嗜酸乳杆菌发酵复方中药成分变化对腹泻小鼠的影响

为对比研究中药复方经发酵前后其成分变化对小鼠腹泻的影响,本研究采用高效液相色谱检测中药复方发酵前后成分的变化,以大肠杆菌K88所致腹泻小鼠为动物模型,对比研究中药复方发酵液与中药复方水提液对腹泻小鼠腹泻率、腹泻指数、免疫器官指数、肠道菌群及细胞因子IFN-γ、IL-4的影响。结果显示,中药复方发酵液中保留时间为16 min处的主要特征吸收峰消失,主要成分发生了转变,产生了一种新的特征吸收峰。饲喂试验显示发酵组小鼠腹泻指数与腹泻率显著低于中药水提组(p<0.05);中药复方发酵液在降低小鼠盲肠内大肠杆菌数量,提高双歧杆菌及嗜酸乳杆菌数量方面优于中药复方水提液;发酵组小鼠胸腺指数与肝脏指数显著高于水提组(p<0.05)。中药复方发酵液在提高IFN-γ/IL-4比值方面优于中药复方水提液。结果表明,中药复方经过发酵后成分发生了变化,形成了新的物质,对腹泻小鼠产生了有益的影响,应用效果优于中药复方水提液,为其在治疗腹泻方面的应用奠定基础。

嗜酸乳杆菌发酵中药对产肠毒素大肠杆菌K88所致腹泻的防治作用

本试验旨在研究嗜酸乳杆菌发酵中药对产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88所致腹泻小鼠的影响。选取6~8周龄巴比西小鼠(BALB/c)100只,分为4组,分别为空白对照组(Ⅰ组)、大肠杆菌感染模型组(Ⅱ组)、中药发酵组(Ⅲ组)及中药水提组(Ⅳ组),其中Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组小鼠均用"抗生素+大肠杆菌"模式造模。Ⅰ、Ⅱ组饲喂不含任何药物的基础日粮,Ⅲ、Ⅳ组分别在基础日粮中添加10%中药发酵液、10%中药水提液。统计分析各组小鼠腹泻率、腹泻指数、免疫器官指数、肠道菌群及细胞因子IFN-γ、IL-4的含量。结果显示,ETEC K88感染小鼠36h后,与Ⅱ组相比,Ⅲ、Ⅳ组小鼠腹泻指数(P<0.05)与腹泻率降低,且Ⅲ组腹泻指数显著低于Ⅳ组(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ组盲肠内大肠杆菌数量较Ⅱ组降低,双歧杆菌及乳酸菌数量提高,且Ⅲ组效果更优;Ⅲ、Ⅳ组的免疫器官指数均高于Ⅰ和Ⅱ组,且与Ⅱ组相比,Ⅲ组的脾脏指数、胸腺指数及肝脏指数分别提高了48.37%、29.57%、36.88%,且差异均显著(P<0.05);Ⅲ、Ⅳ组IFN-γ/IL-4比值较Ⅱ组提高,且Ⅲ组高于Ⅳ组。综上所述,乳酸菌发酵中药液具有降低腹泻小鼠腹泻率及腹泻指数,提高免疫器官指数,维持肠道菌群平衡及快速消除体内炎症反应等作用,可为开发防制ETEC所致的仔猪腹泻产品提供参考。

嗜酸乳杆菌发酵的复方中药对腹泻小鼠肠道菌群和结构的影响

目的:研究嗜酸乳杆菌发酵的复方中药对产肠毒素大肠杆菌K88所致腹泻小鼠肠道的保护作用。方法:将小鼠分为空白对照组、腹泻模型对照组、水提复方中药组和发酵复方中药组,以大肠杆菌K88所致腹泻小鼠为动物模型,研究发酵复方中药对小鼠腹泻的影响,扫描电镜及透射电镜观察对小鼠肠道结构的影响。结果:感染大肠杆菌K8836 h后,发酵复方中药组、水提复方中药组与腹泻模型对照组相比,小鼠腹泻指数与腹泻率显著降低(P<0.05),且发酵复方中药组显著低于水提复方中药组(P<0.05)。发酵复方中药组在降低盲肠内大肠杆菌数量,提高双歧杆菌及乳酸菌数量方面优于水提复方中药组。扫描电镜及透射电镜观察小鼠肠道结果显示,攻毒大肠杆菌K88后会损伤小鼠十二指肠微绒毛、杯状细胞及细胞连接等结构,复方中药水提液可以一定程度保护微绒毛及杯状细胞,对细胞连接的保护效果较弱。复方中药发酵液虽未能完全避免损伤,但对大肠杆菌K88攻毒所致小鼠十二指肠微绒毛、细胞连接及杯状细胞损伤的保护效果最好。结论:嗜酸乳杆菌发酵复方中药能够降低由产毒素大肠杆菌K88引起的小鼠腹泻率和腹泻指数,保护小鼠十二指肠,为开发产肠毒素大肠杆菌所致的仔猪腹泻产品提供参考。

4味常见中药对免疫抑制小鼠免疫功能及肠道菌群的影响

试验旨在研究4味中药对免疫抑制小鼠免疫功能和肠道菌群的影响,选取70只6周龄雌性昆明小鼠(18～20g),随机分为7组,分别为空白对照组、模型组、玉屏风组、乌梅组、蒲公英组、党参组、石榴皮组。采用环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)构建免疫抑制病理模型,从喂药的第3天起,2～7组以75mg/kg体重腹腔注射Cy,每隔1天注射1次,共注射4次,注射期间正常给药,模型组灌胃0.9%生理盐水,直至停止注射Cy的第2天,共给药7d。检测4味中药对免疫抑制小鼠体重、脾脏和胸腺指数、血液指标、分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、IgG及肠道菌群的影响。结果显示,与模型组相比,党参、乌梅、蒲公英、石榴皮可显著提高免疫抑制小鼠体重(P<0.05),其中乌梅组效果最好;显著提高免疫抑制小鼠免疫器官指数(P<0.05),但不能达到正常水平,其中蒲公英组脾脏指数最高;各中药组可提高白细胞数目(WBC)、显著提高红细胞数目(RBC)(P<0.05),但不能达到正常水平;各中药组可显著提高免疫球蛋白数量(P<0.05),党参组sIgA、IgG显著高于空白对照组(P<0.05),且和玉屏风组差异不显著(P>0.05);各中药组可显著降低大肠杆菌数量(P<0.05),显著增加双歧杆菌和乳酸杆菌数量(P<0.05),提高免疫抑制小鼠肠道菌群的丰富性和多样性,其中党参和蒲公英组小鼠肠道菌群的丰富度和多样性较好。综上说述,乌梅、蒲公英、石榴皮、党参均能够颉颃Cy对小鼠体重、免疫功能及肠道菌群的影响,可用于免疫增强类药物的开发。

抗大口黑鲈(Micropterus salmoides)蛙虹彩病毒药效模型的构建及其抗病毒中药筛选

大口黑鲈蛙虹彩病毒(LMBV)是一种严重危害大口黑鲈养殖的病害,但目前缺乏有效的防控手段。通过研究水温、鱼体大小以及攻毒剂量等条件对大口黑鲈感染蛙虹彩病毒的影响,构建体内抗病毒药效筛选模型,同时利用MTT法构建体外药物筛选模型,进而通过体外和体内药效模型,对29种中草药进行抗病毒药效评价,对筛选出药效最佳的2种中药进行体外和体内抗病毒药效评价。结果表明:水温和鱼体大小是影响体内药效模型的2个关键因子,最佳体内药效模型条件为:水温为25℃,鱼体大小20 g,攻毒剂量为0.1 mL 10^(9.33) TCID_(50)/mL。结合体内和体外药效模型结果,筛选出紫花地丁和黄连这2种中药具有较好的抗病毒效果的中草药。体内药效结果表明:黄连和地丁的添加量为0.6 g/kg和1.2 g/kg时,其对大口黑鲈的保护率最高均达到40%,而两者用药后病毒在肝组织的抑制率分别可达71.5%和67.0%。组织病理学结果表明,当药物使用浓度为0.6 g/kg和1.2 g/kg时,可有效降低因大口黑鲈蛙虹彩病毒感染所导致的肝和肾等组织的病理学损伤。上述结果表明,黄连和地丁均具有较好的抗蛙虹彩病毒的作用。

大口黑鲈免疫球蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

利用饱和硫酸铵盐析法和亲和柱层析法提取制备大口黑鲈血清的免疫球蛋白,进而通过常规方法4次免疫BALB/c小鼠,取脾脏组织细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞进行融合,经杂交瘤细胞筛选和单克隆化细胞培养制备单克隆抗体,并利用酶联免疫吸附法测定其抗体效价、灵敏度以及特异性反应。制备甲醛灭活大口黑鲈虹彩病毒疫苗进而免疫大口黑鲈,利用制备的单克隆抗体检测免疫后的抗体水平。制备获得2株大口黑鲈免疫球蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞A9E7和C9B9,其腹水抗体效价可达1∶2.187×10^(6)和1∶7.29×10^(5),两者对大口黑鲈免疫球蛋白的灵敏度为20ng和10ng,交叉反应试验结果表明,A9E7和C9B9均能与大口黑鲈免疫球蛋白特异性结合,A9E7与花鲈血清可发生交叉反应,而C9B9可与鳜血清发生交叉反应,且两者与鲫、草鱼、团头鲂、翘嘴鲌、黄颡鱼、光唇鱼、黄鳝、泥鳅等血清免疫球蛋白无交叉反应。免疫大口黑鲈虹彩病毒后,大口黑鲈体内抗体水平显著增加并于35d时达到峰值,其抗体效价可达1∶1280。具有特异性强、灵敏度高的大口黑鲈免疫球蛋白单克隆抗体可用于大口黑鲈病害的早期病害监测、免疫应答规律研究和疫苗研发。

拮抗产肠毒素大肠杆菌K88的中药和益生菌的筛选及其发酵工艺优化

目的：筛选对产肠毒素大肠杆菌（ETEC）K88具有较好抑菌效果的中药和益生菌,以发酵前后pH值变化和活菌数变化为指标,摸索益生菌发酵中药的影响因素,确定其最佳发酵工艺,并考察发酵液抑菌活性。方法：采用牛津杯法从20味中药和8株乳酸菌中筛选抑菌性能较好的中药和益生菌;通过单因素试验方法确定其最佳发酵工艺;采用牛津杯法检测发酵液抑菌活性。结果：6味单味中药和2株益生菌对K88具有较好的抑菌效果。益生菌发酵中药的最佳发酵工艺为：乌梅、蒲公英及五倍子按比例配制,接入4%的乳酸菌种子液,初始发酵pH值为5.5,37℃发酵24 h,发酵液抑菌效果优于乳酸菌菌液和中药水提液。结论：所筛选的中药组方配比及发酵工艺为开发防治产肠毒素大肠杆菌K88所致仔猪腹泻生物制剂提供了参考。