温度、盐度对龟足胚胎发育和幼虫生长的联合影响

龟足(Capitulum mitella Linnaeus)在我国主要分布于长江口以南海浪剧烈冲击的暴露型岩相海岸的中、高潮区,是一种颇具养殖潜力和市场前景的新品种。研究温度(24、27、30、33℃)和盐度(28,31,34)对龟足胚胎发育和幼虫生长的协同影响,可为龟足的人工育苗提供依据。结果如下(1):33℃-28温盐度组合胚胎发育时间最短144h,27℃-28温盐度组合胚胎相对孵化率最高。温度与盐度对胚胎发育时间没有显著影响;但温度和盐度对胚胎孵化率有极显著影响,温度与盐度间的交互作用显著。胚胎发育最适宜的温盐度组合是27℃-28。(2):27℃的3个盐度组、30℃-31温盐度组合无节幼虫持续时间最短。在同一盐度条件下以27℃的存活率较高,在同一温度条件下以盐度31的存活率较高,其中以27℃-31温盐度组合的存活率最高;存活率1和存活率2分别高达99.0%、90.7%。27℃-28、27℃-31温盐度组合变态率最高,变态率分别为81.8%、73.7%。34高盐组幼虫的存活率和变态率均很低甚至为零。温度和盐度对幼虫存活率和变态率有极显著影响,两者的交互作用极为显著。综合无节幼虫持续时间、存活和变态情况,27℃-31温盐度组合为幼虫生长发育的最佳组合条件。龟足胚胎发育、无节幼虫的生长和变态对温度盐度的敏感性有所不同,这是由龟足的自身繁殖特点及生活环境决定的。

牙齿发育与再生

器官的发育是一个极其复杂的过程。在脊椎动物中，器官的形成通过细胞群与细胞群间的相互作用得以实现．通常表现为上皮与间充质问的相互作用。牙齿的发育过程，包括由胚胎早期预定成牙部位到发育形成完整的牙齿，是一个复杂的连续过程，需经过发育起始、增殖、上皮一间充质相互诱导；形态分化；组织分化；基质沉积；钙化、成熟和牙齿萌出等阶段。在这一过程中，事实上就是牙源性上皮与颅神经嵴来源的牙源性间充质之间相互诱导、相互作用的过程[1J，涉及包括生长因子、转录因子、受体分子以及组织特异的基质蛋白等在内的不同分子组成的信号网络系统，对发育的形态结构进行精确的调控。

利用七氯对斑马鱼多巴胺神经元毒性影响构建帕金森病模型

目的:利用七氯对斑马鱼多巴胺神经元的影响,建立斑马鱼帕金森病(PD)模型。方法:将斑马鱼鱼卵分为正常对照组(不予干预),750μmol/L 6-羟基多巴胺(6-OHDA)组和不同浓度七氯组(1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL、1000 ng/mL、10000 ng/mL),分别恒温孵育,每24 h观察胚胎发育情况并记录直到受精后120 hpf(h post fertilization,hpf),在120 hpf做行为学测定,然后实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定多巴胺通路酪氨酸羟化酶(TH2)的相对表达量。结果:与正常对照组比较,6-OHDA组幼体出现发育迟缓、脊柱弯曲,运动距离缩短(P<0.05),TH2基因表达降低(P<0.05);与正常对照组比较,1~100 ng/mL七氯组幼体发育无明显变化,但运动距离缩短(P<0.05),TH2基因表达降低(P<0.05),1000~10000 ng/mL七氯组出现色素沉着分布和脊柱弯曲,而且运动距离更短(P<0.05)、TH2基因表达更低(P<0.05),变化具有浓度依赖性;与6-OHDA组比较,1000~10000 ng/mL七氯组运动距离更短,TH2基因表达更低,其中10000 ng/mL七氯组运动距离缩短和TH2基因表达降低有统计学差异(P<0.05)。结论:传统PD模型造模药物6-OHDA和1000~10000 ng/mL七氯都可通过影响多巴胺神经元功能成功建立斑马鱼PD模型,其中10000 ng/mL七氯的造模效果比6-OHDA更显著。

基于斑马鱼模型研究苁蓉舒痉颗粒的抗帕金森病作用

目的:探索苁蓉舒痉颗粒对帕金森病斑马鱼的治疗效果及其分子机制,为苁蓉舒痉颗粒的药效学研究提供体内实验基础,以挖掘其临床价值。方法:将受精后6 h的斑马鱼胚胎随机分为对照组(1X E3养殖水处理)、模型组(750μmol 6-OHDA溶液处理)和药物组(25μg/mL苁蓉舒痉颗粒溶液处理)。从受精后0~120 h期间,每24 h检测各组斑马鱼胚胎/鱼苗出膜率、存活率,120 h时在显微镜下观察各组斑马鱼的形态发育情况,利用行为学方法对斑马鱼进行触尾实验及实时荧光定量聚合酶链式反应检测多巴胺信号通路相关基因mRNA表达的变化。结果:苁蓉舒痉颗粒能显著提高帕金森病斑马鱼的存活率(P<0.01),并减少其畸形发生率(如卵黄吸收延迟、鱼鳔发育迟缓、脊柱弯曲、心包水肿等);有效减轻多巴胺神经元的受损程度,保护大脑形态的正常发育,挽救帕金森病斑马鱼自主运动能力(P<0.05);有效提高多巴胺相关基因的转录水平,其中dat和drd2a基因的表达水平有显著提高(P<0.05),对多巴胺神经元损伤导致的帕金森病斑马鱼有一定的保护作用。结论:苁蓉舒痉颗粒可能通过调节多巴胺相关基因dat和drd2a的表达,减少多巴胺神经元的凋亡,从而提高帕金森病斑马鱼的行为反应能力和存活率,对帕金森病的症状有显著的改善作用。

毕赤酵母表达系统外源基因表达序列优化的软件设计

作为真核生物表达系统,毕赤酵母已成功表达了包括病毒、细菌和真核生物在内的多种外源蛋白。但并非所有的外源序列在毕赤酵母中都能得以高表达,外源序列含有毕赤酵母中低频密码子或是序列中A+T含量不合理是限制高表达的重要原因。根据毕赤酵母密码子使用的有关特性,利用遗传算法,建立外源基因表达序列优化的数学模型,并依此设计一套毕赤酵母外源基因表达序列的优化软件。

两种微藻凝集素对几种不同类型细胞的凝集作用

经离子交换和分子筛层析从紫球藻(Porphyridium cruentum)和海水小球藻(Chlorellasp.)中分离纯化得到2种凝集素,研究它们对几种不同类型细胞即动物和人血红细胞、海洋和淡水微藻、细菌和真菌的凝集活性。研究结果表明,2种微藻凝集素对它们当中一些类型的细胞或种类具有不同程度的凝集活性,其中对水生聚胞藻(Synechocystis aquetilis)的凝集活性最强,最低质量浓度只需0.0313g/L。

转乙肝病毒表面抗原基因烟草发根的获得

构建了乙肝病毒表面抗原基因(HBsAg)植物表达载体,通过冻融法将HBsAg基因转入到发根农杆菌LBA1314中,采用叶盘法将HBsAg基因导入到烟草中,获得了转基因烟草发根.对转基因烟草发根的GUS检测结果表明:转HBsAg基因烟草发根可以染成蓝色,而非转基因烟草的根没有染色反应.这说明gus基因在转HBsAg基因烟草发根获得了表达.

人牙胚组织在裸鼠肾囊膜培养模式下的成牙能力

背景:建立一种科学可靠、简便可行,既可以人为进行干预,又不会影响牙齿继续发育的体外培养模式对于了解人类牙齿发育的组织学特点至关重要。目的:将流产人胚胎12周的磨牙牙胚植入到裸鼠肾囊膜下培养,观察其成牙情况,建立人牙胚再生的培养模式。设计、时间及地点:细胞水平的动态观察实验,于2005-03/2006-12在福建师范大学生命科学学院和发育与神经生物学福建省高校重点实验室完成。材料:12周流产人胚胎由福州市第二人民医院妇产科提供,6～10周龄Blab/c裸鼠。方法:无菌条件下分离新鲜的12周流产人胚胎下颌,分离磨牙牙胚。将牙胚移植到裸鼠肾囊膜下分别培养4,8,12和16周,取移植块。主要观察指标:以苏木精-伊红染色和Azon法染色后进行形态学观察。结果:生长4周的人牙胚内,可以观察到造釉器和牙乳头的细胞发生形态改变,牙上皮细胞和间充质细胞开始极化,胞体变长形成前成釉质细胞和前成牙本质细胞。生长8周时,前成釉质细胞和前牙本质细胞的极化变得更加明显,细胞已变成高柱状,在未来牙尖区域可发现少量牙本质的形成。培养12周时,可见连续完整的牙本质。生长16周的人牙胚,已经形成连续完整的成釉质细胞,牙釉质、牙本质和成牙本质细胞层。结论:肾囊膜是人牙胚组织体外培养的良好模式。

转乙肝表面抗原基因植物疫苗研究的进展

介绍了转基因疫苗生产的原理及方法,综述了转乙肝表面抗原基因植物疫苗的研究进展,探讨了转基因植物研究中所存在的问题及其转基因植物疫苗的优点及前景。

紫球藻抗菌蛋白的纯化及其部分性质研究

紫球藻提取液经硫酸铵沉淀、HA柱层析后分离纯化出1种抗菌蛋白。经SDS-PAGE测定,2个亚基的相对分子量为21.0 kD与30.0 kD;此抗菌蛋白对热敏感,氨基酸组成分析显示含有17种氨基酸,含量较高的是谷氨酸、甘氨酸和天冬氨酸。纯化的蛋白对产黄青霉有较强抑制作用,其抗真菌活性比抗细菌活性强。

小鼠胚胎肺分支形态发生的分子机制

哺乳动物在早期胚胎发育过程中,肺发育经历了气管分支的形态发生、树样结构上皮管道的形成,并伴随着血管的发育而发生的气体通路和肺泡的分化等过程.肺发生涉及到许多复杂的分子机制.肺形态学的变化受到一系列持家基因、激素、核转录因子、生长因子及其他因素的综合调控.目前已经发现决定肺分支形态发生的许多重要因子.本文根据目前最新研究进展,阐述了小鼠胚胎肺在分支形态发生过程中,上皮与间充质之间诱导的信号通路之间的相互作用及其对呼吸树形态建成的调控机制.

基因工程技术在植物品质改良中的应用(综述)

从淀粉品质改良、蛋白质品质改良、增强果蔬食品保鲜性能、提高植物营养保健成分和植物疫苗生产等5个方面,总结基因工程技术所取得的成就。

RNA原位杂交技术的一些应用技巧

目的:检测基因在动物组织或细胞中的时空表达模式。方法:转录反义RNA探针;利用RNA原位杂交技术检测人和小鼠牙原基中若干基因的表达。结果与结论:通过优化条件,转录出完整的反义RNA探针,并成功地利用RNA原位杂交技术在组织中检测到基因的表达;分析了一些在RNA原位杂交的过程中可能碰到的问题及其解决方法。

人牙髓干细胞的高效扩增及其对分化潜能的影响

目的检测不同接种密度对人牙髓干细胞(Dental pulp stem cells,DPSCs)增殖能力和分化潜能的影响,建立其高效扩增方法。方法不同密度接种培养DPSCs,计算细胞产量、倍增次数,观察细胞形态、检查克隆形成率和钙结节形成能力。结果低密度培养的乳牙牙髓干细胞(Stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)始终保持较高增殖、克隆形成率;而低密度DPSCs只在前3代保持与常规密度相似的增殖、克隆形成效率,3代以后其增殖和分化能力明显下降。低密度培养条件下DPSCs的矿化能力与常规密度的没有明显差别。结论1.5～3cells/cm2低密度接种培养DPSCs有利于细胞快速扩增,扩增后的细胞保持较高的增殖和分化潜能。SHED的增殖能力、克隆形成效率和钙结节形成能力均优于DPSCs。

人和小鼠Dspp基因的克隆及其在成牙本质细胞中的表达检测

目的克隆人和小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因片断,建立一种从分子水平检测成牙本质细胞分化的方法。方法制备特异性的人和小鼠Dspp基因片断的mRNA反义探针,再将其分别与人和小鼠具有成牙本质细胞的牙胚组织进行原位杂交,检测Dspp基因表达情况。结果本实验制备出的人和小鼠Dspp基因的mRNA反义探针在特定条件下能对各自的成牙本质细胞中Dspp基因的表达进行检测。结论本方法可以作为一种从分子水平检测人或小鼠成牙本质细胞分化的工具。

牙齿发育与BMP信号通路的关系

牙齿的发育过程,包括由胚胎早期预定成牙部位到发育形成完整的牙齿,是一个复杂的连续过程,牙齿的发育过程实际上就是牙源性上皮和颅神经嵴来源的牙源性间充质之间的相互作用的结果。骨形态发生蛋白(BMPs)最初被认为是一种具有高效骨诱导性的蛋白,能够诱导未分化的间充质细胞转化形成软骨以及骨组织,之后的研究证明BMPs在胚胎发育过程中起到至关重要的作用。至今为止经过众多科学家的研究,牙齿发育与BMP信号通路的关系已经研究的相当透彻。

牙齿发育与FGF信号通路的关系

牙齿发育的过程,是一个连续并且复杂的过程。牙齿发育的分子机制可总结为:通过外胚层来源的上皮和其下方的间充质相互作用,来调节牙齿的形态学发生。成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor,FGF)是一类肽类分子,它们通过与细胞膜上特异性受体的结合来发挥作用,以此来调节细胞生长。并且具有多种生物活性,是胚胎生长发育和成体组织创伤修复中最具有重要功能的细胞因子。通过众多科学研究,牙齿发育与FGF信号通路的关系已经研究的比较透彻,在牙齿的生长发育过程中,FGF发挥了关键性作用。

外源基因表达系统的研究进展

随着DNA重组技术的发展,外源基因的表达问题受到越来越多的关注。常用的外源基因表达系统有原核表达系统和真核表达系统,两种表达系统各有优缺点。本文主要对这两类表达系统的研究进展、存在问题等做一概述。

海水小球藻抗菌多糖的分离纯化

海水小球藻抗菌粗多糖以DEAE-纤维素52离子交换层析分离,得到一个A1洗脱峰。经纯度鉴定,A1为均一组分,总糖含量为89.2%,硫酸根含量为12.0%,含有葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖、核糖等单糖组分。红外光谱显示海水小球藻多糖具有多糖类物质的一般特征,是一个硫酸化程度较高的多糖。