Sonic hedgehog参与人胰岛素样生长因子-1信号通路促使下颌骨髁突过度生长的实验研究

目的:通过活体动物实验观察人胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor,IGF-1)与Sonic hedgehogxinh(Shh)介导的信号通路促进了髁突过度生长的作用。方法:制备IGF-1高表达表型转基因小鼠模型。将转基因鼠随机分为为5组:Cyclopamine刺激组;NVP-AEW541刺激组;IGF-1刺激组;Cyclopamine+IGF-1刺激组;生理盐水刺激组:空白对照,每组3只。随机选取一侧关节腔自31d起隔天连续进行上述药物注射,共14d,注射结束后收获实验侧髁突,固定,比较两侧髁突大小,分析差异性。结果:Cyclopamine刺激组及生理盐水刺激组实验侧与对照侧髁突大小比较差异无统计学意义。NVP-AEW541刺激组、IGF-1刺激组以及Cyclopamine+IGF-1刺激组实验侧髁突小于对照侧髁突(P<0.05)。结论:IGF-1介导的信号通路促进了髁突肥大髁突的过度生长。

Shh信号通路对髁突肥大软骨细胞凋亡活性影响的研究

目的:探讨Sonic hedgehog(Shh)信号通路对髁突肥大软骨细胞凋亡活性的影响。方法:取正常髁突软骨3例,髁突肥大软骨6例,酶消化法分离培养其软骨细胞后,用Western blotting和Real-time PCR法分别检测两种软骨细胞中凋亡效应因子cleaved-caspase-3和BCL-2的表达;用免疫组化和Western blotting法比较正常髁突软骨和髁突肥大软骨中Shh和Smo的表达;用Shh、Cyclopamine、LY294002和U0126分别刺激两种软骨细胞,观察cleaved-caspase-3和BCL-2表达的变化。结果:与正常髁突软骨相比,髁突肥大软骨细胞中cleaved-caspase-3的表达水平降低,BCL-2 m RNA的表达水平升高(P<0.05);在髁突肥大软骨中Shh、Smo呈高表达;Shh刺激组软骨细胞的凋亡活性降低(P<0.05),Cyclopamine刺激组软骨细胞的凋亡活性增加(P<0.05),LY294002及U0126刺激组软骨细胞的BCL-2 m RNA表达水平均降低(P<0.05)。结论:Shh可通过介导PI3K/AKT和MAPK/ERK通路而抑制髁突肥大软骨细胞的凋亡,促进髁突肥大的病理进程。

Sonic Hedgehog串话人胰岛素样生长因子-1介导的信号通路促进髁突肥大软骨过生长的机制

目的：探讨Sonic hedgehog（Shh）与人胰岛素样生长因子-1（IGF-1）介导的信号通路在促进髁突肥大病理进程中的作用及串话机制。方法：选取正常髁突及髁突肥大软骨标本,以及骨髓间充质细胞（BMSC）,体外分离进行平板及三维培养,按不同的实验目的划分为不同的比较组,每个比较组按不同的实验目的各含不同的刺激组,分别添加IGF-1,NVP-AEW541,Cyclpamine,U0126/LY294002因子等单独或联合刺激,孵育后收获细胞进行计数或进行real-time PCR或Western Blot实验。结果：髁突肥大软骨细胞中加入Cyclopamine,COLX、PCNA、MMP-13基因和蛋白表达量明显降低,而cleaved-caspase-3明显升高（P〈0.05）,细胞数目明显降低（P〈0.05）。添加Cyclopamine刺激的髁突肥大软骨细胞,磷酸化状态P-AKT和P-ERK均显著降低（P〈0.05）,Cleavedcaspase-3蛋白表达水平显著升高（P〈0.05）。在BMSC加强IGF-1及Shh的刺激后COLX、COL2、PCNA、MMP-13、BCL2基因的表达量均明显升高（P〈0.05）。单独加强IGF-1或Shh刺激,均可引起另一信号通路的加强（P〈0.05）。结论：Shh与IGF-1介导的信号通路存在串话机制促进肥大髁突软骨细胞及间充质细胞增殖、分化及凋亡的作用,并通过PI3-K AKT和MAPK-ERK通路发挥作用。