而,线性回归分析表明热激胁迫处理涡虫的体长与体质量均显著相关于实质细胞中脂肪颗粒的尺寸或糖原的含量。结论:热激胁迫处理可以明显抑制涡虫的发育,且热激胁迫处理涡虫中存在发育与脂肪或糖原积累之间的显著关联。

肿瘤表观基因型在临床中的应用

肿瘤不仅是遗传性疾病,同时也是由基因转录沉默所引起的表观遗传学性疾病.表观遗传学(epigenetics)是研究不涉及DNA序列变化的、可遗传的基因表达调控方式的一门科学.肿瘤中表观遗传学的改变包括影响基因差异表达的DNA甲基化、组蛋白乙酰化/组蛋白去乙酰化和染色质重塑等几个方面,表观基因型(epigenotype)是描述有共同基因型的不同类型细胞的基因表达模式和基因失活模式,表观遗传学机制决定了表观基因型的形成.肿瘤表观遗传学机制贯穿肿瘤发生、发展的整个过程,并具有一定的广泛性和组织特异性,因此认识肿瘤中表观基因型将对肿瘤的临床诊断、治疗和预防有着重要的指导意义.