多西他赛诱导肺腺癌A549/DTX细胞株的建立及耐药机制分析

目的建立人肺腺癌细胞A549多西他赛(DTX)耐药细胞株,并对其耐药机制进行初步分析。方法采用逐步增加多西他赛浓度、间歇诱导的方法,建立人肺癌A549/DTX体外耐药细胞模型;MTT法检测A549/DTX的耐药特性;流式细胞仪比较多西他赛对耐药细胞株A549/DTX及亲本细胞株A549凋亡的影响;Western blot分析多西他赛作用后两种细胞凋亡调节因子Bc1-2、Bax表达差异。结果 MTT显示A549/DTX的多西他赛耐药指数为18.5;流式细胞分析显示经12.5、25、50μg/L多西他赛作用24 h后,A549/DTX的细胞凋亡率为(6.2±4.1)%、(13.6±2.7)%、(20.5±5.1)%,A549细胞凋亡率为(15.7±3.5)%、(28.5±2.9)%和(33.1±4.8)%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01);Western blot显示,与A549相比,A549/DTX细胞Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax蛋白明显降低(P<0.01)。结论逐步增加浓度、间歇诱导的方法建立了稳定、耐药性较高的A549/DTX细胞株,并认为凋亡受抑是A549/DTX的耐药机制之一,与Bcl-2表达上调、Bax表达下调相关。

增强型绿色荧光蛋白融合对Ano1钙激活Cl-通道生理特性的影响

本研究旨在探讨融合在Ano1钙激活Cl^-通道(anoctamin1)C末端的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)对Ano1生理特性的影响。分别构建融合和未融合EGFP的Ano1真核表达载体,通过脂质体介导分别将这两类真核表达载体转染至Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞,倒置荧光显微镜下观察融合和未融合EGFP的Ano1在FRT细胞中的表达与定位;荧光淬灭动力学检测Ano1转运I^-的能力。结果显示,融合和未融合EGFP的Ano1均表达于FRT细胞膜上,且均能被Ca^(2+)激活,融合和未融合EGFP的Ano1转运I^-的能力无明显差异。以上结果提示,Ano1和EGFP-Ano1具有相似的生理特性。