CD147通过Beclin-1抑制前列腺癌PC-3细胞自噬

目的:通过建立饥饿诱导的自噬模型,探讨CD147对前列腺癌PC-3细胞自噬作用的影响,并阐明其作用机制。方法:通过饥饿诱导方式建立自噬细胞模型。实验分为阴性对照组和RNAi干扰CD147组(PC-3/shCD147组)。GFP-LC3质粒转染观察细胞自噬斑点形成情况,免疫印迹技术检测自噬蛋白LC3和Beclin-1表达,台盼蓝排斥实验检测细胞死亡率。结果:与阴性对照组比较,PC-3/shCD147组GFP-LC3斑点细胞数增加(P<0.01),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ(P<0.01)和Beclin-1(P<0.05)表达水平升高;与阴性对照组(22.3%±3.5%)比较,PC-3/shCD147组细胞死亡率(38.4%±3.1%)明显升高(P<0.05)。结论:在前列腺癌PC-3细胞中,CD147通过Beclin-1抑制饥饿诱导的自噬过程,减少细胞自噬的发生。

CD147 RNA干扰对前列腺癌LNCaP-AI细胞体外侵袭力的影响

目的:探讨CD147对前列腺癌LNCaP-AI细胞体外侵袭力的影响,阐明CD147对LNCaP-AI细胞侵袭作用的机制,为研究前列腺癌的侵袭过程提供依据。方法:利用脂质体2000分别转染靶向CD147基因的shRNA质粒和阴性对照质粒至LNCaP-AI细胞中,经G418筛选获得稳定表达株,分别命名为AI/shCD147(CD147沉默组)和AI/Scramble(阴性对照组)。Western blotting法检测2组细胞中CD147蛋白表达。Transwell实验检测2组LNCaP-AI细胞的体外侵袭力。Western blotting法检测2组细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果:Western blotting法,与AI/Scramble组比较,AI/shCD147组LNCaP-AI细胞中CD147蛋白表达水平明显降低。Transwell实验,AI/shCD147组吸光度(A)值(1.43±0.2)明显低于AI/Scramble组(2.08±0.3),差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting法,AI/shCD147组细胞中MMP-2蛋白表达水平(0.46±0.08)明显低于AI/Scramble组(0.85±0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CD147可通过诱导MMP-2分泌促进前列腺癌LNCaP-AI细胞的体外侵袭力,其可能成为前列腺癌基因治疗的新策略。

CD147通过Wnt/β-catenin途径抑制前列腺癌细胞对多西紫杉醇敏感性

目的探讨CD147在多西紫杉醇(DOC)对前列腺癌细胞敏感性的作用及机制。方法实验分为对照组(PC-3/Scramble)和RNAi干扰CD147组(PC-3/shCD147)。DOC作用细胞72 h,MTT法检测DOC对细胞的生长影响;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot法检测β-连环蛋白(β-catenin)和P糖蛋白(P-gp)表达。结果DOC作用PC-3/Scramble细胞的IC50值(12.47±1.71)μmol/L明显高于PC-3/shCD147细胞的IC50值(2.38±0.13)μmol/L。5μmol/L DOC诱导PC-3/Scramble细胞的凋亡率是(8.75±0.75)%,低于PC-3/shCD147细胞(16.1±0.95)%(P<0.01);5μmol/L DOC作用细胞后,PC-3/shCD147细胞中β-catenin和P-gp表达低于PC-3/Scramble细胞(P<0.01);与PC-3/shCD147细胞比较,Wnt途径激活剂LiCl作用细胞后细胞存活率升高(P<0.01),β-catenin和P-gp表达增加(P<0.01)。结论CD147通过Wnt/β-catenin信号途径降低前列腺癌PC-3细胞对DOC的敏感性。

CD147抑制前列腺癌细胞氧化应激作用

目的探讨CD147减轻过氧化氢诱导的细胞氧化应激对前列腺癌细胞(LNCaP)损伤的作用。方法利用慢病毒系统建立沉默CD147的前列腺癌细胞模型(LNCaP/shCD147细胞),同时设立阴性对照细胞(LNCaP/Scramble细胞),并进行RT-qPCR验证。通过检测LNCaP/shCD147和LNCaP/Scramble两种细胞中活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)的含量以验证沉默CD147后前列腺癌细胞氧化应激和抗氧化酶的变化;而后向细胞内加入过氧化氢(H_(2)O_(2)),CCK-8法检测细胞生长;Western blot检测核因子E2相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)的表达变化,验证沉默CD147后前列腺癌细胞发生的氧化应激与PI3K/AKT信号通路之间的关系。结果成功构建沉默CD147的前列腺癌细胞模型,与LNCaP/Scramble细胞相比,mRNA中CD147表达量降低(P<0.01)。氧化应激结果显示沉默CD147后细胞内ROS和MDA含量增高(P<0.01,P<0.05),而SOD和GSH-PX的活性下降(P<0.01),表明沉默CD147后,LNCaP/shCD147细胞发生氧化应激作用。此外,随着H_(2)O_(2)浓度的升高LNCaP/shCD147组细胞的存活率下降(P<0.01)。当抑制PI3K/AKT信号通路后,LNCaP/shCD147组Nrf2和HO-1表达量均降低(P<0.01),表明CD147通过PI3K/AKT通路抑制前列腺癌细胞的氧化应激损伤。结论CD147可减轻前列腺癌细胞的氧化应激损伤,其抑制机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。