老年人非酒精性脂肪肝与载脂蛋白E基因多态性关系的研究

目的探讨老年人非酒精性脂肪肝(NAFL)与载脂蛋白E(apoE)基因多态性的关系。方法对浙江省台州市农村536例60岁以上老年人和182例健康对照者采用聚合酶链法检测载脂蛋白E基因多态性和等位基因特异性寡核苷酸探针双色法检测112位和158位密码子双突变点,应用颜色补偿档案及熔解曲线分析。ELISA法检测apoE、apoE4基因表达程度。结果NAFL组和肝脂肪浸润(FIL)组以杂合子E2／3为主,分布频率分别为E2／3>E3／4>E3／3>E2／4>E2／2和E2／3>E3／3>E3／4>E2／4;apoE基因表达水平显著上调(P<0．05)。结论老年人NAFL的发生有一定的基因和家族聚集性,E2／3型是遗传易感基因,并且apoE基因112位点和158位点密码子的搭配及纯或杂合子和脂肪肝的发生及其疾病程度密切相关。

颜色补偿实时定量PCR及熔解曲线快速检测载脂蛋白E基因突变

目的探讨应用颜色补偿实时定量PCR及熔解曲线快速检测载脂蛋白E基因两个密码子突变及临床应用价值。方法选取60岁以上老年非酒精性脂肪肝(NAFL)108例和体检正常老年者96例为研究对象。首先以LC-Red640和LC-Red750标记两条针对112和158位编码子的检测探针5′端,相应的锚定探针在3′端被荧光标记,再从人基因组DNA中快速循环PCR特异引物扩增apoE基因265bP片段并与特异探针杂交后,引发荧光共振能量转移,通过异源杂交的出现和错配碱基的类型的熔解参数来完成野生型和突变基因分型。结果峰值对应着序列特异的熔解温度点,各基因型的模板均呈现良好的峰形。NAFL组以杂合子E2/3、E3/4基因型频率最高,与正常组比较差异有显著意义(P【0.05),分布频率为E2/3(35%)、E3/4(25%)、E3/3(35%)、E2/4(2%)、E4/4(2%)、E2/2(1%);NAFL组E4/4频率高于对照组;NAFL组apoE基因总浓度表达水平明显升高(P【0.05)。结论采用PCR结合熔解曲线法进行apoE基因多态性检测,其操作简便省时,不易交叉污染;获得的各种基因类型特征性强,适用于临床快速诊断分型。apoE基因多态性与老年NAFL存在相关性,携带E3/4、E2/3型或E4/4型的个体存在,提示对老年NAFL遗传易感性方面起到重要作用。