浅谈医学科研实验平台建设运行与可持续发展

随着医学科学研究事业的发展,对于医学科研实验平台建设的要求越来越迫切,很多医疗机构或医学院校都急需建立公共科研实验平台以满足临床科研与教学科研的需要,公共医学科研实验平台建立建设能够最大限度满足实际需要的同时对可利用资源进行最大限度的整合,针对实验平台的前期准备、场地选择、仪器购置、人员配置到实验室的运行与发展等实际过程,从硬件建设、人员素质建设和实验室运行与发展三方面来探索公共医学科研试验平台建设运行与可持续发展的科学模式。

基础医学教育与医学生科研素质培养

基础医学教育是医学生长远发展的基石,提高医学生的科研素质是医学教育的一项重要任务。目前的医学教育中忽略了医学生科研素质的培养,本文就抓好医学生科研素质培养的关键环节进行归纳总结,与从事基础医学教育的同行们交流探讨。

儒家传统教育思想在培养医学本科生科研能力中的应用

儒家传统教育理念深刻影响着现代医学本科生科研能力培养的教育方式,不仅体现在对教师教学水平的高标准严要求,还对医学本科生对科研的正确认识产生深远影响。将儒家传统教学理念渗入医学本科生科研教育理论和实践课程当中,不仅能够使本科生保持对医疗行业发展的责任感和科研的延续性,还能对大学生的人格完善发挥巨大作用。

人参皂苷Rg3在非小细胞肺癌放疗中增敏作用的实验研究

目的观察人参皂苷Rg3联合放疗对非小细胞肺癌生长的抑制作用。方法建立Lewis肺癌C57BL／6小鼠动物模型，随机分为对照组、Rg3组、放疗组及联合组（放疗联合Rg3组）。观察四组肿瘤退缩曲线、瘤重及原位细胞凋亡率。结果小鼠接种Lewis细胞11天全部生长出直径8mm左右的瘤体，Rg3组灌药第5天开始瘤体积呈缓慢生长趋势，但与对照组相比差异不明显（P〉0．05）；放疗联合Rg3组与对照组比较，瘤体生长缓慢明显，差异具有统计学意义（P〈0．05）；分析瘤重，放疗联合Rg3组及放疗组与对照组比较均有显著性差异（P〈0．05）；同时放疗联合Rg3组使细胞凋亡明显增多，与其他三组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论人参皂苷Rg3抑制非小细胞肺癌的生长，诱导肿瘤细胞凋亡，同时增加放疗的敏感性。

化疗药物建立小鼠无精子症模型的实验研究

目的制作小鼠无精子症模型,观察其对支持细胞的影响,为进一步的精原干细胞移植提供受体。方法将4~5周龄ICR小鼠分为4组:环磷酰胺组注射环磷酰胺(200 mg/kg)、白消安组注射白消安(40 mg/kg)、复合组注射环磷酰胺(120 mg/kg)和白消安(20 mg/kg)以及对照组注射0.9%生理盐水。注射后第35天、45天和60天取双侧附睾制作精子悬液,涂片后固定计数,制作并观察睾丸组织学切片(HE)。结果与对照组比较,各给药精子数量显著减少(P<0.05);HE染色:各给药组生精小管内细胞排列疏松,细胞层数减少,各生精小管间隙扩大,间质细胞减少,其中白消安组与复合组于给药后第35天、45天睾丸生精小管内精子及精子细胞消失,第60天时部分生精小管内可偶见精子细胞及精子。结论利用化疗药物采用腹腔内单次注射可以建立小鼠无精子症模型,且操作简捷、周期短、费用低、效果好,可以做精原干细胞移植受体。

过氧化氢通过内质网应激信号通路对Hela细胞自噬和凋亡的诱导作用

目的:利用过氧化氢(H2O2)构建人宫颈癌Hela细胞体外氧化应激模型,观察其对Hela细胞自噬和凋亡的影响,并探讨H2O2与内质网应激(ERS)信号通路之间的关系。方法:以1mmol·L-1 H2O2构建体外氧化应激模型;实验分为对照组、H2O24h组、H2O28h组和H2O212h组,各组细胞分别以H2O2作用0、4、8及12h后,利用Western blotting法检测各组Hela细胞中ERS及凋亡、自噬相关蛋白表达。结果:与对照组比较,各H2O2组Hela细胞中Cleaved Caspase-3表达水平升高(P<0.05),Cleaved Caspase-4表达水平亦明显升高(P<0.05);各H2O2组Hela细胞中LC3-Ⅱ表达水平高于对照组(P<0.05),GRP78表达水平亦高于对照组(P<0.05);随着H2O2作用时间的延长,各H2O2组Hela细胞中IRE1a表达水平明显升高(P<0.01),p-JNK表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:在H2O2所构建的体外氧化应激模型中H2O2能够诱导Hela细胞发生自噬和凋亡,且该诱导作用由ERS信号通路介导。

大蒜素对D-半乳糖致衰老模型大鼠学习记忆能力及脑组织氧化应激相关蛋白的影响

目的观察大蒜素对D-半乳糖致衰老大鼠脑部衰老的影响,并从氧化应激通路入手探讨其中可能的机制。方法取50只雄性SD大鼠作为研究对象,随机分为5组(n=10):正常组(C组)、D-半乳糖组(D组)和大蒜素组,其中大蒜素组按剂量分为低剂量组(L组)、中剂量组(M组)和高剂量组(H组)。D、L、M、H组按大鼠体重以125mg/kg的剂量皮下注射D-半乳糖生理盐水溶液,C组皮下注射同体积生理盐水对照,每日8:00注射1次。同时,L、M和H组分别腹腔注射10、20和40mg/kg大蒜素注射液,C组和D组以同体积生理盐水作对照处理,每日20:00注射1次,所有大鼠均持续注射6周。通过行为学实验,观察各组大鼠学习记忆能力。处死后取各组大鼠脑组织:检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化力(T-AOC);另取部分脑组织:固定包埋后石蜡切片,采用免疫组织化学法观察海马区凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果行为学实验结果显示,与C组比较,D组大鼠学习记忆能力明显下降,而大蒜素干预的各组大鼠记忆能力有所增强。与C组比较,D组大鼠脑组织匀浆中MDA含量升高(P<0.05),SOD活性下降(P<0.05),T-AOC下降(P<0.05),大蒜素干预的各组大鼠较D组MDA含量下降(P<0.05),SOD活性增强(P<0.05),T-AOC上升(P<0.05),且呈现一定的剂量效应关系。免疫组化结果显示,与C组比较,D组Bax表达明显增加(P<0.05),Bcl-2表达明显减弱(P<0.05),大蒜素干预的L、M、H组大鼠Bax表达较D组呈减弱趋势,Bcl-2表达较D组呈增强趋势,但结果并无统计学意义。结论大蒜素可改善D-半乳糖致衰老大鼠的学习记忆能力,提高脑组织匀浆中SOD活性,降低MDA含量,增强脑组织总抗氧化力,并减轻衰老大鼠脑海马区细胞凋亡。

缺糖缺氧对经内质网应激途径诱导Hela细胞凋亡的影响

目的:体外构建肿瘤细胞缺糖缺氧(OGD)模型,观察缺糖缺氧应激条件对肿瘤细胞凋亡的影响及其机制。方法:利用平衡盐溶液EBSS取代细胞正常培养液构建缺糖模型,利用连二亚硫酸钠消耗培养基中氧构建缺氧模型;实验分为对照组、缺糖缺氧4、8和12 h组。MTT法检测各组细胞增殖率;Western blotting检测各组Hela细胞内质网应激和凋亡相关蛋白的表达水平;Hoechst染色检测各组细胞细胞核形态学改变。结果:与对照组比较,缺糖缺氧各组细胞增殖率明显下降(P<0.05);内质网应激相关蛋白GRP78表达水平明显升高,内质网应激相关凋亡信号蛋白CHOP和caspase-4活化片段蛋白表达水平明显升高(P<0.05);细胞内凋亡相关蛋白caspase-3活化片段表达水平(P<0.05);缺糖缺氧组细胞核出现核皱缩和核碎裂等凋亡形态学表现。结论:缺糖缺氧可以诱导Hela细胞发生凋亡,其凋亡可能是通过内质网应激介导。

3-甲基腺嘌呤对顺铂诱导HeLa细胞凋亡的影响

目的采用自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬,观察其对顺铂(DDP)诱导HeLa细胞凋亡的影响,探讨自噬在DDP诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用。方法用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察3-MA对DDP抑制HeLa细胞生长情况的影响;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;间接免疫荧光法检测自噬标志蛋白LC3和p62的变化;Hoechst荧光染色检测细胞凋亡。结果 MTT法显示,3-MA与DDP联合应用导致HeLa细胞生长抑制率增加;光镜结果显示,3-MA与DDP联合应用加剧了HeLa细胞收缩变圆,促进死亡;间接免疫荧光法检测到3-MA与DDP联合应用减弱了DDP诱导的HeLa细胞LC3聚集及其与p62的共定位;Hoechst荧光染色检测到3-MA与DDP联合应用增加HeLa细胞凋亡率。结论 3-MA抑制自噬能够促进DDP诱导HeLa细胞发生凋亡。

大蒜素对衰老模型小鼠心脏和肺的保护作用

目的观察大蒜素对D-半乳糖致衰老小鼠心肌和肺组织氧化应激与细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法雄性昆明小鼠50只,按体质量随机分为正常对照组(C组)、模型对照组(D组)和大蒜素小剂量组(L组)、中剂量组(M组)、大剂量组(H组),每组10只。D、L、M、H组小鼠注射D-半乳糖0.9%氯化钠溶液制备衰老模型,L、M和H组同时腹腔注射大蒜素注射液进行给药干预,共持续6周。通过小鼠转棒疲劳仪和小鼠跑台检测各组小鼠运动耐力;检测心肌和肺组织匀浆上清液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化力(T-AOC);免疫组织化学法观察凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达并统计二者比值变化。结果行为学实验结果:与C组比较,D组小鼠在疲劳转棒上的停留时间和小鼠跑台上持续跑步时间均明显缩短(P<0.05),L、M、H组较D组有所延长;D组小鼠心肌和肺组织匀浆上清液中MDA含量较C组升高(P<0.05),SOD活性下降(P<0.05),T-AOC下降(P<0.05),L、M、H组较D组小鼠心肌和肺组织匀浆中MDA含量下降(均P<0.05),SOD活性升高(均P<0.05),T-AOC上升(均P<0.05),且呈现一定剂量效应关系;免疫组化结果显示:D组小鼠较C组小鼠心肌Bax表达增强,Bcl-2表达减弱,L、M、H组小鼠Bax表达较D组减弱,Bcl-2表达较D组增强,肺组织两种蛋白表达趋势同心肌组织。结论大蒜素对D-半乳糖致衰老小鼠心脏和肺具有保护作用,具体表现为增加衰老小鼠心肺运动耐力、减轻心肌和肺局部组织过氧化水平,并减少心肌和肺组织内的细胞凋亡。

自噬抑制剂3-MA对乳胞素抑制胃癌BGC-823细胞增殖的影响及其机制

目的探讨联合应用自噬抑制剂3-Methyladenine(3-MA)和蛋白酶体抑制剂乳胞素(Lactacystin,LAC)对胃癌细胞系BGC-823增殖的影响及其机制。方法体外培养BGC-823细胞,MTT法检测BGC-823细胞增殖率,Western印迹检测线粒体凋亡相关蛋白Cytochrome C以及内质网凋亡相关蛋白caspase-4表达水平。结果与对照组相比,蛋白酶体抑制剂LAC可以引起明显的BGC细胞增殖率的下降,联合应用3-MA可以增加其引起的细胞增殖率的下降,Western印迹结果显示LAC可以上调线粒体凋亡相关蛋白Cytochrome C以及内质网凋亡相关蛋白caspase-4表达水平,联合应用3-MA和LAC可以进一步引起表达水平的升高。结论自噬抑制剂3-MA可以增加LAC引起的细胞凋亡,通过线粒体和内质网凋亡信号通路。

氯喹对过氧化氢诱导平滑肌细胞内质网应激途径凋亡的影响

目的探讨氯喹对过氧化氢诱导平滑肌细胞(SMC)内质网应激途径凋亡的影响。方法体外培养主动脉SMC细胞,分别加入100、400和800μmol/L H2O2培养12h后,MTT法检测SMC细胞生存率。将细胞分为对照组、H2O2组、氯喹组、H2O2+氯喹组,培养12h后采用MTT法检测氯喹阻断自噬后SMC细胞的生存率,倒置相差显微镜观察H2O2对SMC细胞形态变化的影响,间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,Western blotting检测Beclin-1、LC3、GRP78、CHOP、Caspase-3及Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果 MTT检测结果显示,100、400、800μmol/L H2O2作用12h后,SMC细胞存活率明显降低,IC50为447.4μmol/L;氯喹阻断自噬后,SMC细胞存活率明显降低(P<0.05)。倒置相差显微镜观察结果显示,H2O2+氯喹组SMC收缩变圆,细胞密度明显下降。激光共聚焦显微镜观察显示,H2O2与氯喹联合作后,SMC细胞质中LC3和p62蛋白表达均明显增加,且有明显共定位现象。Western blotting检测结果表明,H2O2与氯喹联合作用后,SMC中内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达明显增加(P<0.05,P<0.01),凋亡执行分子Caspase-3的裂解形式蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论氯喹对过氧化氢诱导SMC通过内质网应激途径的凋亡具有促进作用。

HIP1基因沉默对HeLa细胞内吞的影响

目的探讨HIP1沉默后对HeLa细胞内吞的影响。方法转染si-HIP1重组质粒到HeLa细胞中;Western印迹方法检测转染si-HIP1重组质粒的HeLa细胞中HIP1、表皮生长因子受体(EGFR)和AP2蛋白表达情况;激光共聚焦显微镜检测不同时间HeLa细胞EGF内吞情况。结果转染si-HIP1重组质粒能有效抑制HeLa细胞HIP1蛋白表达,细胞内EGFR和AP2蛋白表达降低,同时减慢EGF在细胞中内吞和降解速度。结论 HIP1通过降低EGFR和AP2表达影响HeLa细胞对EGF的内吞。

EGFR及TGF-α在前列腺腺癌及前列腺上皮内瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)和转化生长因子α(TGF-α)蛋白在前列腺腺癌(PAC)和高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)以及癌旁前列腺良性增生(BPH)组织中的表达,阐明其表达在PAC发生过程中的作用。方法:收集41例PAC和癌旁BPH组织以及32例HGPIN病变组织,采用免疫组化SABC方法检测EGFR和TGF-α在不同病变中的表达。结果:①EGFR在PAC、HGPIN及BPH组织中的阳性表达率分别为56.6%、53.7%及85.4%,在BPH中的表达率高于PAC和HGPIN,差异有统计学意义(P<0.01)。PAC和HGPIN组织中EGFR的表达差异无统计学意义(P>0.05)。EGFR的表达与肿瘤细胞的分化程度无关,在高、中和低分化PAC组织中阳性表达率分别为53.9%、55.6%及52.6%,差异无统计学意义(P>0.05)。②TGF-α在PAC中的阳性表达率为56.1%,在癌旁BPH组织中阳性表达率为85.4%,差异有统计学意义(P<0.01),但与肿瘤细胞的分化程度无关,在高、中和低分化PAC阳性表达率分别为53.8%、66.7%及52.6%,差异无统计学意义(P>0.05)。③TGF-α在HGPIN病变中的阳性表达率为56.3%,与PAC比较差异无统计学意义(P>0.05),但与BPH比较差异有统计学意义(P<0.01)。EGFR和TGF-α在PAC中共同阳性率为81.8%,分别阳性率EGFR为18.2%,TGF-α为26.3%,两者呈正相关(r=0.558,P<0.001),但在HGPIN病变(r=0.111,P=5.450)和BPH(r=0.024,P=0.883)中两者无相关性。结论:EFFR和TGF-α蛋白在PAC、HGPIN和BPH组织中的表达水平不同,可以作为良恶性前列腺疾病的诊断及鉴别诊断指标。

顺铂诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡与自噬的研究

目的探讨顺铂对Hela细胞凋亡和自噬的影响。方法用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)观察顺铂对HeLa细胞生长抑制情况;Hoechst 33342荧光染色检测细胞凋亡;间接免疫荧光法检测自噬标志蛋白LC3和P62的变化;免疫印记法检测细胞凋亡蛋白Bax/Bcl-2、Caspase-3和自噬标志蛋白LC3和P62的变化。结果顺铂对Hela细胞生长抑制作用表现为时间剂量依赖关系;顺铂作用Hela细胞导致Bax/Bcl-2比值和Caspase-3表达增加,同时自噬标志蛋白LC3和P62活化。结论顺铂诱导Hela细胞发生凋亡,伴有自噬发生。

大蒜素对D-半乳糖致衰老小鼠卵巢FSHR、LHR和active Caspase-3蛋白表达的影响

目的观察大蒜素对D-半乳糖所致的雌性衰老小鼠促卵泡素受体(FSHR)与促黄体素受体(LHR)表达水平的影响,结合凋亡相关蛋白active Caspase-3表达变化初步探讨原因。方法 SPF级雌性昆明小鼠40只,随机分为对照组、模型组、大蒜素组和维生素C组,每组10只。模型组、大蒜素组和维生素C组小鼠以100 mg/kg体重剂量皮下注射D-半乳糖生理盐水溶液,对照组小鼠注射同体积生理盐水,每日1次,同期大蒜素组以20 mg/kg剂量腹腔注射大蒜素注射液,维生素C组以50 mg/kg剂量腹腔注射维生素C,对照组及模型组腹腔注射同体积生理盐水,共持续6周。给药结束后采集标本,Western blot法检测卵巢组织FSHR与LHR表达水平,免疫荧光法观察active Caspase-3表达变化。结果与对照组相比,模型组FSHR与LHR表达水平明显升高(P<0.05),active Caspase-3表达增强,大蒜素组FSHR与LHR表达水平(与β-actin比较)分别为0.63±0.07和0.82±0.06,较模型组明显下降(P<0.05),active Caspase-3表达亦有减弱趋势。结论大蒜素能下调FSHR与LHR表达水平,提示其一定程度上延缓了D-半乳糖所致小鼠卵巢的衰老,该作用可能与其减少卵巢细胞凋亡有关。

Survivin在甲状腺癌中的研究进展

Survivin是凋亡蛋白抑制因子(IAP)家族中分子量最小、结构独特的成员,具有抑制凋亡、调节细胞分裂和参与血管形成等的多种功能。Survivin在恶性甲状腺癌中高表达,在正常甲状腺组织中不表达,其表达的特异性具有成为甲状腺癌诊断的标志物和肿瘤治疗新靶点的潜力。本文就Survivin及其在甲状腺癌的表达、诊断和治疗方面的研究进展作一综述。

微波辐射非热效应诱导人肺癌A549细胞自噬的研究

目的探讨微波辐射非热效应对人肺癌A549细胞自噬的影响。方法用冰浴法制备微波辐射非热效应模型,剂量为100 W-12 mV/cm2、150 W-18 mV/cm2和200 W-21 mV/cm2,照射10分钟;24小时后,免疫印记法检测细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3的变化,泛素化蛋白表达变化;间接免疫荧光法检测自噬标志蛋白LC3和p62的变化。结果微波辐射非热效应作用A549细胞,导致自噬相关蛋白Beclin-1表达增加,LC3和p62活化。结论微波辐射非热效应能够诱导人肺癌A549细胞发生自噬。

HIP1基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响

目的研究HIP1基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法构建靶向HIP1的shRNA表达载体pSilence-shHIP1,应用脂质体转染到PC-3细胞,RT-PCR检测HIP1基因沉默效果,Western blotting确认有效作用靶点。通过细胞划痕实验和细胞生长曲线研究HIP1基因对PC-3细胞增殖的影响。结果转染PC-3细胞后,沉默HIP1基因效率达83%(P<0.01);Western blotting证实该基因片段为抑制HIP1的有效作用靶点。细胞划痕实验和生长曲线显示HIP1基因沉默可抑制PC-3细胞的增殖。结论 pSilence-shHIP1表达载体可特异性地抑制HIP1基因的表达,沉默HIP1基因可抑制PC-3细胞增殖和迁移。

杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞自噬的诱导作用及线粒体分裂的促进作用

目的:观察杨梅素作用于人卵巢癌SKOV3细胞后细胞自噬的发生和线粒体分裂程度,探讨杨梅素对其线粒体分裂的影响及自噬的诱导作用。方法:体外培养SKOV3细胞,杨梅素给药剂量按0、20、40和60g·L^(-1)分为对照组和低、中、高剂量杨梅素组,均作用12h。流式细胞术检测各组细胞线粒体膜电位变化,MitoTracker Red荧光探针特异性标记线粒体观察其形态,Western blotting法检测动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)和自噬相关蛋白LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白表达水平,采用间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3表达强度。结果:与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞线粒体膜电位下降比例明显升高(t=3.27,t=6.85,t=5.49,P<0.05)。与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞中线粒体数目增加,且线粒体砂砾感增强。与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞中Drp1(t=4.35,t=3.28,t=6.17,P<0.05)和Fis1(t=8.32,t=6.74,t=9.27,P<0.05)蛋白表达水平明显升高,中和高剂量杨梅素组细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高(t=3.28,t=4.21,P<0.05)。间接免疫荧光检测,与对照组比较,随着杨梅素给药剂量增加,LC3表达强度逐渐增强。结论:杨梅素能够诱导人卵巢癌SKOV3细胞发生自噬,并对线粒体动分裂有明显促进作用。