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大豆球蛋白直接ELISA检测方法的建立与初步应用
被引量:
3
1
作者
张诗尧
赵元
+2 位作者
鲍男
娜仁高娃
刘丹丹
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期660-665,共6页
以大豆球蛋白特异性多克隆抗体为一抗,辣根过氧化酶标记抗兔IgG(HPR)为酶标二抗,TMB为底物,建立一种检测大豆球蛋白直接ELISA方法。应用该方法对在吉林省部分地区收集的25个样本进行初步检测,并与竞争ELISA方法进行对比,每个样品进行6...
以大豆球蛋白特异性多克隆抗体为一抗,辣根过氧化酶标记抗兔IgG(HPR)为酶标二抗,TMB为底物,建立一种检测大豆球蛋白直接ELISA方法。应用该方法对在吉林省部分地区收集的25个样本进行初步检测,并与竞争ELISA方法进行对比,每个样品进行6个重复,结果显示,约64%的样本使用直接ELISA法的蛋白检出显著高于竞争ELISA法,且标准差的符合率达到72%以上。本试验建立的直接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,适于食品及饲料行业中过敏蛋白的批量检测。
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关键词
大豆球蛋白
酶联免疫吸收试验
大豆抗原
过敏
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职称材料
日粮中大豆抗原蛋白检测方法的研究进展
被引量:
3
2
作者
张诗尧
赵元
+3 位作者
刘丹丹
鲍男
赵寒冬
张迪
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第3期518-521,共4页
大豆抗原蛋白对动物造成不利的影响和不易灭活的特性,限制了大豆及其制品在动物饲料行业的应用。因而在当前蛋白质资源短缺的形式下,如何快速、简便、准确地检测出大豆中的抗原蛋白成为亟需解决的重要问题。文中综述了几种有关大豆抗原...
大豆抗原蛋白对动物造成不利的影响和不易灭活的特性,限制了大豆及其制品在动物饲料行业的应用。因而在当前蛋白质资源短缺的形式下,如何快速、简便、准确地检测出大豆中的抗原蛋白成为亟需解决的重要问题。文中综述了几种有关大豆抗原蛋白的常用检测方法,并比较其检测效果,为生产中选择适当的测定方法提供理论依据。
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关键词
大豆抗原蛋白
竞争ELISA
双抗夹心ELISA
检测方法
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职称材料
家蝇幼虫双翅肽MdDpt I成熟肽基因的克隆与原核表达
被引量:
1
3
作者
孙小宁
裴志花
+2 位作者
卞路
张丹丹
马红霞
《中国兽药杂志》
北大核心
2015年第1期1-5,共5页
对鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选得到的家蝇双翅肽I(Musca domesticaDiptericin I,MdDptI)基因进行克隆、表达,并对表达产物的抑菌活性进行初步研究。以沙门氏菌诱导家蝇幼虫cDNA为模板,采用cDNA末端快速扩增...
对鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选得到的家蝇双翅肽I(Musca domesticaDiptericin I,MdDptI)基因进行克隆、表达,并对表达产物的抑菌活性进行初步研究。以沙门氏菌诱导家蝇幼虫cDNA为模板,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对MdDptI基因进行扩增,并对扩增产物进行测序和生物信息学分析,进一步去掉信号肽并构建重组表达质粒pET-28a-MdDptI,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。借助亲和纯化获得目的蛋白,并验证目的蛋白的生物活性。MdDptI基因全长为419 bp,包含一个300 bp的完整开放阅读框(ORF),编码99个氨基酸,其cDNA序列与GenBank中登录号为FJ794602.1的家蝇双翅肽基因同源性为95%。构建了家蝇MdDptI基因的成熟肽原核表达质粒pET-28a-MdDpt-I,并获得成功表达,表达产物约为12 ku,与预期结果一致。纯化后的目的蛋白表现出一定的抑菌活性。本试验获得了MdDptI基因的全长序列,构建了原核表达载体,并成功获得表达纯化。
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关键词
家蝇
家蝇双翅肽
克隆
序列分析
原核表达
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职称材料
蛇床子素对大鼠离体胸主动脉的舒张作用
4
作者
张迪
张凯琦
+3 位作者
刘树明
龚倩
曲桂娟
裴志花
《四川中医》
2016年第7期51-54,共4页
目的:研究蛇床子素对大鼠胸主动脉的舒张作用并探讨其机制。方法:采用大鼠胸主动脉环张力测定法,观察蛇床子素对苯肾上腺素(PE)和氯化钾(KCl)预收缩的大鼠离体胸主动脉的舒张作用。结果:蛇床子素在不改变血管基础张力的情况下能明显抑制...
目的:研究蛇床子素对大鼠胸主动脉的舒张作用并探讨其机制。方法:采用大鼠胸主动脉环张力测定法,观察蛇床子素对苯肾上腺素(PE)和氯化钾(KCl)预收缩的大鼠离体胸主动脉的舒张作用。结果:蛇床子素在不改变血管基础张力的情况下能明显抑制由PE或KCl诱导的大鼠胸主动脉环收缩,其血管舒张作用为非血管内皮依赖性。在无Ca2+溶液中,蛇床子素不能抑制咖啡因或PE诱导的细胞内钙的释放,但添加Ca2+后,蛇床子素能够抑制KCl诱导的细胞外钙内流。结论:蛇床子素的血管舒张作用是非血管内皮依赖性的,其机制可能是通过阻断血管平滑肌细胞上的钙离子通道,抑制细胞外Ca2+内流而起作用的。
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关键词
蛇床子素
大鼠
胸主动脉
钙内流
钙通道抑制剂
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职称材料
家蝇溶菌酶1基因的克隆、序列分析及原核表达
被引量:
3
5
作者
王梅梅
万玲
+3 位作者
孔令聪
裴志花
刘树明
马红霞
《中国兽药杂志》
2014年第3期10-14,共5页
采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减文库(SSH)中筛选得到家蝇溶菌酶1基因((Musca domestica lysozyme-1,MdL-1)进行扩增,测序分析得到一个全长为537 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)432 bp,与Gen...
采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减文库(SSH)中筛选得到家蝇溶菌酶1基因((Musca domestica lysozyme-1,MdL-1)进行扩增,测序分析得到一个全长为537 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)432 bp,与Genbank中登录号为AY344589.1基因同源性为96%。构建重组表达质粒pET-32a-MdL-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,表达产物大小约为34 kD,与预期蛋白大小一致。结果表明,利用RACE技术克隆得到MdL-1全长基因并在大肠杆菌中获得了表达,为进一步研究该蛋白的生物学及免疫学活性奠定了基础。
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关键词
家蝇
家蝇溶菌酶1
克隆
序列分析
原核表达
下载PDF
职称材料
家蝇幼虫溶菌酶Ⅱ基因的克隆、表达及抑菌活性研究
6
作者
邵清
唐艳
+3 位作者
万玲
孔令聪
裴志花
马红霞
《中国兽药杂志》
北大核心
2015年第2期1-6,共6页
以本实验室构建的鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减杂交文库(SSH)为基础,对家蝇幼虫溶菌酶II基因(MdL-II)进行克隆,得到全长为532 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)与GenBank中登录号为HQ897688.1的MdL-II基因全序列同源性为95%。...
以本实验室构建的鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减杂交文库(SSH)为基础,对家蝇幼虫溶菌酶II基因(MdL-II)进行克隆,得到全长为532 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)与GenBank中登录号为HQ897688.1的MdL-II基因全序列同源性为95%。将MdL-II ORF序列插入到pET-32a(+)表达载体中成功构建重组质粒,其表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,结果显示约在34 ku处出现表达条带且与目的蛋白大小相符。当诱导温度为37℃,IPTG浓度为0.6 mmol/L时可获得大量可溶性Trx-MdL-II融合蛋白,纯化融合蛋白并进一步检测该蛋白的抑菌活性,结果表明融合蛋白对大肠杆菌和链球菌均有抑菌作用,且对大肠杆菌的抑菌作用相对较强。
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关键词
家蝇幼虫
家蝇溶菌酶Ⅱ基因
克隆表达
蛋白纯化
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职称材料
题名
大豆球蛋白直接ELISA检测方法的建立与初步应用
被引量:
3
1
作者
张诗尧
赵元
鲍男
娜仁高娃
刘丹丹
机构
吉林农业大学动物科学科技学院
/
动物
生产及产品质量安全教育部重点实验室/
吉林
省
动物
营养与饲料
科学
重点实验室
出处
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期660-665,共6页
基金
国家自然科学基金青年基金(31572439)
吉林省自然科学基金(20160101348JC)
+1 种基金
国家"十二五"科技支撑计划(2013BAD17B0)
教育厅"十二五"科学技术研究资助项目(2015198)
文摘
以大豆球蛋白特异性多克隆抗体为一抗,辣根过氧化酶标记抗兔IgG(HPR)为酶标二抗,TMB为底物,建立一种检测大豆球蛋白直接ELISA方法。应用该方法对在吉林省部分地区收集的25个样本进行初步检测,并与竞争ELISA方法进行对比,每个样品进行6个重复,结果显示,约64%的样本使用直接ELISA法的蛋白检出显著高于竞争ELISA法,且标准差的符合率达到72%以上。本试验建立的直接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,适于食品及饲料行业中过敏蛋白的批量检测。
关键词
大豆球蛋白
酶联免疫吸收试验
大豆抗原
过敏
Keywords
Glycinin
ELISA
Soybean antigen
Allergy
分类号
S816.17 [农业科学—饲料科学]
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职称材料
题名
日粮中大豆抗原蛋白检测方法的研究进展
被引量:
3
2
作者
张诗尧
赵元
刘丹丹
鲍男
赵寒冬
张迪
机构
吉林农业大学动物科学科技学院
/
动物
生产及产品质量安全教育部重点实验室/
吉林
省
动物
营养与饲料
科学
重点实验室
长春
农业
博览园
出处
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第3期518-521,共4页
基金
国家自然科学基金青年基金(31101719)
吉林省科技发展计划项目青年科研基金(201201098)
+1 种基金
国家"十二五"科技支撑计划(2013BAD17B0)
吉林省教育厅"十二五"科学技术研究规划项目(2015198)
文摘
大豆抗原蛋白对动物造成不利的影响和不易灭活的特性,限制了大豆及其制品在动物饲料行业的应用。因而在当前蛋白质资源短缺的形式下,如何快速、简便、准确地检测出大豆中的抗原蛋白成为亟需解决的重要问题。文中综述了几种有关大豆抗原蛋白的常用检测方法,并比较其检测效果,为生产中选择适当的测定方法提供理论依据。
关键词
大豆抗原蛋白
竞争ELISA
双抗夹心ELISA
检测方法
Keywords
Soybean antigen protein
competitive ELISA
Double-antibody sandwich ELISA
Detection
分类号
S565.1 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
家蝇幼虫双翅肽MdDpt I成熟肽基因的克隆与原核表达
被引量:
1
3
作者
孙小宁
裴志花
卞路
张丹丹
马红霞
机构
吉林农业大学动物科学科技学院
辽宁省
农业
经济学校
吉林
农业
大学
动物
生产及产品质量安全教育部重点实验室
出处
《中国兽药杂志》
北大核心
2015年第1期1-5,共5页
基金
教育部新世纪优秀人才项目(NCET-10-0174)
吉林省世行贷款农产品质量安全项目(2011-Y05)
吉林省科技厅项目(20111820)
文摘
对鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选得到的家蝇双翅肽I(Musca domesticaDiptericin I,MdDptI)基因进行克隆、表达,并对表达产物的抑菌活性进行初步研究。以沙门氏菌诱导家蝇幼虫cDNA为模板,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对MdDptI基因进行扩增,并对扩增产物进行测序和生物信息学分析,进一步去掉信号肽并构建重组表达质粒pET-28a-MdDptI,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。借助亲和纯化获得目的蛋白,并验证目的蛋白的生物活性。MdDptI基因全长为419 bp,包含一个300 bp的完整开放阅读框(ORF),编码99个氨基酸,其cDNA序列与GenBank中登录号为FJ794602.1的家蝇双翅肽基因同源性为95%。构建了家蝇MdDptI基因的成熟肽原核表达质粒pET-28a-MdDpt-I,并获得成功表达,表达产物约为12 ku,与预期结果一致。纯化后的目的蛋白表现出一定的抑菌活性。本试验获得了MdDptI基因的全长序列,构建了原核表达载体,并成功获得表达纯化。
关键词
家蝇
家蝇双翅肽
克隆
序列分析
原核表达
Keywords
Musca domestica
Musca domestica diptericin
clone
sequence analysis
prokaryotic expression
分类号
S852.743 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
蛇床子素对大鼠离体胸主动脉的舒张作用
4
作者
张迪
张凯琦
刘树明
龚倩
曲桂娟
裴志花
机构
吉林农业大学动物科学科技学院
出处
《四川中医》
2016年第7期51-54,共4页
基金
国家自然科学基金项目(No.31402205)
文摘
目的:研究蛇床子素对大鼠胸主动脉的舒张作用并探讨其机制。方法:采用大鼠胸主动脉环张力测定法,观察蛇床子素对苯肾上腺素(PE)和氯化钾(KCl)预收缩的大鼠离体胸主动脉的舒张作用。结果:蛇床子素在不改变血管基础张力的情况下能明显抑制由PE或KCl诱导的大鼠胸主动脉环收缩,其血管舒张作用为非血管内皮依赖性。在无Ca2+溶液中,蛇床子素不能抑制咖啡因或PE诱导的细胞内钙的释放,但添加Ca2+后,蛇床子素能够抑制KCl诱导的细胞外钙内流。结论:蛇床子素的血管舒张作用是非血管内皮依赖性的,其机制可能是通过阻断血管平滑肌细胞上的钙离子通道,抑制细胞外Ca2+内流而起作用的。
关键词
蛇床子素
大鼠
胸主动脉
钙内流
钙通道抑制剂
Keywords
Osthole
Rat
Thoracic aorta
Ca2+ influx
Ca2+ channel inhibitor
分类号
R285.5 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
家蝇溶菌酶1基因的克隆、序列分析及原核表达
被引量:
3
5
作者
王梅梅
万玲
孔令聪
裴志花
刘树明
马红霞
机构
吉林
农业
大学
生命
科学
学院
吉林农业大学动物科学科技学院
动物
生产与产品质量安全教育部重点实验室(
吉林
农业
大学
)
出处
《中国兽药杂志》
2014年第3期10-14,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(31140026)
教育部新世纪优秀人才项目(NCET-10-0174)
文摘
采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减文库(SSH)中筛选得到家蝇溶菌酶1基因((Musca domestica lysozyme-1,MdL-1)进行扩增,测序分析得到一个全长为537 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)432 bp,与Genbank中登录号为AY344589.1基因同源性为96%。构建重组表达质粒pET-32a-MdL-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,表达产物大小约为34 kD,与预期蛋白大小一致。结果表明,利用RACE技术克隆得到MdL-1全长基因并在大肠杆菌中获得了表达,为进一步研究该蛋白的生物学及免疫学活性奠定了基础。
关键词
家蝇
家蝇溶菌酶1
克隆
序列分析
原核表达
Keywords
Musca do mestica
Md-lysozyme 1
clone
sequence analysis
prokaryotic expression
分类号
S852.743 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
家蝇幼虫溶菌酶Ⅱ基因的克隆、表达及抑菌活性研究
6
作者
邵清
唐艳
万玲
孔令聪
裴志花
马红霞
机构
吉林农业大学动物科学科技学院
动物
生产与产品质量安全教育部重点实验室
出处
《中国兽药杂志》
北大核心
2015年第2期1-6,共6页
基金
教育部新世纪优秀人才项目(NCET-10-0174)
吉林省世行贷款农产品质量安全项目(2011-Y05)
吉林省科技厅项目(20111820)
文摘
以本实验室构建的鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减杂交文库(SSH)为基础,对家蝇幼虫溶菌酶II基因(MdL-II)进行克隆,得到全长为532 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)与GenBank中登录号为HQ897688.1的MdL-II基因全序列同源性为95%。将MdL-II ORF序列插入到pET-32a(+)表达载体中成功构建重组质粒,其表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,结果显示约在34 ku处出现表达条带且与目的蛋白大小相符。当诱导温度为37℃,IPTG浓度为0.6 mmol/L时可获得大量可溶性Trx-MdL-II融合蛋白,纯化融合蛋白并进一步检测该蛋白的抑菌活性,结果表明融合蛋白对大肠杆菌和链球菌均有抑菌作用,且对大肠杆菌的抑菌作用相对较强。
关键词
家蝇幼虫
家蝇溶菌酶Ⅱ基因
克隆表达
蛋白纯化
Keywords
Musca domestica larvae
Md-lysozyme Ⅱ
cloning and expression
protein purification
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大豆球蛋白直接ELISA检测方法的建立与初步应用
张诗尧
赵元
鲍男
娜仁高娃
刘丹丹
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2016
3
下载PDF
职称材料
2
日粮中大豆抗原蛋白检测方法的研究进展
张诗尧
赵元
刘丹丹
鲍男
赵寒冬
张迪
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
下载PDF
职称材料
3
家蝇幼虫双翅肽MdDpt I成熟肽基因的克隆与原核表达
孙小宁
裴志花
卞路
张丹丹
马红霞
《中国兽药杂志》
北大核心
2015
1
下载PDF
职称材料
4
蛇床子素对大鼠离体胸主动脉的舒张作用
张迪
张凯琦
刘树明
龚倩
曲桂娟
裴志花
《四川中医》
2016
0
下载PDF
职称材料
5
家蝇溶菌酶1基因的克隆、序列分析及原核表达
王梅梅
万玲
孔令聪
裴志花
刘树明
马红霞
《中国兽药杂志》
2014
3
下载PDF
职称材料
6
家蝇幼虫溶菌酶Ⅱ基因的克隆、表达及抑菌活性研究
邵清
唐艳
万玲
孔令聪
裴志花
马红霞
《中国兽药杂志》
北大核心
2015
0
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职称材料
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