乳酸菌介导巨噬细胞极化作用的研究进展

乳酸菌可以在肠道内定植,维持肠道菌群平衡,通过产生有机酸、细菌素等抗菌物质抑制肠道内有害菌的生长。大量研究表明乳酸菌发挥益生作用的主要机制可能与它的活化和维持机体免疫屏障机制及调节肠道生理屏障功能密切相关。乳酸菌作为益生菌与免疫细胞之间有着不可分割的关系,尤其是巨噬细胞。它通过各种途径与巨噬细胞作用,使巨噬细胞产生细胞因子,并向不同的表型极化,参与模式识别受体包括Toll样受体(TLRs)、Notch、核因子κB(NF-κB)信号通路等,从而降低机体的炎症反应。在这过程中,乳酸菌在机体调节中发挥重要作用。本文主要对乳酸菌介导巨噬细胞产生免疫调节的作用机制进行阐述。

表达结核分枝杆菌ESAT-6-Ag85A基因的侵入型乳酸菌免疫特性研究

目的:研究表达ESAT-6-Ag85A(ES85A)融合基因的侵入型乳酸菌对小鼠体内免疫特性的影响。方法:将真核表达载体p Valac与ES85A连接构建真核表达质粒,并将其分别电转到重组乳酸菌NC8-pSIP-409和NC8-pSIP-409-FnBPA感受态中,构建双质粒的乳酸菌p Valac-ES85A/409和p Valac-ES85A/Fn BPA。将其免疫BALB/c小鼠,检测表达ES85A的侵入型乳酸菌对小鼠树突状细胞(DCs)亚群CD80和CD83的影响以及血清中细胞因子的表达水平。结果:Western blot和免疫荧光证明ES85A蛋白成功表达;与空载体组相比,在小鼠免疫表达ES85A的侵入型乳酸菌后,小鼠脾细胞中CD11^+CD80^+(P<0. 001)和CD11^+CD83^+(P<0. 01)以及血清中细胞因子IL-4(P<0. 05)的表达都有所增加。结论:表达ES85A的侵入型乳酸菌能促进小鼠体内DCs的分化和成熟以及提高血清中细胞因子IL-4的表达,为后期研制抗结核分枝杆菌的DNA疫苗制剂奠定了基础。

鼠李糖乳杆菌在防御鼠伤寒沙门菌感染中的保护作用

为探讨鼠李糖乳杆菌对鼠伤寒沙门菌感染的防御作用,实验拟利用鼠伤寒沙门菌诱导建立小鼠肠炎模型,采用鼠李糖乳杆菌对肠炎模型进行干预。通过检测小鼠的肠道病理变化、器官指数、沙门菌的组织荷菌数、盲肠组织细胞因子的分泌水平及小鼠体重和存活率,明确鼠李糖乳杆菌对沙门菌感染小鼠的保护作用。结果显示,鼠李糖乳杆菌能显著改善沙门菌造成的肠炎损伤,抑制沙门菌向脾、肝脏等器官的侵袭,促进抑炎因子IL-10的分泌,抑制炎性因子NO、IL-12的分泌从而缓解肠道炎症,并能提高感染沙门菌后小鼠的体重增加率和存活率。实验表明,鼠李糖乳杆菌在防御沙门菌感染及改善肠道损伤方面发挥了较好的保护作用。

表面展示柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白的侵入型乳酸菌的免疫特性研究

为了研究表达pgsA′-EtMIC2融合蛋白的侵入型乳酸菌的免疫特性,将pgsA′-EtMIC2基因片段插入到载体pSIP409-FnBPA中,得到pSIP409-FnBPA-pgsA′-EtMIC2重组质粒,并用电转化的方式转入植物乳杆菌NC8感受态细胞中,构建表面展示EtMIC2蛋白的侵入型乳酸菌。通过检测免疫雏鸡外周血淋巴细胞中CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+T淋巴细胞的发育情况,血清中EtMIC2抗体、IL-4、IL-18、IFN-γ的含量以及肠道灌洗液中IgA的分泌量来评价该侵入型乳酸菌对雏鸡的免疫特性。结果显示,成功构建出携带pSIP409-FnBPA-pgsA′-EtMIC2质粒的重组乳酸菌;雏鸡免疫后外周血淋巴细胞中CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+T淋巴细胞含量明显升高;EtMIC2抗体、IL-18、IFN-γ细胞因子及IgA产生的水平均显著上升,表明该侵入型乳酸菌具有一定的免疫效力,为后期研究抗球虫的免疫保护效果奠定了基础。

表面展示狂犬病病毒糖蛋白的重组乳酸菌的构建及其免疫原性的研究

为开发基于乳酸菌载体表达的新型狂犬病口服疫苗,合成狂犬病病毒糖蛋白主要抗原表位区基因RVG,并通过PCR方法在其C′端融合特异性树突状细胞(DC)靶向肽编码基因后插入到乳酸菌表达载体中,以融合无关肽编码基因为对照,分别构建表达RVG基因的重组乳酸菌pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep和p SIP-409-pgsA′-RVG-ctrl。在清酒乳杆菌素的诱导下,表达产物经Western-blot和免疫荧光鉴定后,对小鼠进行口服免疫,通过流式细胞术检测免疫后小鼠脾中树突状细胞和B细胞活化效率,用ELISA检测肠道内sIgA和血清IgG分泌量。结果显示,该抗原表位区在重组乳酸菌中得到了正确表达,并且可锚定于菌体表面,pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep能有效活化小鼠脾中的树突状细胞和B细胞;与其他组相比差异显著(P<0.05),且肠道内sIgA和血清IgG分泌量显著高于其他组(P<0.05),表明重组乳酸菌pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep能够更好地激活黏膜免疫反应,具有良好的免疫原性。

表达禽流感病毒HA2-DEC205的减毒沙门菌DNA疫苗载体的构建与初步研究

构建表达H9N2亚型禽流感病毒HA2蛋白的延迟裂解型重组减毒沙门菌χ11218(pYA4545-HA2-DEC205-sec)和χ11218(pYA4545-HA2-DEC205-dimer-sec),将其免疫小鼠,通过流式细胞术检测免疫细胞的变化。结果表明,沙门菌χ11218(pYA4545-HA2-DEC205-dimer-sec)能够提高CD3+CD4+T细胞分泌细胞因子IL-4、IFN-γ的水平。这说明重组沙门菌免疫小鼠能够激活机体的免疫系统,诱导发生一定的免疫反应。

细菌基因敲除策略及其在维氏气单胞菌研究中的应用

基因敲除技术是20世纪80年代发展起来的一种分子生物学技术,目前已广泛应用于微生物基因功能等相关领域的研究中。维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,A. veronii)是气单胞菌科气单胞菌属的一种,近年来,该菌引发疾病的报道逐年增多,因此,对其致病机制的研究显得尤为重要。本文对细菌不同基因敲除策略及其在A. veronii基因功能研究中的应用作一综述,旨在为A. veronii致病机制的深入研究提供参考。

调节性B细胞在寄生虫感染中的免疫调节作用

调节性B细胞(Regulatory B cells, Bregs)是存在于B细胞中的一类细胞亚群,该类细胞可以通过分泌细胞因子(IL-10、TGF-β和IL-35等)来抑制免疫反应。研究发现,寄生虫感染能诱导Bregs的产生,由Bregs分泌的IL-10是其发挥作用的关键因子。该类细胞可抑制由寄生虫引起的过度炎症,有助于寄生虫慢性感染的建立、维持宿主和寄生虫逃避免疫反应之间的平衡,降低寄生虫感染对机体造成的病理损伤。