3-甲基腺嘌呤通过抑制自噬和内质网应激途径保护睡眠紊乱诱导的大鼠肝损伤

目的:观察与分析3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对睡眠紊乱诱导的大鼠肝损伤的保护作用及其相应的机制。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和3-MA组,每组10只,对比各组大鼠实验前后体质量变化。处死大鼠后进行以下实验分析:(1)采用ELISA法检测各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)与天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平变化;(2)运用HE观察肝脏组织形态学的改变;(3)使用透射电子显微镜观察各组大鼠肝细胞中自噬体的形成;(4)采用TUNEL法评估各组肝细胞的凋亡水平,并计算凋亡指数;(5)通过RT-PCR与Western blot检测肝组织自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)、Beclin1、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)及Caspase-3的mRNA与蛋白表达水平。结果:动物实验结果表明睡眠紊乱会诱导大鼠肝损伤,同时伴随肝脏自噬与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)水平升高;相比对照组,模型组大鼠造模后体质量增量明显减小,而肝细胞形态结构变化明显,同时,血清ALT与AST水平、凋亡指数、自噬体数量及相关标志性蛋白表达水平均明显上升(P<0.05);相比模型组,肝细胞形态结构、血清ALT与AST水平、凋亡指数、自噬体数量及相关标志性蛋白表达水平均有改善(P<0.05)。结论:睡眠紊乱可诱导SD大鼠肝损伤,进而通过上调LC3-Ⅱ、Beclin1及GRP78蛋白表达和mRNA水平激活自噬与ERS信号通路,3-MA可拮抗自噬与ERS信号通路来保护肝细胞及抗凋亡作用。