玉米中伏马毒素B1、B2间接竞争酶联免疫吸附方法的建立

基于伏马毒素B1(fumonisin B1,FB1)单克隆抗体建立了间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA),用于玉米中伏马毒素的初步筛查。该方法优化了抗原包被浓度和单抗体稀释倍数、抗原包被条件、酶标二抗稀释倍数、底物作用时间。结果显示,线性检测范围为1.41~54.2ng/m L,最低检测限为24.5μg/kg,实测玉米样品加标回收率为89.36%~108.54%。交叉反应结果显示,与伏马毒素B2(fumonisin B2,FB2)交叉反应率为129.88%,与其他真菌毒素交叉反应均小于10%,该ic-ELISA方法可对玉米样品中的FB1与FB2总量进行初筛。

吡虫啉农药间接竞争ELISA检测方法的建立

为建立特异性检测吡虫啉的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA),利用能特异性识别吡虫啉的单克隆抗体,对ic-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结果表明:建立的ic-ELISA检测方法的灵敏度(ICI0)和检测范围(IC15~IC85)分别为0.06、0.08~3.26μg·L^-1。该方法对大米、梨、卷心菜3种样品加标回收率为83.61%~112.65%,与商品化试剂盒检测结果相比,其决定系数(R^2)为0.9531。这一研究建立的检测方法灵敏度高于大多数报道的检测方法,可满足我国规定的农产晶中吡虫啉最大残留限量标准检测要求,用于谷物、果蔬中吡虫啉残留定量检测。

CCKBR蛋白的生物信息学分析、原核表达及抗体制备

为了获得胆囊收缩素Ⅱ型受体（CCKBR）的多克隆抗体,建立CCKBR的分子水平检测方法,试验克隆了CCKBR基因CDS全序列并采用生物信息学方法分析CCKBR的抗原表位,根据分析结果合成重组CCKBR基因序列进行原核表达并对表达产物分析鉴定,最后制备多克隆抗体并分析抗体的适用性。结果表明：CCKBR基因CDS全序列扩增成功;抗原区域可能位于35-53,160-175,195-215,245-300,347-368,390-430位氨基酸残基;原核表达的目的条带大小为23.9 ku,与预期结果一致,Western-blot检测条带正确;用包涵体免疫新西兰大耳白兔,获得CCKBR的多克隆抗体,Westernblot检测到CCKBR天然蛋白。说明试验表达CCKBR重组蛋白成功,且由该蛋白制备的抗体能检测出CCKBR天然蛋白,可用于CCKBR的进一步研究。

小鼠CD40胞外段的原核表达及多克隆抗体的制备

为了探讨CD40抗体与CD40结合对B细胞应答小分子半抗原的增强作用,利用TRIzol法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA,并反转录成cDNA;根据CD40的胞外段CDS设计引物,通过PCR扩增目的基因,构建pGEX4T-1-CD40表达载体,进行原核表达及多克隆抗体制备。结果表明,成功扩增了522 bp的目的基因,表达并纯化获得了45 ku的CD40重组蛋白,多克隆抗体抗体不但可与重组蛋白结合,与小鼠脾脏天然CD40蛋白也可以特异性结合。说明CD40重组蛋白表达成功,且制备的抗体有望模拟CD40L为B细胞活化提供第二信号。