沉默信息调节因子3对白藜芦醇诱导的人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响

目的:检测沉默信息调节因子3 (Sirt3)对白藜芦醇(Res)诱导的人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响,探讨其促进凋亡的机制。方法:人卵巢癌SKOV3细胞加入不同浓度(0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0mg·L-1)Res培养24h,MTT法检测细胞存活率。将细胞随机分为对照组、Sirt3抑制剂3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶(3-TYP)组、Res组和3-TYP+Res组,培养24h后,MTT法检各组细胞增殖抑制率;采用Hoechst 33342进行细胞核染色,激光共聚焦显微镜观察细胞核形态;采用活性氧(ROS)探针检测细胞中ROS水平;Western blotting法检测各组细胞中Sirt3、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase-3)蛋白表达水平。结果:MTT实验,随着Res浓度的增加,细胞存活率明显降低,Res的半数抑制浓度(IC50)为42.73mg·L^-1。与对照组比较,Res组和3-TYP+Res组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05);与Res组比较,3-TYP+Res组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,3-TYP+Res组细胞核出现固缩、染色增强、核碎裂增多。与对照组比较,3-TYP组细胞红色荧光无明显变化,Res组和3-TYP+Res组细胞红色荧光明显减少。Western blotting法检测,与对照组比较,3-TYP组细胞中Sirt3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),Res组细胞中Sirt3和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与Res组比较,3-TYP+Res组细胞中Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2和Sirt3蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:Res可以诱导SKOV3细胞的凋亡,3-TYP通过抑制Sirt3表达可增强Res的作用。

杨梅素通过促进DRP1依赖性线粒体分裂诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡

目的:观察杨梅素与mdivi-1分别或联合作用于人卵巢癌SKOV3细胞后细胞凋亡和线粒体分裂情况,探讨杨梅素诱导SKOV3细胞凋亡的机制。方法:体外培养SKOV3细胞,随机分为对照组、mdivi-1组、杨梅素组和联合给药组,mdivi-1组以50μmol·L^(-1) mdivi-1作用1h后更换普通细胞培养液继续培养23h,杨梅素组以50g·L^(-1)杨梅素作用24h,联合给药组以50μmol·L^(-1) mdivi-1作用1h后更换含50g·L^(-1)杨梅素的细胞培养液继续培养23h。MTT法检测各组细胞存活率;Muse~凋亡检测试剂盒检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blotting)观察细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)、动力相关蛋白1(DRP1)和分裂蛋白1(FIS1)表达水平;MitoTracker~ Red荧光探针特异性标记线粒体观察各组细胞线粒体分裂情况。结果:与对照组比较,杨梅素组细胞存活率明显降低(P<0.05);与杨梅素组比较,联合给药组细胞存活率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,杨梅素组细胞凋亡率升高(P<0.05);与杨梅素组比较,联合用药组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与对照组比较,杨梅素组细胞中Cyt C和caspase3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与杨梅素组比较,联合用药组Cyt C和caspase3蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,杨梅素组细胞线粒体分裂程度增强;与杨梅素组比较,联合用药组线粒体分裂程度下降。与对照组比较,杨梅素组细胞中DRP1和FIS1蛋白表达水平升高(P<0.05);与杨梅素组比较,联合用药组DRP1和FIS1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:杨梅素可通过促进DRP1依赖性线粒体分裂诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡。