铁皮石斛PCR鉴定引物的比较和筛选研究

目的:比较并筛选基于PCR技术的铁皮石斛成分鉴定的高特异性和高灵敏度引物。方法:选取1组专利报道和2组文献报道的铁皮石斛特异性PCR鉴定引物,优化其退火温度,比较其特异性和灵敏度,筛选出高特异性和高灵敏度的引物。结果:3组引物的扩增能力、特异性和灵敏度均存在差异,其中1组以铁皮石斛ITS2区为靶标、引入错配碱基的双阻滞铁皮石斛成分鉴定引物,具有最佳的特异性和灵敏度。结论:通过比较3组铁皮石斛特异性PCR引物,优选出1组铁皮石斛成分鉴定引物,为铁皮石斛成分及其产制品的鉴定提供了参考依据。

石斛基因组DNA提取方法比较研究

目的:比较3种基因组DNA提取试剂盒对提取富含多糖多酚类物质的铁皮石斛和霍山石斛鲜叶及冻叶的提取效果。方法:对提取的DNA进行纯度及产率检测、电泳质量分析及ITS2 PCR扩增效率检测。结果:市售基于蛋白酶K消化法的试剂盒不适用于石斛DNA提取;基于改良CTAB法的试剂盒更适用于需要较高DNA模板量的石斛鲜叶的DNA提取;基于改良SDS法的试剂盒更适用于石斛冻叶的DNA提取,该法提取的鲜叶DNA完整性最佳,更适用于对DNA完整度要求较高的DNA大片段的分析研究。结论:基于改良CTAB法和改良SDS法的试剂盒提取的石斛鲜叶及冻叶的基因组DNA均适用于常规分子检测。