牡荆素对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的影响

目的探讨牡荆素(vitexin)对大鼠缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响及其相关机制。方法成年雄性Spra-gue-Dawley大鼠随机分为6组:对照(CON)组,缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组,牡荆素3个剂量组(VT,100、50、25μmol/L)及葛根素阳性对照组(120μmol/L)。应用Langendorff灌注技术,给予心脏30 min缺血/60 min再灌注,通过TUNEL检测和电镜观察细胞超微结构研究细胞凋亡以及免疫组化技术检测Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果与CON组相比,I/R组心肌缺血/再灌注后心肌凋亡细胞(TUNEL染色)数量、凋亡率明显增加;与I/R组相比,VT(100、50、25μmol/L)组心肌缺血/再灌注后心肌凋亡细胞(TUNEL染色)数量明显减少(P<0.01);I/R组心肌Bax蛋白表达明显高于VT组心肌(P<0.01),VT组心肌Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值明显高于I/R组心肌(P<0.05)。结论牡荆素可通过增加Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达而减少I/R诱导的大鼠心肌细胞凋亡。

牡荆素对麻醉犬血流动力学及心肌耗氧量的影响

目的研究牡荆素对麻醉犬血流动力学及心肌耗氧量的影响。方法杂种犬30只,人工呼吸下开胸,给药后观察其心率(HR)、血压(MAP)、心输出量(CO)、冠脉血流量(CBF)、左室压(LVP)及血氧含量。计算冠脉阻力(CVR)和体循环总外周阻力(TPR)等血流动力学指标。采用多普勒超声血流仪测定麻醉犬冠脉流量和心输出量,用血气分析仪测定血氧含量。结果牡荆素可减慢心率和左心室内压,并显著增加麻醉犬冠脉血流量和心输出量,降低总外周血管阻力和冠脉阻力,提高心搏出量、心搏指数及心脏指数。结论牡荆素可显著改善麻醉犬血流动力学参数。

鬼针草总黄酮提取工艺中试研究

目的对鬼针草总黄酮提取工艺进行研究,确定生产工艺路线,并进行中试生产初步试验,为工业生产打下基础。方法先以70%乙醇提取,再通过HPD100大孔树脂吸附纯化,最后用乙醇进行纯化;以提取物中总黄酮和金丝桃苷含量为考察指标,考察鬼针草的提取工艺。结果确定鬼针草总黄酮制备工艺路线,制得鬼针草总黄酮(总黄酮含量>50%),平均产率为1%。结论该工艺稳定可行,适合于工业化大生产。

正交试验法优选玉屏风总苷的提取工艺

目的:优选玉屏风散中有效部位-玉屏风总苷(TGYPF)的提取工艺。方法:设计L9(34)正交试验,采用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷的含量作为质控指标,考察乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取时间(C)和提取次数(D)4个因素对玉屏风总苷(TGYPF)提取的影响,优化提取工艺。结果:最佳提取条件为:A2B3C3D2,即80%乙醇,8倍量,提取2次,每次3 h。结论:该提取工艺稳定性和重现性良好,简便,快速,可行。

HPLC-ELSD法同时测定玉屏风总苷中黄芪皂苷Ⅱ及黄芪甲苷

目的建立HPLC-ELSD法测定玉屏风总苷中黄芪皂苷Ⅱ及黄芪甲苷。方法色谱柱为岛津VP-ODS(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈和0.2%的甲酸溶液,梯度洗脱;柱温为40℃;体积流量1 mL/min;ELSD参数为漂移管温度110℃,N2体积流量3.10 L/min。结果黄芪皂苷Ⅱ在0.62～19.28μg之间呈良好的线性关系(r=0.999 0),平均回收率为99.49%,RSD为1.48%(n=6)。黄芪甲苷在0.36～11.50μg间呈良好线性关系(r=0.999 6),平均回收率为99.33%,RSD为1.76%(n=6)。结论本法简单易行,方法学验证符合要求,适用于玉屏风总苷中黄芪皂苷Ⅱ及黄芪甲苷的定量测定。

牡荆素与牡荆素鼠李糖苷大鼠在体肠吸收对比研究

目的通过在体单向肠灌流实验比较牡荆素及牡荆素鼠李糖苷的肠吸收机制。方法运用大鼠在体单向肠灌流模型并采用HPLC测定肠灌流液中牡荆素及牡荆素鼠李糖苷的含量,计算其有效渗透系数。结果牡荆素及牡荆素鼠李糖苷浓度为80 mg·L-1时,同一时间点同一肠段牡荆素和牡荆素鼠李糖苷之间的有效渗透系数差异无显著性(P>0.05),同一时间点不同肠段(十二指肠、空肠、回肠、结肠)牡荆素和牡荆素鼠李糖苷的有效渗透系数均差异无显著性(P>0.05);牡荆素及牡荆素鼠李糖苷浓度为20、40、80、160 mg·L-1时,同一时间点同一浓度牡荆素和牡荆素鼠李糖苷之间的有效渗透系数差异无显著性(P>0.05),同一时间点不同浓度牡荆素和牡荆素鼠李糖苷的有效渗透系数均差异无显著性(P>0.05)。结论牡荆素及牡荆素鼠李糖苷在肠吸收方面两者不存在明显的差异,且在十二指肠、空肠、回肠和结肠段的吸收均较差,无特殊的吸收窗;不同浓度对牡荆素和牡荆素鼠李糖苷的吸收无明显的影响。

高效液相色谱-56蒸发光散射检测法测定补阳还五苷酮胶囊中黄芪甲苷的含量

目的建立补阳还五苷酮胶囊中黄芪甲苷的含量测定方法。方法高效液相色谱-蒸发光散射检测法,Shim-PackVP-ODS（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相：乙腈-水（35∶65）,流速1.0 ml·min^-1;蒸发光散射检测器检测;气化温度为105℃,N2气体流速2.30 L·min^-1。结果黄芪甲苷峰与相邻组分峰达到基线分离,在所试量（2.13-10.64）μg范围内与峰面积值呈良好的线性关系,回归方程为Y=13968X-8.557 5,r=0.999 5（n=5）;平均回收率为99.57%,RSD为0.59%（n=6）。结论该法样品处理简单,准确性高,精密度好,可用于补阳还五苷酮中黄芪甲苷的含量测定。

牡荆素解离常数的测定

目的测定牡荆素的解离常数(pKa)。方法采用电导法测定电导率(κ),以科尔劳乌施经验公式计算无限稀释下苯酚钠的摩尔电导率(∧m∞)。结果30℃牡荆素的电离平衡常数(K)为8.77×10^-10。结论氯化钠溶液用于临床配制药物,pH为8.3时,85%的牡荆素以分子形式存在。

RP-HPLC法测定牡荆素原料中的有关物质

目的建立RP-HPLC法牡荆素原料中的有关物质测定方法。方法采用RP-HPLC法,以乙腈-水-冰醋酸(20∶80∶1)为流动相,色谱柱为C18柱(150 mm×4.6mm,5μm),柱温25℃,检测波长为270nm。结果牡荆素原料与其降解杂质峰基线分离良好,三批牡荆素的有关物质分别为0.59%、0.61%和0.52%,均在规定的限度(2.0%)以内。结论该法简便,专属性强,结果准确,适合牡荆素原料的有关物质的测定。

ICP-MS法测定注射用牡荆素铅、镉、砷、汞、铜的含量

目的:测定注射用牡荆素中的铅、镉、砷、汞、铜等5种重金属元素的含量,探讨牡荆素注射剂重金属的质量控制方法。方法:经微波消解后的注射用牡荆素样品,加入铅、镉、砷、汞、铜等内标元素,ICPMS(电感耦合等离子体质谱)法测定样品中铅、镉、砷、汞、铜的含量。结果:铅、镉、砷、汞、铜的检出限分别为0.4、0.03、0.09、0.04及0.05ng/mL;且线性关系良好(r>0.998);铅、镉、砷、汞、铜回收率分别为97.8%、97.2%、104.0%、91.2%和92.8%。结论:本方法操作简便、灵敏度高、专属性好,适用于注射用牡荆素中铅、镉、砷、汞、铜的质量控制。

注射用牡荆素Beagle犬长期毒性试验研究

目的探讨注射用牡荆素的无毒反应剂量。方法选取健康Beagle犬24只,随机分为牡荆素高剂量组[A1组,50 mg/(kg·d)]、中剂量组[A2组,20 mg/(kg·d)]、低剂量组[A3组,8 mg/(kg·d)](均静脉滴注给药)和对照组(B组,静脉滴注等体积0. 9%氯化钠注射液),各6只,用药3个月,给药1. 5个月、3个月(停药次日)和恢复期结束(停药1个月)时检查(及剖检),观察各组犬血液学、血液生化学、尿常规、眼科和心电图各项检测指标的变化,脏器质量及系数、大体观察和组织病理学改变,以及摄食、体质量和体温的改变。结果不同剂量注射用牡荆素对上述指标总体无明显影响,且在犬体内均呈线性方式代谢,暴露量随给药时间延长而有所减小,未见明显毒副反应及中毒靶器官。结论 Beagle犬连续3个月静脉滴注注射用牡荆素较安全,未发现明显毒副反应,安全无毒剂量大于50 mg/(kg·d)。

桂枝茯苓软胶囊的制备及质量控制

目的:研究桂枝茯苓软胶囊的制备及其质量控制方法。方法:鉴别采用薄层色谱法,含量测定采用高效液相色谱法,色谱柱Shim-PackVP-ODS(150mm×4.6mm),流动相:乙腈-水-冰乙酸(42∶58∶0.8),检测波长:273nm;柱温:40℃;流速:1mL/min。结果:桂枝茯苓软胶囊中丹皮酚A=10794.70C+9783.24,在0.1456μg-1.7472μg范围内线性关系良好(R=0.9999)。结论:桂枝茯苓软胶囊制备工艺简单,质量控制方法可靠,重现性好。

法莫替丁胃内漂浮型双层缓释片的研究

目的研制法莫替丁胃内漂浮型双层缓释片并考察其体外释药行为。方法分别以湿法制粒的方法制备速释层和缓释层,压制胃内漂浮型双层片,紫外分光光度法测定法莫替丁的释放度,并记录起漂时间和持续漂浮时间。结果法莫替丁胃内漂浮型双层缓释片的释药曲线用Higuchi方程拟合,可维持24 h持续释放,起漂时间<5 min,持续漂浮时间>8 h。结论研制的法莫替丁胃内漂浮型双层缓释片制备工艺简单,质量稳定,释药速度平稳,达到设计要求。

补阳还五汤有效部位对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的研究补阳还五汤有效部位(总苷和黄酮)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法采用改良的线栓法,建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)脑缺血再灌注模型。将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏叶提取物(100 mg/kg)组和补阳还五汤有效部位高、中、低剂量(200、100、50 mg/kg)组。缺血再灌注24 h后进行神经功能缺失症状评分;TTC染色法检测脑梗死体积;腹主动脉取血并离心,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)水平,ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果与模型组相比,补阳还五汤有效部位能明显改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能障碍,减少大鼠脑组织梗死体积,显著抑制LDH活性,降低MDA和TNF-α、IL-1β、IL-6水平(P<0.01、0.05)。结论补阳还五汤有效部位对大鼠脑缺血再灌注损伤具有明显保护作用,其机制可能与抑制炎症因子的分泌和表达及减轻脑组织的炎症反应有关。

牡荆素对大鼠实验性心肌缺血损伤的保护作用及其机制

目的研究牡荆素对实验性心肌缺血大鼠心肌损伤的保护作用及对其能量代谢的影响。方法采用在体结扎大鼠心脏冠状动脉前降支法及舌下iv给予垂体后叶素(Pit)法建立大鼠心肌缺血损伤模型。在体大鼠缺血再灌注模型上,TTC染色法检测大鼠心肌梗死面积,并测定大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性;Pit致大鼠心肌缺血损伤模型上,检测大鼠心电图(ECG)、血清中LDH、CK、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及大鼠心肌组织中ATP酶活性,并观察大鼠心肌组织病理学改变。结果牡荆素6、3、1.5 mg/kg可显著降低大鼠心肌梗死面积(P<0.05、0.01),并能不同程度地降低血清中LDH和CK的活性。注射Pit后,模型组大鼠各时间点ECG的ST段变化值与对照组比较显著升高(P<0.01);葛根素与牡荆素(6、3 mg/kg)能显著降低Pit致大鼠心肌缺血升高的ST段(P<0.05、0.01)。牡荆素(6、3 mg/kg)降低血清中LDH和CK的活性(P<0.05、0.01),同时升高血清中SOD及GSH-Px的活性(P<0.05、0.01);牡荆素6、3、1.5 mg/kg和葛根素能明显升高缺血心肌组织中Na+,K+-ATP酶,Ca2+,Mg2+-ATP酶及总ATP酶的活性(P<0.05、0.01)。牡荆素(6、3 mg/kg)可明显改善缺血心肌的病理损伤程度。结论牡荆素对大鼠急性心肌缺血损伤具有明显保护作用,其作用与提高心肌组织抗氧化能力,改善心肌能量代谢有关。

柱前衍生RP-HPLC法测定芦笋中门冬氨酸的含量

目的：建立芦笋中门冬氨酸的含量测定方法。方法：采用柱前衍生RP-HPLC法,分析色谱柱为氨基酸分析专用ODS柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,柱温27℃,梯度洗脱,检测波长为360 nm。结果：门冬氨酸与其它氨基酸组分基线分离良好,在所试浓度（2.01-50.24）μg.mL^-1范围内与峰面积值呈良好的线性关系,回归方程为Y=7.5×10^3X-1.3×10^4,r2=0.999 9（n=5）;平均回收率为98.28%,RSD为1.85%（n=6）。结论：该法样品处理简单,准确性高,精密度好,可用于芦笋中门冬氨酸的含量测定。

注射用牡荆素Beagle犬毒代动力学研究

目的探讨牡荆素(vitexin)在Beagle犬血液的毒代动力学规律及组织分布。方法Beagle犬静脉滴注8、20和50 mg·kg^-1剂量的牡荆素,不同时间点采集血液样本,HPLC测定其血浆中药物浓度。结果Beagle犬静脉滴注“注射用牡荆素”8、20和50 mg·kg^-1剂量,在给药d1、d22、d44和d83血药浓度检测显示牡荆素在Beagle犬体内均呈线性方式代谢。其中在50 mg·kg^-1剂量下,牡荆素在Beagle犬体内先有显著性蓄积,后蓄积现象消失,且暴露量随给药时间延长而有所减小;在8、20 mg·kg^-1剂量下,牡荆素在Beagle犬体内无蓄积现象,且暴露量随给药时间延长而减小。结论在8、20 mg·kg^-1剂量下,Beagle犬静脉滴注“注射用牡荆素”,犬体内无蓄积现象。

利用高效液相色谱法建立玉屏风总苷的指纹图谱

目的：以黄芪皂苷Ⅱ为参照峰,建立玉屏风总苷HPLC-ELSD的指纹图谱,对玉屏风总苷进行质量控制。方法：采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Agilent C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;以乙腈和0.1%甲酸为流动相进行梯度洗脱,柱温40℃,流速1.0ml·min^-1,漂移管温度110℃,N2载气流速3.30 L·min^-1。结果：建立了玉屏风总苷的HPLC-ELSD的指纹图谱,确定了17个共有峰,并鉴定了其中4个共有峰,各峰相对保留时间的RSD在0.1%-0.75%之间,相对峰面积的RSD在1.68%-4.82%之间。10批总苷样品的相似度均大于0.94。结论：该法简单、精密度、稳定性、重现性好,适用于玉屏风总苷的指纹图谱检测。

Epac1-Rap1通路介导牡荆素对大鼠慢性心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究Epac1-Rap1通路介导牡荆素对大鼠慢性心肌缺血再灌注损的保护作用。方法:将48只清洁级雄性SD大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、牡荆素组(6、3、1.5mg/kg)和灯盏花素(3mg/kg)阳性对照药组。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支(缺血1 h再灌注14天)建立慢性心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemial reperfusion injury,MIRI)模型。记录大鼠不同时间点心电图ST段的变化,颈动脉插管检测大鼠左心功能变化,病理观察心肌纤维化程度,检测大鼠血清中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平以及心肌组织中Epac-1、Rap-1、Bax和Bcl-2蛋白表达,以此探索牡荆素在减轻大鼠慢性心肌缺血再灌注损伤中的作用机制。结果:与模型组相比,牡荆素用药组大鼠ST段的抬高幅度明显减小,血清中MDA含量降低,SOD和NADPH含量增高;牡荆素6、3mg/kg剂量组能明显改善慢性心肌缺血大鼠左心室功能并抑制心肌反应性纤维化的程度,同时能增加Bcl-2的蛋白表达,抑制Epac-1、Rap1、Bax蛋白过度表达。结论:牡荆素可以减轻大鼠慢性心肌缺血再灌注损伤,其机制与抑制脂质过氧化、调控心肌细胞Epac-1/Rap-1信号途径并抑制心肌细胞凋亡作用有关。