表面展示基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白胞外区细菌样颗粒的构建与鉴定

为了构建及鉴定表面展示新城疫病毒F蛋白胞外区细菌样颗粒。首先应用RT-RCR和PCR技术分别扩增F蛋白胞外区编码基因片段和乳酸乳球菌肽聚糖锚钩蛋白(protein anchor,PA)基因片段,通过融合技术将F蛋白胞外区编码基因与PA基因融合,然后利用pET-30a(+)质粒构建重组原核表达质粒,将其转化大肠杆菌BL-21(DE3),进行诱导表达,获得目的蛋白;用热酸处理乳酸乳球菌获得裸露的细菌样颗粒(BLPs),通过透射电镜进行鉴定;最后将复性后的F-PA蛋白与BLPs颗粒结合,经过SDS-PAGE、Western blot、细菌间接免疫荧光进行结合鉴定,并分析其结合效果灰度值判断其结合效率。结果显示,目的蛋白均能正确表达,成功制备出裸露的BLPs,目的蛋白复性后可与BLPs进行结合,其结合效率为1 U的BLPs与130 μg的F-PA蛋白结合。成功构建出表面展示基因Ⅶ新城疫病毒F蛋白胞外区BLPs,为后续研究新城疫亚单位黏膜疫苗奠定了基础。