紫草素对鼻咽癌细胞生物学行为影响的研究

目的研究紫草素(shikonin)对体外鼻咽癌CNE-1细胞增殖、凋亡、细胞周期及迁移能力的影响。方法采用细胞生长曲线绘制法及MTT法检测紫草素作用后细胞增殖抑制情况;在荧光显微镜下利用Hoechst33258观察细胞的凋亡现象;应用流式细胞仪(FCM)分析细胞周期的变化;划痕擦伤实验检测紫草素对细胞迁移的影响。结果不同浓度紫草素对CNE-1细胞的增殖均有抑制作用,与无药物处理对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),并呈时间和浓度依赖性;Hoechst33258染色检测发现细胞核出现致密的固缩形态及颗粒状荧光;FCM检测细胞周期显示,CNE-1细胞生长被阻滞在G0/G1期;划痕擦伤实验显示紫草素在一定浓度范围内可以抑制CNE-1细胞迁移。结论紫草素能明显抑制体外鼻咽癌CNE-1细胞增殖及迁移,阻滞细胞周期于G0/G1期,并诱导CNE-1细胞凋亡。

内耳道不同手术入路的显微解剖比较研究进展

20世纪60年代美国House引进显微外科技术,开创了以听神经瘤切除术为代表的耳神经显微外科。此后,各国耳科专家在此基础上又衍生了多种进入内耳道、桥小脑角、岩尖和斜坡等难以到达的颅底深部手术入路。彻底切除内耳道肿瘤,完整保留和恢复面神经甚至耳蜗神经功能是此类手术治疗的理想结果[1]。但目前内耳道手术肿瘤全切率及术中面神经解剖及功能保留率不尽理想,仍是耳神经外科领域所面临的难题,其影响因素包括肿瘤的大小,肿瘤与面神经的关系,

miRNA-7通过EGFR/PI3K/Akt通路抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖

目的:探讨过表达微小RNA(microRNA-7,miRNA-7)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)5-8F细胞增殖能力的抑制作用及其与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,也称Akt)通路的关联情况。方法:利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-7模拟物转染入人鼻咽癌5-8F细胞中;采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-7的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖能力变化;细胞平板克隆形成实验观察转染后细胞克隆能力变化情况;real-time PCR法检测EGFR/PI3K/Akt通路各mRNA表达水平的变化;Western blotting法检测EGFR/PI3K/AKT通路各蛋白表达水平的变化。结果:real-time PCR结果显示,转染miRNA-7模拟物组细胞中的miRNA-7表达水平显著高于无关序列组和空白对照组(P<0.01);5-8F细胞转染miRNA-7模拟物后,细胞增殖和平板克隆能力均呈明显下降(P<0.01);real-time PCR及Western blotting结果显示,转染组的5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路中各主要成员的mRNA及相应蛋白表达水平均有明显降低(P<0.01)。结论:过表达miRNA-7可以显著降低鼻咽癌5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路各主要成员mRNA和蛋白的表达水平,进而显著抑制其增殖和平板克隆形成能力。

全长型脾酪氨酸激酶基因转染对人喉鳞癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的探讨全长型脾酪氨酸激酶[full-length spleen tylosine kinase,SYK(L)]基因转染对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法建立人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为SYK(L)重组质粒转染组、阴性对照质粒转染组和生理盐水组,分别向瘤体内注射SYK(L)重组质粒p IRES2-EGFP-SYK(L)及脂质体混合物、阴性对照质粒p IRES2-EGFP及脂质体混合物和生理盐水,观察肿瘤生长情况。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time fluorescence polymerase chain reaction,Q-RT-PCR)、Western blot法检测各组瘤体内的SYK(L)mRNA及蛋白表达水平。结果 SYK(L)重组质粒转染组的肿瘤平均体积为367.61±81.23mm3,明显小于阴性对照质粒转染组900.20±131.41mm3及生理盐水组930.71±143.73mm3,差异有统计学意义(F=99.91,P<0.01);Q-RT-PCR结果显示SYK(L)重组质粒转染组瘤体内mRNA相对表达量为2.268±0.075,明显高于阴性对照质粒转染组(1.212±0.025)及生理盐水组(1.175±0.031)(F=102.01,P<0.01);Western blot法检测结果显示SYK(L)重组质粒转染组瘤体内相对蛋白含量(0.834±0.021)明显高于阴性对照质粒转染组(0.243±0.041)和生理盐水组(0.301±0.039),差异有统计学意义(F=104.13,P<0.01)。结论全长型脾酪氨酸激酶基因转染对人喉鳞癌裸鼠移植瘤有明显的生长抑制作用,有望成为基因治疗喉癌的新靶点及途径。

中药紫草素对鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨紫草素(shikonin)对体外鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响。方法经紫草素处理后的人鼻咽癌细胞株CNE-2和永生化非癌性人鼻咽上皮细胞株NP-69,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制情况;在荧光显微镜下利用Hoechst33258荧光染色法观察药物处理后细胞的凋亡现象;应用流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡率的变化。结果不同浓度紫草素对CNE-2细胞的增殖均有抑制作用,与无药物处理对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),并呈时间和浓度依赖性,其中10μg/ml紫草素处理CNE-2细胞72 h后的抑制率高达84.64%;Hoechst33258染色检测发现典型的凋亡细胞核形态学变化;流式细胞仪检测显示,CNE-2细胞实验组的凋亡率高于对照组(P<0.05)。结论紫草素能明显抑制体外鼻咽癌CNE-2细胞的生长,呈浓度与时间依赖性,并诱导其凋亡。

细胞DNA异常甲基化与肿瘤演变的研究进展

调控失衡的多阶段复杂过程的共同结果.以往基因突变给肿瘤贴上了一张标签,可以通过对基因组的检测发现肿瘤[1].随着人类基因分子生物学技术的发展,科学家发现肿瘤的发生不仅包括遗传学上的改变如基因突变或缺少等,而且还需要表观遗传修饰等更高层次的遗传信息.表观遗传修饰包括DNA甲基化、组蛋白修饰、小RNA干扰、染色质重塑等染色质结构上的变异,而无基因序列水平的改变[2].在肿瘤研究中以DNA甲基化研究较多,它是一种可逆的表观遗传学变化[3],广泛存在于真核细胞的有丝分裂中.DNA异常甲基化是引起基因组不稳定和基因表达异常的分子基础,主要表现为肿瘤细胞中普遍性低甲基化和CpG岛区域性高甲基化,其所引起的基因功能的改变和表达沉默被认为是除DNA突变、缺失以外导致肿瘤发生和进展的又一个重要机制,并被认为是人类肿瘤早期的一个特征,故而成为近年来肿瘤发生、发展分子机制的主要研究热点之一.因此,本文将对DNA异常甲基化与肿瘤发生发展的相关研究进展进行综述.