小鼠骨髓间充质干细胞对异基因肝移植模型大鼠移植区域组织损伤的修复作用

目的观察小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)注入后在异基因肝移植模型大鼠移植区域的迁徙、定居及组织修复作用,探讨MSCs诱导异基因移植免疫耐受的可能性。方法将昆明小鼠肝组织块埋入Wister大鼠肝脏切口,制备异基因肝移植大鼠模型;体外分离、纯化并培养昆明小鼠乳鼠MSCs;经DAPI标记后,尾静脉注入模型大鼠,通过激光共聚焦显微镜,分别在24h、5d及10d观察MSCs在肝脏移植区域的迁徙及定居;采用HE染色观察肝移植区域组织损伤情况。结果MSCs尾静脉注入后,24h即出现在肝移植区域,5d时分布于血管周围,10d时扩散至移植区域血管及周围组织;MSCs治疗5d,HE染色显示移植区域浸润的炎性细胞减少,可见肝组织结构。结论小鼠MSCs可在大鼠体内存活,并参与损伤区血管及组织的修复。

脊髓缺血再灌注损伤中热休克蛋白表达的研究

目的研究脊髓缺血再灌注损伤(SCII)后热休克蛋白(HSP70)表达的变化。方法制作SCII动物模型,采用光镜、激光多普勒超声、免疫组化等技术,研究SCII后HSP70表达的变化。结果(1)缺血30min,血灌流量平均下降85.37%,再灌流即刻血灌流量迅速升高,再灌流10min左右达到最高点。再灌流30min,血灌流量基本恢复到缺血前的基线水平,以后逐渐降低。(2)缺血后部分大鼠再灌注后出现“二次瘫痪”现象。(3)脊髓缺血30min再灌注60min后即有HSP70的表达增强,随着再灌注时间的延长,HSP70表达逐渐增多,在再灌注240min达到高峰。此后,HSP70表达逐渐减少,在再灌注24h基本消失。结论(1)脊髓缺血一定时间后恢复血液供应,可以发生再灌注损伤。(2)脊髓缺血再灌注后HSP70的表达增加。

流感病毒的裂解、纯化及抗原性研究

［摘 要］目的 研究适于大规模生产的流感病毒裂解剂、裂解和纯化方法。方法 使用不同表面活性剂（Triton X100和去氧胆酸钠）、不同浓度和时间进行裂解，通过电镜进行裂解效果观察。裂解后经密度梯度离心纯化，并进行抗原性试验。结果 Triton X100的裂解效果优于去氧胆酸钠，应用 1．0％ Triton X100裂解 90min效果较好。裂解率达90％以上。裂解后纯化的样品抗原性与进口疫苗类似。结论 该工艺适于流感裂解疫苗大规模生产。

氯化镉抗肿瘤作用的体内实验研究

[目的]研究氯化镉(CdCl2)抗肿瘤作用及对体内正常组织的影响。[方法]体内建立人肝癌裸小鼠移植瘤模型,阴性对照组给予生理盐水,阳性对照组给予5-Fu25mg/kg,实验组分别给予CdCl20.5、1.0、2.0mg/kg,锌保护组预先给Zn2+10mg/kg,24h后给予CdCl22.0mg/kg。观察CdCl2的抑瘤效应及对正常组织的影响。[结果]Cd-Cl2在体内可显著抑制SMMC-7721的增长,同时可引起外周血白细胞数减少,肝指数降低。[结论]CdCl2具有显著的抑瘤效应,锌作为保护剂可能通过诱导金属硫蛋白的表达拮抗镉的部分毒副作用。

碱性成纤维细胞生长因子对糖尿病大鼠创面愈合的影响

目的研究重组牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对糖尿病大鼠皮肤溃疡促愈合的机制。方法采用雄性wistar大鼠,制备糖尿病模型,造成背部皮肤缺损,将bFGF溶液连续15天喷注于创面,透明膜描记记录伤后第5、10、152、0天创面面积。伤后第51、0、15、20天取创面组织,观察其病理变化,包括肉芽组织的生长和再上皮化情况。结果bFGF可以明显加速糖尿病大鼠皮肤溃疡的愈合速度,使创面面积显著减小(P<0.05).组织学检查:bFGF治疗组在创伤10天成纤维细胞生长活跃,数量明显增多,成纤维细胞与毛细血管肉芽数量明显多于对照组;创伤后15天,创面收缩与再上皮化明显,新生上皮向创面中心爬行较快。在bFGF作用组,MMP-9和Timp-1表达增强。结论bFGF对于糖尿病大鼠皮肤溃疡的愈合有明显的促进作用。bFGF可能通过促进皮肤细胞高表达MMP-9和Timp-1途径加快皮肤损伤的修复。

基因重组人源超氧化物歧化酶抗辐射作用的研究

目的研究不同浓度的基因重组人源超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)对小鼠的抗辐射功能的影响。方法小鼠经口灌胃给药,剂量分别为1500U/Kg,6000U/Kg,24000U/Kg;另设生理盐水组。各组动物每天固定时间给药1次,连续给药1周。末次给药1h后,用深部X线治疗机对小鼠进行全身照射,剂量为1.0Gy。照射后24h,通过检测各组小鼠骨髓细胞的微核率和染色体畸变率探讨CuZn-SOD的防护作用。结果与生理盐水组相比,三种不同浓度的超氧化物歧化酶均使小鼠的骨髓嗜多染红细胞的微核率及骨髓细胞染色体畸变率显著降低(P<0.01)。结论基因重组人源超氧化物歧化酶CuZn-SOD具有抗辐射作用。

铅对未成年小鼠骨髓干/祖细胞和外周血的毒性作用

目的:为防治铅中毒提供实验室研究资料,探讨铅染毒时铅对未成年小鼠骨髓造血干/祖细胞和外周血的毒性作用。方法:60只昆明系小鼠随机分成4组,分别以0mg Pb2+/L、164mg Pb2+/L、546mg Pb2+/L、1638mg Pb2+/L浓度的醋酸铅饮用水对小鼠染毒,于染毒的第10天取小鼠股骨骨髓细胞作体外培养,观察各组红系祖细胞成集落数(BFU-E)和粒系祖细胞成集落数(CFU-GM)的变化并进行外周血测定。结果:醋酸铅可明显抑制骨髓BFU-E和CFU-GM的生长,集落数与对照组相比差异显著(P<0·05),且随醋酸铅浓度的增加,骨髓BFU-E抑制作用增强(相关系数为rs=-0·972,P=0·000),而外周血Hb、WBC和PLT与对照组比较差异无显著性(P<0·05)。结论:骨髓造血祖细胞对铅较为敏感,铅染毒小鼠外周血变化不明显时,已引起骨髓BFU-E和CFU-GM的生长障碍。

兔髂骨骺板软骨细胞体外构建骺板样软骨组织

目的 利用组织工程学技术体外构建骺板样软骨组织。方法 从 4～ 5周龄兔髂骨骺板软骨处获取软骨细胞 ,在离心管内轻微离心后 ,体外培养。行组织学观察。结果 培养至第 7天时 ,细胞呈现定向分化 ,形态与体内骺板软骨细胞相类似 :肥大软骨细胞体积较大、呈圆形或椭圆形 ;增殖、成熟软骨细胞体积小 ,呈圆形或扁圆形 ;细胞周围充满大量的细胞外基质。这些不同分化阶段的细胞形成了分化区带 ,肥大软骨细胞位于上侧 ,增殖、成熟细胞位于中间 ,其次是散在静止软骨细胞。培养第 14天 ,分化区带更加明显 ,增殖、成熟细胞和肥大软骨细胞呈现纵向定向排列。培养第 2 1天 ,组织表面出现膜样的结构。结论 体外构建的骺板样软骨组织与天然骺板的组织学形态极为相似。从髂骨处骺板处获取肥大软骨细胞进行体外构建骺板软骨材料 。

骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的修复作用

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养方法,建立大鼠肝脏缺血-再灌注损伤动物模型,观察骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的修复作用。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,建立大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的模型。动物模型制备后,将30只大鼠随机分为实验组(即尾静脉注入骨髓间充质干细胞0.5 ml,约106个)10只,阴性对照组(尾静脉注入生理盐水0.5 ml)10只。以正常大鼠作为空白对照组10只。结果各组大鼠于1周,2周,4周进行采血,取脏器进行各项指标检测。肝脏缺血-再灌注损伤大鼠在第1周实验组和阴性对照组的丙氨酸转移酶(ALT)、门冬氨酸转移酶(AST)和丙二醛(MDA)均明显高于空白对照组,差异显著,P<0.05。第2周时,实验组大鼠ALT、AST和MDA与阴性对照组比较,明显低于阴性对照组P<0.05,但SOD明显高于阴性对照组P<0.05。第4周时,实验组大鼠ALT、AST和MDA与阴性对照组比较,明显低于阴性对照组P<0.05。但实验组与空白对照组MDA和SOD有差异P<0.05。结论大鼠骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的修复可起促进作用。

神经营养因子对体外培养中脑多巴胺能神经元存活和分化的影响

目的观察不同神经营养因子对体外培养中脑多巴胺能神经元（DN）存活和分化的作用。方法选取14d孕鼠,无菌条件下取出胎鼠,采用酶消化法培养中脑DN神经元,在培养过程中,分别加入不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、神经营养因子3（NT3）、脑源性神经营养因子（BDNF）和神经生长因子（NGF）,通过细胞形态学和免疫荧光方法进行细胞纯度鉴定,观察不同作用条件下TH阳性细胞率确定细胞存活。结果以10--60ng/L的GDNF或BDNF持续培养10d,中脑多巴胺能神经元的存活率明显高于NGF和NT3作用组,浓度为20ng/m l的GDNF作用最强,能够维持60%的DN神经元存活。此外BDNF和GDNF能够增加DN神经元的数目,但未发现明显的剂量依赖效应,当GDNF与BDNF联合应用时,未见DN神经元的保护作用增强。结论GDNF和BDNF对原代培养的多巴胺能神经元存活具有较强的促进作用,并能诱导神经前体细胞分化为DN神经元。

小鼠骨髓间充质干细胞对异基因肝移植模型大鼠淋巴细胞的免疫抑制及损伤修复作用的研究

目的探讨异基因骨髓间充质干细胞(MSCs)应用于移植及自身免疫性疾病的治疗时替代免疫抑制剂的可能性。方法体外分离纯化及培养小鼠MSCs;将小鼠肝组织块埋入大鼠肝脏切口,制备异基因肝移植大鼠模型;制备模型前后经尾静脉注射小鼠MSCs;通过体外淋巴细胞增殖实验检测其对模型大鼠淋巴细胞增殖抑制作用;采用HE染色方法观察小鼠MSCs对异基因肝组织移植大鼠肝组织损伤的修复情况。结果MSCs治疗15d大鼠胸腺和脾脏均出现淋巴细胞增殖抑制现象,与对照组相比存在显著性差异(P<0.05);MSCs治疗2d和5d肝组织染色显示移植区域浸润的炎性细胞减少,可见肝组织结构。结论小鼠MSCs具有抑制异基因肝移植大鼠淋巴细胞增殖的作用,并参与移植区肝脏组织的修复。

骨髓间充质干细胞对大鼠生精上皮不同照射剂量放射性损伤的修复作用

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养方法,建立大鼠生精上皮放射性损伤动物模型,观察骨髓间充质干细胞对大鼠生精上皮放射性损伤的修复作用。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,建立大鼠放射性损伤动物模型。高剂量(2Gy)放射线照射组Wister大鼠20只,低剂量(0.5Gy)放射线照射组Wister大鼠20只,各组中随机取10只移植骨髓间充质干细胞作为实验组,剩余未移植大鼠10只作为对照组。取10只为经放射线照射大鼠作为正常对照组。照射2周和4周后取大鼠睾丸,切片染色镜下观察。结果高剂量照射组较低剂量照射组大鼠睾丸组织损伤明显加重,低剂量照射组实验组大鼠睾丸组织于移植后两周各级生精细胞基本恢复正常,移植后4周完全恢复与正常未照射组无明显区别。高剂量照射组实验组大鼠睾丸组织于移植后两周管腔内可见少量各级生精细胞,移植后4周管腔内各级生精细胞增多,可见成熟精子。各实验组恢复均好于对照组。结论大鼠骨髓间充质干细胞对生精上皮放射性损伤的修复可起重要作用。

苯乙酸对胶质瘤细胞HOXA1-A4基因mRNA表达的影响

目的观察苯乙酸(PA)诱导分化胶质瘤细胞C6过程中,同源盒基因HoxA1,A2,A3和HoxA4基因mRNA水平表达的变化。方法应用逆转录PCR(RT-PCR)及图像分析法,分组检测原代培养的大鼠星形胶质细胞及应用PA前后胶质瘤细胞C6中HoxA,A2,A3和HoxA4基因mRNA水平表达。结果HoxA1和A4基因在正常大鼠脑组织中弱表达,在胶质瘤C6细胞中存在明显表达;HoxA2基因在正常大鼠脑组织中未见表达,在胶质瘤C6细胞中存在明显表达;HoxA3基因在正常大鼠脑组织和应用PA前后的胶质瘤C6细胞中,均存在明显表达。应用PA处理后,胶质瘤C6细胞中HoxA1、A2基因未见表达,与未用药的C6细胞比较,图象分析显示差异有显著性(P<0.01);应用PA处理后,HoxA3、A4基因明显表达,与未用药的C6细胞比较,图象分析显示差异没有显著性(P>0.05)。结论苯乙酸抑制胶质瘤细胞增殖的作用机理可能与降低胶质瘤细胞HoxA1和HoxA2基因mRNA水平表达有关。

细胞凋亡在家兔正常软骨化骨过程中作用的电镜观察

目的通过对家兔软骨细胞超微结构的观察,探讨细胞凋亡在正常软骨细胞向软骨分化过程中的作用。方法采用透视电镜,检测5周龄正常家兔肋软骨细胞超微结构的变化。结果超微结构显示,软骨细胞的骨化过程是渐进过程,从静止区到骨化区,软骨细胞的形态、细胞核及各种细胞器的变化是逐渐增殖活跃到凋亡出现,且细胞的凋亡从增殖带和肥大带交接处开始出现。结论家兔肋软骨生长板软骨细胞从静止区到骨化区细胞的增殖和分化是一个渐进的过程,在此过程中凋亡可能起着重要的作用。

自体髂骨骺板移植重建胫骨骺板

目的 研究自体髂骨骺板移植修复胫骨骺板损伤的效果。方法 6周龄新西兰白兔 10只 ,切取全层髂骨骺板软骨 ,切除双侧胫骨上端骺板前内侧部分 1/ 2 ,然后将所取的髂骨骺板软骨移植入左侧骺板损伤处 ,右侧不进行移植作为对照。第 8周时摄双侧下肢X线片 ,并取双侧胫骨上端 ,行HE染色及甲苯胺蓝染色。结果 移植 8周时胫骨角对照组 38 80± 3 5 0 ,髂骨骺板移植组 8 36± 3 9(P <0 0 1)。组织学检查示对照组胫骨近端骺板内侧缺损处有明显骨桥形成 ,移植组骺板缺损区由骺板样软骨修复充填 ,与邻近骺板融合 ,无骨桥形成。

骺板软骨细胞的冻存及复苏

目的 研究骺板软骨细胞冻存的方法。方法 取对数生长期的骺板软骨细胞 ,加入配制好的冻存液 (冻存液A :培养液与DMSO ;冻存液B :含 5 %小牛血清的培养液与DMSO ;冻存液C :含 2 0 %小牛血清的培养液与DMSO ;冻存液D :小牛血清与DMSO混合 ;其中DMSO终浓度均为 10 %。) ,冻存。细胞复苏后用台盼蓝拒染试验检测细胞存活率。然后接种于培养皿中 ,采用苏木 伊红染色和甲苯胺蓝染色 ,观察细胞形态及合成糖胺多糖的能力。结果 细胞活率为 :A冻存液 70 % ,B冻存液 75 % ,C、D两种冻存液无明显差别 ,分别为 89%和 92 %。复苏的细胞贴壁时间延迟 ,但培养 72小时以后 ,细胞活力明显增强。甲苯胺蓝异染提示 ,经冷冻保存后软骨细胞仍能保持合成异染基质 (糖胺多糖 )的能力。结论 本实验冻存、复苏的方法结果稳定 ,可用于保存骺板软骨细胞。

双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞)的纯化工艺

目的 研究肾综合征出血热抗原的纯化工艺。方法 用Vero细胞繁殖肾综合征出血热病毒 ,经过灭活、浓缩 ,Sepharose 4FF凝胶过滤纯化。结果 用Sepharose 4FF柱层析纯化时 ,2 80nm监测收集到 3个吸收峰 ,其中第 1峰为抗原峰 ,将第 1峰稀释配制后进行动物实验 ,表明按照该工艺制备的Vero细胞纯化疫苗安全有效。结论 本研究为肾综合征出血热纯化疫苗的研制奠定了基础。

小鼠骨髓间充质干细胞对异基因肝移植大鼠淋巴细胞增殖的抑制作用

目的观察小鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)移植后,在异基因肝移植模型大鼠胸腺、脾脏及骨髓中的迁徙、定居情况及对淋巴细胞增殖的抑制作用,以探讨MSCs诱导异基因移植免疫耐受的可能性。方法体外分离、纯化并培养小鼠MSCs;将小鼠肝组织块埋入大鼠肝脏切口,建立异基因肝移植大鼠模型;经尾静脉移植DAPI标记的小鼠MSCs,通过激光共聚焦显微镜观察24 h及5 d时,MSCs在模型大鼠胸腺、脾脏及骨髓内的迁徙及定居;采用体外淋巴细胞增殖实验检测小鼠MSCs对异基因肝移植大鼠淋巴细胞增殖的抑制作用。结果MSCs移植后,24 h即散在分布于胸腺、脾脏及骨髓内,5 d时集中在血管周围;经MSCs治疗后,大鼠胸腺和脾脏淋巴细胞增殖均受到抑制,与未经治疗的模型大鼠相比,差异有显著意义。结论小鼠MSCs可迁徙至异基因肝移植大鼠免疫器官内,并具有抑制淋巴细胞增殖的作用。