2014～2015年吉林省出入境8类食品中微生物污染状况分析

[目的]了解吉林省出入境食品中微生物的污染状况及其趋势,为采取有效措施降低进出口食品微生物污染的风险提供基础资料。[方法]依据《食品卫生微生物学检验》GB/T4789—2003/2010,对2014~2015年2年间吉林省出入境送检和抽检的8类食品进行微生物检测,对采集样品进行4项微生物检测,指标包括：细菌总数、大肠菌群、致病菌、霉菌和酵母菌检测。[结果]试验共检测8类食品共计1 668份样品,检出微生物98株,总检出率5.88%。[结论]吉林省出入境8类食品中微生物污染整体状况较好,2015年的污染状况较2014年有所好转,抽检能更好地发现食品中存在的卫生问题,今后应重点加强对肉制品和乳制品的监督管理。

吉林省鹿结核病的流行病学调查

为掌握结核病在吉林省鹿群中的流行传播状况,从吉林省养鹿业富有代表性地区的18个鹿场随机采集血清样本1856份作为研究对象,利用结核杆菌Ag85-East6-mpt70抗原多联表达蛋白作为检测抗原,进行酶联免疫检测,调查吉林省鹿结核病流行情况,结果发现,吉林省地区鹿群中存在结核病病例,且各地区间阳性率差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01),防疫部门应加强防控,防止疫病扩散。

检测蜜蜂囊状幼虫病毒环介导等温扩增技术的建立

为建立一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病毒（SBV）的环介导等温扩增方法（LAMP）,本研究根据SBV-UK株多聚蛋白基因序列（AF092924.1）设计了4条特异性引物,通过LAMP real-time Turbidimeter仪对SBV的反应体系和反应条件进行检测和实时监控,并评价其特异性、敏感性、重复性和稳定性。结果显示,在63℃恒温扩增40 min后,仅SBV核酸扩增,而其他病毒均呈阴性。反应结束后在反应体系中加入SYBR Green I的可视化判定结果与real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有较强的特异性和较高的敏感性,其最低检出量为3.2×10~1拷贝/μL,是普通PCR的100倍;对同一批次和不同批次提取的SBV核酸进行扩增,结果表明重复性和稳定性良好;临床样品检测结果表明LAMP法与常规PCR法检测结果一致。本研究建立的LAMP方法操作简便,适用于SBV的快速检测。

微生物检测技术在食品安全中的应用分析

我国目前的食品市场存在着严重的安全隐患,使人们越来越担忧食品安全。微生物检测技术采用分子生物学、免疫学等相关技术有效排查食品存在的各类安全隐患,可有效地缓解我国食品安全隐患的影响。基于此,本文主要探讨与分析微生物检测技术在食品安全中的应用。微生物检测技术在食品安全检测中的重要性近年来,我国食品安全问题频发,使人民在食品安全问题上出现了恐慌,再加上现代社会快速的信息传播力,许多食品安全问题引发的事故在网络或新闻中时常报道。

拉曼光谱及其检测时样品前处理的研究进展

拉曼光谱具有操作简单,所需样本量小,检测灵敏度高等特点,可进行现场快速筛查、检测及鉴别。样品前处理直接影响分析结果的准确度和精密度,而且操作繁琐费时。发展快速、高效的样品前处理技术进而结合拉曼光谱检测技术具有重要的研究意义,特别是与增强拉曼光谱相结合进行食品、农产品中等残留物的衡量检测已成为研究热点。本文阐述了拉曼光谱产生的原理,介绍了拉曼光谱的起源和发展,讨论了表面增强拉曼光谱技术、针尖增强拉曼光谱技术和壳层隔绝纳米粒子增强拉曼光谱技术,并对拉曼检测之前的样品预处理进行了讨论。

大肠杆菌O157:H7异硫氰酸荧光素标记抗体的制备及评价

目的:制备高效价、高纯度、特异性好、荧光强度高及稳定的抗大肠杆菌O157∶H7异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体,初步探讨其在大肠杆菌荧光免疫检测试验中的应用。方法:复苏培养E.coli O157∶H7标准菌株,甲醛灭活制备疫苗免疫家兔。4次免疫后,颈动脉采血分离血清,经辛酸-饱和硫酸铵法粗提后应用蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行IgG纯化,借助SDS-PAGE电泳、BCA试剂盒法、间接ELISA法分别对蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价进行测定。应用不同FITC与蛋白量比值以及不同标记反应条件对多克隆抗体进行标记。比较荧光抗体F485/535,结合差异性显著分析对FITC与蛋白量比值及反应条件进行合理选择,应用标记抗体与E.coli O157∶H7和金黄色葡萄球菌混合菌液反应验证标记效果。结果:HiTrap Protein G进行E.coli O157∶H7多克隆抗体纯化的最佳纯化方法为35%、100%二梯度洗脱,制备抗体效价为1∶25 600,与沙门氏菌、阴沟肠杆菌等8种肠杆菌无交叉反应,最佳FITC与蛋白量比值为1∶10,最佳标记反应条件为20℃、2h。由最佳条件制得的荧光抗体与E.coli O157∶H7反应明显,强荧光连续照射15min后仍显示高亮度荧光反应,且不与金黄色葡萄球菌反应。结论:本实验首次制备出纯度高、荧光强度高、持续时间长的E.coliO157:H7FITC标记多克隆抗体,为E.coli O157:H7荧光免疫检测方法的建立完成了关键步骤。

应用TaqMan荧光定量PCR检测牛分枝杆菌

为建立快速检测牛分枝杆菌(M.bovis)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究以GenBank登录的M.bovis特有229 bp基因为研究对象,设计并合成引物及探针。该方法具有较好的特异性,与标准质控菌株呈阳性反应,与其他微生物样品呈阴性反应;灵敏性最低检测值可达1 pg/mL;对20阳性临床样品进行荧光定量PCR检测,均为阳性;而对培养为阴性的20份临床样品进行检测,6份为阳性。该研究结果表明,建立的方法特异性强,敏感性高,稳定性好,能够用于M.bovis的鉴别检测,对牛分枝杆菌病的快速检测和早期诊断具有重要意义。

H_5N_1亚型禽流感病毒核蛋白基因的克隆及分子进化分析

用RT-PCR法,以1株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NP全基因cDNA。将NPcDNA克隆于pMD18 T载体,并对其进行测序。测序结果表明:所克隆的NP基因全长1542bp,该核苷酸的片段包含了核蛋白完整阅读框架,其中编码区为1497个核苷酸,编码498个氨基酸。将其序列与6株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株之间NP基因核苷酸序列同源性为92 5%～95 9%,编码的氨基酸同源性为97 0%～98 4%。通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系。

H_5N_1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆及序列分析

应用RT—PCR方法,以1株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NA全基因cDNA。将NA cD-NA克隆于pMD18-T载体,并对其进行了测序。测序结果表明:所克隆的NA基因全长为1416 bp,编码区为1410个核苷酸,编码469个氨基酸。将其序列与5株H5N1亚型禽流感病毒NA基因序列进行比较,其核苷酸和氨基酸同源性均为96.6％～99.1％。NA的克隆和分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系。

活的非可培养状态沙门菌RT-PCR检测

依据沙门菌Salmonella活的非可培养状态(VBNC)差异基因序列设计特异性引物C1和C5,并对处于VBNC的沙门菌模型开展RT-PCR检测.结果表明,引物C1和C5可从模型中分别扩增出198和137 bp的目的片段,这些片段与差异基因的核苷酸序列相似性均大于99%.而且所获得的电泳图谱也不同于正常状态的沙门菌、霍乱弧菌Vibrio cholerae等一些食源性致病菌.另外,2对引物的最低cDNA检出量分别为30.65和3.065 pg/μL.由此证明,引物C1和C5具有较好的特异性和敏感性,可用于建立VBNC沙门菌的检测方法.

鸡白痢沙门氏菌CVCC578标准株VBNC研究模型的建立及鉴定

为建立活的非可培养状态(VBNC)研究模型,本研究利用液体LB和4℃联合条件对鸡白痢沙门氏菌CVCC578参考株的进行VBNC诱导,构建VBNC研究模型。同时依靠胎牛血清和程序性升温对处于该状态的菌体进行复苏,并对复苏前后的细菌进行了16SrRNA验证。结果表明:实验菌株经液体LB和4℃联合诱导后,可培养菌数在55d后降至零,总菌数在整个观察期内基本不变,而活菌数在150d后开始下降,180d后下降显著,表明实验菌株可在55d进入VBNC,而且维持时间至180d。当进入该状态后,菌体形态可由杆状变为球杆或球形,并且菌体排列可由单在变为聚集。经复苏和16SrRNA鉴定后,"变态"的细菌被证实为沙门氏菌,而非杂污染菌。该实验为规范VBNC沙门氏菌的鉴定程序以及制订相应的国家检测标准提供了实验依据。

活的非可培养状态细菌生物学特性研究进展

活的非可培养状态(VBNC)细菌是一类利用现行培养技术无法分离得到的微生物群,对传统微生物学产生了重要影响。特别是一些处于VBNC状态下的病原菌,一直是最令人担忧且不可忽视的研究对象。论文从种类、形态、排列、组成、致病性、抗原性、黏附性,以及复苏等方面综述了VBNC细菌的生物学特性,旨在更加深入了解和认识VBNC细菌,从而对VBNC病原菌的防控起到积极作用。

沙门菌Ⅲ型分泌系统组成与装配研究进展

沙门菌(Salmonella)是引发人和动物食物中毒、胃肠炎的主要食源性病原菌,该菌III型分泌系统(T3SS)对其入侵宿主细胞发挥着重要作用,近年来,有关沙门菌T3SS的组成、装配以及相关致病机理的研究取得了一定进展。本文对沙门菌T3SS的组成与装配等研究作一综述,为深入研究沙门菌的致病机制以及预防、治疗该菌引发的疾病提供新的策略和手段。

黑蜂王台病毒研究进展

黑蜂王台病毒(black queen cell virus,BQCV)是一种常见的蜜蜂病毒,春季和初夏高发,主要危害蜂王的幼虫和蛹,蜜蜂患病后短时间内死亡,王台壁进而变黑。黑蜂王台病毒已在世界不同蜂种间广泛传播,常以无明显症状的隐性感染方式存在于蜂群中,与蜜蜂微孢子虫联合危害表现出极强的致病性,对养蜂业造成巨大损失。作者从黑蜂王台病的病原学、流行病学、临床症状、致病过程、检测方法及防控方面对其研究进展进行综述,为进一步研究黑蜂王台病毒及其防制措施提供参考。

沙门氏菌现场快速检测方法的建立

为了适应基层检验检疫部门对沙门氏菌的现场快速筛查,保障食品安全,试验利用沙门氏菌inv A基因建立了可以快速检测食品中沙门氏菌污染的恒温环介导扩增（LAMP）方法,并通过添加钙黄绿素实现现场快速判定食品是否受到沙门氏菌的污染。结果表明:建立的方法具有良好的特异性和灵敏性,灵敏度可达8.37×10-3ng/μL。说明建立的方法可用于沙门氏菌的现场检测。

猪繁殖与呼吸综合征病毒ZB株的分离与鉴定

为了确定从高度疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的猪内脏中分离得到的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的类型,试验进行了形态学观察、血清学分析、免疫学分析、RT-PCR扩增等一系列鉴定分析。结果表明:从疑似病料中分离获得的病毒可以使Marc-145细胞产生明显病变,而在Vero和PK-15细胞上不出现细胞病变,从而确定试验获得的病毒为PRRSV,命名为ZB株。

鸡白痢沙门氏菌活的非可培养状态相关基因ybbB和rh1B的鉴定

为鉴定细菌活的非可培养状态(VBNC)下的转录基因,本研究采用液体LB培养基在4℃条件下诱导鸡白痢沙门氏菌(S.pullorum)CVCC578株进入VBNC状态,并利用mRNA差异显示RT-PCR技术(DDRT-PCR)分析S.pullorum VBNC状态与正常状态所表达的差异基因。结果表明,在S.pullorum的VBNC状态下克隆得到两个转录基因片段,分别为422 bp和573 bp。序列分析表明:422 bp的cDNA片段与不同沙门氏菌株的tRNA硒尿核苷合成酶(tRNA 2-selenouridine synthase)的ybbB基因的核苷酸和氨基酸同源性均为99%;573 bp的cDNA片段则与不同菌株S.pullorum的ATP依赖性的RNA解旋酶基因(rh1B)的核苷酸同源性为95%～100%,氨基酸同源性为98%以上。在VBNC状态下这两个转录基因的发现,将为S.pullorum的VBNC机理研究奠定基础。

结核病与BCG疫苗接种个体TaqMan探针荧光定量PCR诊断方法的建立及初步应用

为快速鉴别诊断结核病(TB),本研究以GenBank登录的致病性结核分枝杆菌复合群、人型结核杆菌和牛分枝杆菌特有基因为对象,设计并合成引物及探针,建立TaqMan探针荧光定量PCR检测方法。实验结果表明,该方法对标准质控菌株反应呈阳性,对卡介苗(BCG)及其他微生物样品反应呈阴性;对结核分枝杆菌或牛分枝杆菌标准菌株的检测灵敏度可达单个菌细胞水平。对45份结核菌素PPD皮肤试验结果为阳性的临床样本进行TaqMan探针荧光定量PCR检测,36份为阳性;而对PPD检测为阴性的50份临床样本进行检测时,7份为阳性。本研究结果表明,所建立的方法可用于TB的鉴别诊断,可对由BCG接种或环境中分枝杆菌引起的PPD检测假阳性样本进行鉴别,对TB的快速检测和早期诊断具有重要意义。

血管细胞粘附分子-1等炎性因子与糖尿病足相关性研究

糖尿病足（DF）作为糖尿病严重并发症,多表现为下肢远端周围血管病变及神经损伤所致感染、坏疽、溃疡等,疾病早期表现为瘙痒,与皮肤疾病难以鉴别与准确治疗,发病后期患者表现为足部恶臭,行动障碍,面临截肢风险。研究发现血清指标及血管自身病变是影响糖尿病的主要病理因素,严格控制血清炎症刺激因子水平,显著改善疾病发展及预后^（[1]）。

高效液相色谱法测定腌渍食用菌中的乙二胺四乙酸二钠

建立了腌渍食用菌中乙二胺四乙酸二钠(EDTA–2Na)的高效液相色谱测定方法。试样中的EDTA–2Na经去离子水提取、三氯甲烷净化、三氯化铁衍生化后,以C18色谱柱进行分离,以甲醇–水(体积比为2∶8)为流动相,外标法定量。EDTA–2Na浓度在2.0~50.0μg/m L范围内时,线性关系良好,线性相关系数为0.999 9。在5.0~500.0 mg/kg添加范围内,样品平均加标回收率为87.9%~105.2%,检出限为5.0 mg/kg。该方法简便快捷、灵敏度和重现性好,可用于腌渍食用菌中EDTA–2Na的测定。