microRNA-218在肝细胞癌中的表达及其与肝癌转移复发关系的实验研究

肝细胞癌(HCC,简称肝癌)的恶性程度高,侵袭性强,极易复发和转移。研究肝癌侵袭与转移的潜在标志物和机理,将对肝癌的治疗和预后判断至关重要[1]。microRNAs(miRNAs)是一类长度约为19-22个核苷酸的非编码RNA,研究表明microRNAs参与了肝癌的发生、发展和侵袭转移的全过程[2,3]。

miRNA在结直肠癌中的研究现状

MicroRNA（微小RNA,miRNA）是一类大小约19-25nt的短链非编码RNA,人类已发现1000多种miRNA,参与调节了人60%以上的人类基因[1]。MiRNA由RNA polymeraseⅡ转录成较长的初级产物pri-miRNA,然后在Drosha和DGCR8酶的作用下,剪切为约70nt并具有独特发卡结构的premiRNA,

外泌体在阿尔兹海默病中的应用研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种起病隐匿的神经系统退行性疾病。95%~99%的AD患者没有家族遗传史,这称为散发性AD。随着年龄的增长,AD发病的风险呈指数级增加。WHO最新报告统计,全世界有近3560万人患有痴呆症。当前,中国的AD患者已超过1000万人,是新发病例全球增速最快的国家之一。AD的病因迄今未明,涉及多种因素的综合作用,如遗传因素、环境因素、免疫因素、生活方式等[1]。

Smad4介导Activin A信号在PC12细胞OGD损伤中作用研究

目的明确OGD损伤诱导的PC12细胞激活素A(Activin A,ActA)信号在细胞内基于Smad4的转导模式及作用。方法使用鼠神经生长因子(NGF,50ng/ml)诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞向神经元样转化,利用无糖DMEM培养液联合连二亚硫酸钠(1mmol/L)构建神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型,体外模拟神经元缺血性损伤。OGD 0、3h、6h、12h后Realtime-PCR检测ActA mRNA表达水平;激光共聚焦观察免疫荧光染色后的Smad4质核分布情况。结果 NGF诱导后PC12细胞贴壁并伸出较长的突触,向神经元样转化。细胞OGD处理3h后ActA mRNA表达水平较0h显著升高,6h开始下降;OGD3h后Smad4在细胞核内的分布较OGD 0h明显增加,6小时开始下降。结论 OGD损伤可诱导神经元样PC12细胞ActA信号激活,Smad4可通过质核移位介导ActA信号在受体水平下游的信号转导,且随时间延长呈动态变化。

小胶质细胞对大脑认知障碍的研究进展

小胶质细胞是由血液中的单核细胞演化而来,是中枢神经系统内特殊的免疫细胞,也是神经炎症的主要调节因素之一,在生理学上对宿主防御和组织修复至关重要。小胶质细胞在大脑老化的过程中起到重要作用,本文就此内容展开综述。

瘦素介导的信号通路研究新进展

瘦素是由位于人类染色体（7q 31.3）ob基因编码的一种分泌型蛋白质通过与瘦素受体结合发挥其生理功能[1]。瘦素是能同时参与几个系统的增殖和抗凋亡作用的一种多效性的荷尔蒙激素,既往研究认为瘦素具有降低食欲减轻体重,调节脂肪沉积和能量平衡,调节神经内分泌作用,参与机体的免疫应答反应等作用。近年来研究发现瘦素通过介导细胞内某些信号传导通路发挥促进肿瘤细胞增殖和转移的作用。

前列腺癌组织中OPN和Survivin表达与PSA的相关性分析

目的通过分析桥蛋白(OPN)和Survivin在前列腺癌(PCa)组织中的阳性表达与前列腺特异性抗原(PSA)的相关性分析,探究前列腺癌的预后判断方法。方法检测70例前列腺癌和48例前列腺增生组织应用免疫组织化学方法相关蛋白OPN、Survivin蛋白的表达和相应患者血浆中PSA值。结果前列腺癌组织中OPN和Survivin蛋白的阳性表达率分别51.4%(36/70)、65.7%(46/70),OPN和Survivin在前列腺增生组织中的阳性表达率分别10.4%(5/48)、0(0/48),在前列腺增生和前列腺癌组织组织中OPN和Survivin蛋白阳性表达率差异具有统计学意义(P<0.05),Survivin与OPN在前列腺癌组织中的阳性表达呈负相关(P<0.01)。OPN和Survivin蛋白表达和PSA数值与前列腺癌病理分级、临床分期、转移情况有关,具有统计学意义(P<0.05)。结论在临床上检测OPN、Survivin表达和前列腺特异抗原(PSA),对前列腺癌疾病的预后有作用。

酶解鹿茸多肽促进人成骨细胞增殖分化的活性研究

鹿茸系鹿科动物梅花鹿或马鹿尚未骨化的幼角,含有蛋白质、氨基酸、糖类、无机元素、生物胺、核苷及多种无机物质[1]。其中蛋白质含量丰富,是鹿茸的主要功能成分之一[2],我国对鹿茸的研究主要集中在对其粗提物,如乙醇萃取物[3]等的功能性评价。然而,研究表明鹿茸中蛋白质经酶解可产生生物活性肽,具有抗氧化[4]、抗骨质疏松[5,6]、促进细胞增殖[7]等多种生物活性。体外实验中,通常采用骨肉瘤来源的成骨样细胞作为药物促进成骨细胞形成功能的实验模型[8],本研究采用人成骨肉瘤细胞的OS-732成骨样细胞作为细胞模型。

紫景天总黄酮的分离制备及鉴定研究

牙周炎是口腔科常见病多发病,是导致牙齿丧失的主要原因之一。目前主要治疗方法是以局部治疗为主,药物治疗主要是牙周袋用药。目前牙周袋用药基本是抗生素制剂,易产生耐药性及菌丛失调等副作用[1]。紫景天为景天科多年生草本植物,在东北地区的长白山具有广泛分布。其主要化学成分为多种黄酮类化合物和活性多糖等。全草入药,具有收敛止血、清热解毒及调节免疫功能等功效。此外,

逆转骨肉瘤耐药的实验研究

目的构建骨肉瘤耐药细胞,探讨LIMK1(LIM Kinase1)逆转骨肉瘤耐药的作用及机制。方法通过长春新碱(VCR)诱导建立人成骨肉瘤MG63的耐药细胞亚系,应用半数抑制浓度公式计算IC50值及耐药指数评估细胞的耐药性;CCK-8法检测细胞增殖抑制率;相差倒置显微镜观察耐药细胞细胞形态的改变;PT-PCR实验检测耐药基因MDR1及其相关基因LIMK1的表达;转染pSUPER-LIMK1重组质粒,验证沉默LIMK1基因逆转MG63耐药的作用并分析其机制。结果本研究所构建的耐药细胞的耐药指数为7.01,属中度耐药;MG63细胞排列规则,大小均一,以短梭形和多边形为主,而耐药细胞则大小不一、呈不规则排列,长梭型较多、两极可见伪足;耐药细胞的MDR1基因表达上调,与LIMK1基因表达正相关,沉默LIMK1基因后显著下调MDR1基因表达,同时显著增加了耐药细胞对长春新碱的敏感性。结论成功构建了骨肉瘤MG63耐药细胞,验证了LIMK1基因沉默后对骨肉瘤耐药的逆转作用;为逆转肿瘤耐药研究奠定了实验基础。

TSC1转基因敲除小鼠动物模型的构建及敲除效果的初步研究

目的为探讨mTOR信号通路在骨骼发育过程中的机制作用,建立骨骼发育相关的TSC1转基因小鼠,提供稳定的动物模型。方法取8周龄健康清洁级TSC1flox/flox小鼠分别与肢芽干细胞特异性重组酶(Prx-1-Cre)小鼠、软骨细胞特异性重组酶(Col2al-Cre)小鼠及成骨细胞特异性重组酶(Osx-Cre)小鼠进行杂交。将繁殖出的小鼠继续与TSC1flox/flox小鼠回交,并对其子代小鼠的基因型进行鉴定及mTOR活性检测。结果杂交后分别获得肢芽干细胞特异性TSC1敲除小鼠、软骨细胞特异性TSC1敲除小鼠和成骨细胞特异性TSC1敲除小鼠各8只。与正常组比较,上述3种转基因小鼠p-S6均比正常组升高(P<0.05)。结论本实验成功应用Cre/loxP系统构建肢芽干细胞特异性TSC1敲除小鼠、软骨细胞特异性TSC1敲除小鼠、成骨细胞特异性TSC1敲除小鼠,均提示mTOR活性增高,有明显TSC1敲除效果,为mTOR信号通路研究骨与软骨发育的机制作用提供实验基础。

LIMK1调控骨肉瘤细胞耐药的实验研究及机制分析

目的探索LIMK1(LIM Kinase1)基因表达上调对人成骨肉瘤细胞耐药的影响,分析其可能的机制。方法应用阳离子脂质体介导的方法,将含有LIMK1激酶活性的重组质粒CFP-LIMK1-WT cDNA按不同浓度梯度瞬时转染人骨肉瘤细胞MG63,通过RT-PCR验证转染效率;采用CCK-8法检测上述细胞对不同浓度长春新碱的耐药情况,并通过Multi Experiment Matrix(MEM)和The Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery(DAVID)数据平台筛选LIMK1共表达基因及其富集信号通路,分析可能的耐药机制。结果随着转染浓度梯度增加,LIMK1及multidrug resistance protein 1(MDR1)基因表达呈明显上调趋势,人骨肉瘤细胞MG63的耐药程度增强。LIMK1及其共表达基因主要富集的信号通路有Rap1signaling pathway、TNF signaling pathway等。结论LIMK1基因表达上调促进人骨肉瘤细胞耐药,上述作用可能通过Rap1signaling pathway、TNF signaling pathway等信号通路来调节。

间充质干细胞对肝癌影响的研究进展

肝癌是最常见的癌症类型,死亡率非常高。由于间充质干细胞对肿瘤具有强烈的嗜性,可以向肿瘤部位迁移。因此,间充质干细胞在肿瘤发生,进展和转移中起到重要作用。已经有大量的证据表明,间充质干细胞具有靶向性,能够迁移和植入到肿瘤部位,刺激癌细胞生长,侵袭和转移。

紫景天黄酮对实验性牙周炎大鼠血清中IFN-γ水平的影响

牙周炎是口腔临床多发病,是导致牙缺失的主要原因之一,严重影响咀嚼功能,牙周炎病因尚未完全明确,但国内外学者较公认免疫因素与牙周炎发生有重要的关系[1]。IFN-γ是Th1型细胞因子,由CD4+T淋巴细胞分泌,Th1参与牙周炎的免疫应答[2,3]。本研究通过应用紫景天黄酮治疗大鼠实验性牙周炎,探讨紫景天黄酮对实验性牙周炎大鼠血清中IFN-γ水平的影响。

LAMR1和ENO1自身抗体对早期非小细胞肺癌诊断的价值

目的探究肿瘤相关抗原(TAAs)LAMR1、ENO1自身抗体在非小细胞肺癌(NSCLC)早期诊断中的价值。方法收集220例NSCLC患者和220例健康对照者血清,用ELISA方法检测血清中LAMR1、ENO1自身抗体,分析TAAs自身抗体及联合检测的诊断价值。结果NSCLC患者血清中LAMR1、ENO1自身抗体水平上调(P<0.001)。早期NSCLC的LAMR1、ENO1自身抗体水平也明显高于健康对照组(P<0.001),敏感性分别为70.3%(95%CI:61.5~77.9)、59.4%(95%CI:50.3~67.9),特异性分别为65.9%(95%CI:59.2~72.1)、81.8%(95%CI:75.9~86.6),联合检测的敏感性增加至75.8%。结论LAMR1、ENO1自身抗体具有NSCLC早期诊断的潜在价值。

长春地区120例健康成人外周血T淋巴细胞亚群的参考范围

外周血T淋巴细胞亚群的检测已经广泛应用于多种疾病的诊断、探索疾病的发病机理、以及指导临床医生观察病患的发病规律和药物疗效观察等等。流式细胞术是检测外周血T淋巴细胞亚群的最主要的方法。目前,临床医院和科研机构应用的流式细胞仪主要来自美国的BD和Beckman Coulter公司。

激活素A高表达对ActA/Smads通路基础活化水平的影响

目的探讨激活素(Act)A细胞内高表达对Act A/Smads通路基础活化水平的影响。方法以ActβA重组载体(Act A-p IRES2-EGFP)和空载体(p IRES2-EGFP)稳定转染的PC12细胞为阳性和阴性转染组,正常PC12细胞为对照,利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法检测3组细胞内Act A、Smad3和磷酸化Smad3在转录及蛋白水平的表达,激光共聚焦观察Smad4的质核分布情况。结果与阴性转染组相比,阳性转染组Act A mRNA及蛋白表达分别提高4.5和1倍,Smad3总蛋白及磷酸化蛋白表达分别提高了36.4%和86.9%,Smad4蛋白在阳性转染组细胞核内分布增加。结论 Act A内源性高表达可提高PC12细胞内Act A/Smads通路的基础活化水平。

盐酸小檗碱对人腺样囊性癌ACC2细胞增殖及周期的影响

目的研究盐酸小檗碱对人腺样囊性癌ACC2细胞的生长抑制作用和对细胞周期的影响。方法 CCK8法检测不同剂量的盐酸小檗碱对ACC2细胞的增殖抑制作用,并采用流式细胞术分别检测细胞周期及凋亡情况。结果在浓度1～20μg/ml范围内,不同浓度的盐酸小檗碱对人腺样囊性癌ACC2细胞均有抑制作用,且有一定的浓度依赖性。盐酸小檗碱细胞浓度为4.00、7.50及12.13μg/ml作用24 h后,ACC2细胞在S期比例增多,凋亡率明显增加。结论盐酸小檗碱通过干预细胞周期和凋亡对人腺样囊性癌ACC2细胞的增殖起抑制作用,同时与药物浓度有一定的依赖性。

Syndecan1慢病毒干涉质粒的构建及其对舌鳞癌CAL27细胞增殖的影响

目的探讨RNA干扰Syndecan1基因对舌鳞癌CAL27细胞增殖的影响,阐明其作用机制。方法构建靶向基因Syndecan1的siRNA载体重组质粒pDSL-hpUGIP-Syndecan1-1834、pDSL-hpUGIP-Syndecan1-1588、pDSLhpUGIP-Syndecan1-544作为RNA干扰质粒组,同时设立阴性对照质粒组(pDSL-hpUGIP-control siRNA质粒);采用荧光定量PCR检测Syndecan1mRNA的表达水平和表达抑制率;采用细胞计数法检测CAL27细胞的增殖率。结果倒置荧光显微镜下观察,细胞感染率为90%。荧光定量PCR检测,RNA干扰组Syndecan1mRNA表达水平低于阴性对照组(P<0.01),平均抑制率为68.6%。细胞增殖率检测,与阴性对照组比较,RNA干扰质粒组细胞增殖率明显升高(P<0.01)。结论干扰Syndecan1可抑制该基因的转录,并促进CAL27细胞的增殖。

Decorin对骨肉瘤MG63细胞侵袭和转移的影响

骨肉瘤是最普遍的发生于长骨干骺端的一种恶性肿瘤。尽管最近几十年骨肉瘤的治疗取得了长足的进步,但是由于化疗药物抵抗、放疗以及辅助治疗的有限性,加之恶性骨肉瘤具有较高的侵袭和转移性,使得晚期骨肉瘤的治疗和预后的效果仍然不理想。因此,阐明骨肉瘤转移和侵袭的机制,以及寻找有效的治疗方法对于骨肉瘤的治疗和发病机理的研究将起到重要的作用。