华支睾吸虫lncRNA EV19对人肝星状细胞纤维化相关基因的调控研究

为探究华支睾吸虫长链非编码RNA(lncRNA),对人肝星状细胞(LX-2细胞)纤维化相关因子的影响,通过生物信息学分析初步筛选出8种可能与纤维化相关的华支睾吸虫lncRNA,进一步利用RT-qPCR证明其中lncRNA EV1、EV17、EV19在华支睾吸虫成虫及其胞外囊泡中均表达。随后构建pcDNA3.1-lncRNA EV19、pcDNA3.1-lncRNA EV17、pcDNA3.1-lncRNA EV1过表达载体,转染LX-2细胞;收集转染后的细胞,通过RT-q PCR和Western-blot分别检测α-SMA、Col1、Col3基因的转录和蛋白表达水平;并利用CCK-8检测lncRNA对LX-2细胞增殖的影响。最后,利用RT-qPCR及双荧光素酶报告基因试验验证lncRNA EV19作用靶标。结果显示,与对照组相比,lncRNAEV19过表达组中α-SMA、Col1、Col3在转录水平和蛋白水平均显著升高(P<0.05),且能促进LX-2细胞的增殖。RT-qPCR结果显示,过表达lncRNA EV19的LX-2细胞中miR-19b-1-5p、miR-29b-1-5p、miR-940表达量降低;双荧光素酶报告基因试验证实lncRNA EV19靶向miR-19b-1-5p。以上结果表明,华支睾吸虫lncRNA EV19可能通过负调控miR-19b-1-5p促进LX-2细胞的增殖,进而引起纤维化的发生。