GEM-PA表面展示系统研究进展

GEM-PA表面展示系统是由革兰氏阳性细菌增强基质(Gram positive Enhancer Matrix,GEM)与锚定蛋白(Protein Anchor,PA)组成,以GEM颗粒为展示核心,外源蛋白通过与PA锚定蛋白的融合表达实现其在GEM颗粒表面的展示。由于GEM颗粒生物安全性高、结合外源蛋白能力强、有自体佐剂效应等优点,以其为基础的GEM-PA表面展示系统近年来发展迅速,成为表面展示系统新的研究热点之一。目前,该系统已应用于固定化酶、蛋白及病毒纯化、新型疫苗的研制等多个领域。该文将对该系统的组成及应用研究进展进行综述。

新型伊立替康衍生物ZBH-1208的体外抗肿瘤活性及机制研究

目的研究新型伊立替康衍生物ZBH-1208体外对肿瘤细胞的生长抑制作用并初步探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测分析ZBH-1208对人宫颈癌HeLa细胞、人非小细胞肺癌A549细胞、人小细胞肺癌NCI-H446细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人结肠癌SW1116细胞、人胃腺癌SGC-7901细胞、人肝癌SMMC-7721细胞及人胚肾293细胞的生长抑制作用,计算IC50值;流式细胞术检测ZBH-1208对肿瘤细胞周期及活化Caspase-3表达的影响。结果 ZBH-1208对肿瘤细胞的生长具有抑制作用,呈剂量-时间依赖关系。ZBH-1208作用各肿瘤细胞后IC50值在0.002μmol/L-0.265μmol/L之间,而对照组伊立替康(CPT-11)的IC50值在0.464μmol/L-52.111μmol/L之间,两者相比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,ZBH-1208诱导肿瘤细胞发生G2/M期阻滞,百分比到达90%以上;并且诱导活化形式Caspase-3表达增加。结论与CPT-11相比,新型化合物ZBH-1208具有高效低毒、起效快的特点,可使肿瘤细胞发生细胞周期阻滞,并诱导肿瘤细胞凋亡,具有进一步研究开发的价值。

“互联网+”环境下高校实验室安全管理模式研究

实验室安全是高校实验室建设和管理的重要环节,也是培养高科技创新型人才的重要保障。本文从完善实验室管理制度、网络化实验室安全教育、全程化监管危险化学品、强化实验室安全检查和文化建设等方面进行了研究与探索,从而提高实验室安全意识和管理水平,为师生营造出安全有保障的实验环境。

虫草素预防肥胖及通过ADORA1介导GH3细胞中泌乳素分泌研究

为了研究虫草素是否具有预防肥胖的作用及其可能机制,试验利用高脂饮食诱导肥胖型高脂血症大鼠动物模型,并给予高、中、低不同剂量(50、25、12.5mg/(kg·d))的虫草素,连续灌胃35d后观察大鼠体重、脂肪系数、血脂水平的变化;体外培养大鼠脑垂体瘤细胞(GH3),通过CCK8、Western blotting、ELISA等方法检测虫草素对GH3细胞的增殖毒性,以及腺苷受体A1(ADORA_1)的表达和对泌乳素分泌量的影响。体内试验结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠体重、脂肪系数和血脂水平(高密度脂蛋白(HDL)除外)均极显著升高(P<0.01);虫草素高、中、低各剂量组均能极显著或显著降低大鼠体重、脂肪系数及总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)水平(P<0.01;P<0.05),但HDL水平仅在虫草素高剂量组中显著升高(P<0.05),而虫草素中、低剂量组均无显著变化(P>0.05);体外试验结果显示,虫草素浓度低于25μg/mL时对GH3细胞增殖无影响;虫草素能够诱导GH3细胞ADORA_1表达升高;虫草素和ADORA_1激动剂(R-PIA)单独作用能显著或极显著降低泌乳素的分泌量(P<0.05;P<0.01),虫草素与ADORA_1抑制剂(DPCPX)联合作用时能够在一定程度上阻断虫草素对泌乳素的抑制作用。结果表明,虫草素具有预防肥胖和降血脂的作用,其可能的作用机制是通过诱导ADORA_1表达抑制泌乳素的分泌,该研究结果将为虫草素作为一种潜在的减肥降脂药物的开发提供一定依据。

重组毒素rCCK_(96-104)PE38靶向结肠癌生物特性研究

旨在原核表达并纯化新型重组毒素rCCK_(96-104)PE38,验证其对结肠癌细胞的靶向杀伤作用。使用基因扩增技术将反向编译的胆囊收缩素CCK_(96-104)与绿脓杆菌外毒素PE38融合,构建原核表达载体。利用Ni-NTA亲和层析进行纯化。通过结肠癌细胞体外杀伤实验以及结肠癌裸鼠模型的治疗验证rCCK_(96-104)PE38的抗肿瘤能力。结果显示,扩增出的rCCK_(96-104)PE38序列正确,成功利用pET-28a原核表达系统实现了活性表达。纯化后的重组蛋白能够在体外诱导结肠癌细胞凋亡,并能抑制裸鼠模型体内的肿瘤生长。成功制备高纯度、无标签的rCCK_(96-104)PE38重组免疫毒素,体内、体外实验证实其具有抑制结肠癌的能力。

磷霉素抑制α-溶血素的分泌并抑制其导致的巨噬细胞炎性因子激活机制研究

为了探讨磷霉素(fosfomycin,FOM)有效抑制α-溶血素的活性,并抑制巨噬细胞相关炎性因子激活的作用机制,研究采用抗菌药物敏感试验、溶血试验、蛋白免疫印迹试验等来确定FOM的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并检测亚抑制浓度的FOM对金黄色葡萄球菌α-溶血素产生的影响,以及在FOM和金黄色葡萄球菌作用下细胞水平的相关通路蛋白及炎性蛋白的表达情况。结果表明:α-溶血素是金黄色葡萄球菌的主要致病毒素,而FOM能够显著地抑制α-溶血素的活性。说明FOM通过抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素的表达,抑制了金黄色葡萄球菌引起的巨噬细胞炎性反应。

华支睾吸虫病在我国的流行及诊断方法研究进展

华支睾吸虫病是由华支睾吸虫引起的危害严重的鱼源性人兽共患寄生虫病,主要引起人和多种动物的肝胆病变,严重者可引起胆管上皮癌,因此华支睾吸虫被国际癌症署(IARC)归为第Ⅰ类生物性致癌因子。我国华支睾吸虫病主要流行于淡水资源丰富的地区,在我国27个省、市、自治区均有该病人体感染的报道。近年来,我国华支睾吸虫感染率呈上升趋势,且受威胁地区和人数不断增加。对该病的诊断和防控已刻不容缓,传统的病原学诊断方法存在着一定的局限性和弊端。免疫学方法和分子生物学技术的不断发展为该病的诊断提供了新的途径,今后在华支睾吸虫病的基础研究与防控中起到更加重要的作用。论文就华支睾吸虫病的流行特点及诊断方法研究进展进行综述,以期为华支睾吸虫病的研究提供参考。

胰岛素联合利奈唑胺抑制糖尿病细菌性肺炎的机制研究

试验旨在研究胰岛素联合利奈唑胺是否同时具有降糖、抗菌以及抑制α-溶血素活性,从而抑制糖尿病细菌性肺炎。本研究通过体外试验探讨了联合用药对高糖和金黄色葡萄球菌α-溶血素共同诱导的巨噬细胞炎症反应的作用,并探讨其机制。通过药物敏感试验测定最小抑菌浓度(MIC);通过检测D600 nm值绘制生长曲线来考察胰岛素、利奈唑胺单独或联合胰岛素的抗菌活性;通过溶血试验考察药物组合对α-溶血素活性的抑制效果;通过细胞毒性试验判定药物组合的体外安全性;借助Western blotting药物组合对炎症通路蛋白的作用。药物敏感性试验结果显示,胰岛素组未检测到金黄色葡萄球菌8325-4株和DU1090株的MIC值,利奈唑胺和胰岛素+利奈唑胺药物组合对这两种金黄色葡萄球菌的MIC均为0.5μg/mL;由生长曲线结果可知,胰岛素不抑制正常组和高糖组金黄色葡萄球菌的生长,但是在利奈唑胺组和胰岛素+利奈唑胺药物组合组,0.25~4μg/mL利奈唑胺可抑制金黄色葡萄球菌的生长;溶血试验结果显示,正常组和高糖组胰岛素均不抑制α-溶血素活性,0.25~4μg/mL利奈唑胺均可抑制α-溶血素活性;细胞毒性试验显示,正常组和高糖组,细胞存活率均大于88.038%,50 nmol/L胰岛素、0.25μg/mL利奈唑胺、50 nmol/L胰岛素+0.25μg/mL利奈唑胺药物组合可提高高糖诱导的MH-S细胞存活率;Western blotting结果显示,50 nmol/L胰岛素单独使用对高糖和α-溶血素共同诱导小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)中TLR2、MAPKs及NLRP3蛋白的表达水平没有抑制作用,而50 nmol/L胰岛素联合0.25μg/mL利奈唑胺可降低高糖和α-溶血素共同诱导MH-S细胞中上述蛋白的表达水平,其抑制作用比单独使用利奈唑胺时显著。综上所述,胰岛素联合利奈唑胺可通过降糖、抗菌和抑制α-溶血素活性的方式抑制小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应。

新城疫病毒为疫苗载体的研究进展

文章综述了新城疫病毒(NDV)的分子生物学特征、基因组结构,同时,重点介绍病毒载体的研究进展、反向遗传学、新城疫病毒载体的应用研究进展等,为新城疫病毒载体的后续研究奠定了基础。

鼻疽诊断与防治技术研究进展

鼻疽(glanders)是一种由鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei,B.mallei)引起,主要存在于单蹄兽中的高度传染性人兽共患病,在人类中发生病例较少。自然感染的人类病例呈现地方流行性,主要发生在接触过受感染单蹄兽的人群中。此外,实验室工作人员中也有病例报告。世界动物卫生组织(WOAH)一直在努力进行全球性的鼻疽根除工作,通过全面监测、扑杀受感染动物和采取严格进口措施,该病在北美、澳大利亚和欧洲大部分地区已被根除。然而,随着牲畜的全球性流动,导致世界其他地区的病例增加,非洲、亚洲、中东和南美洲仍然存在区域性流行。近些年来在中东和亚洲暴发的鼻疽疫情为鼻疽重新传入无疫病地区创造了可能。因此,鼻疽被归类为一种重新出现的疾病,再次威胁人类和动物健康。

囊型包虫病流行现状及犬抗成虫疫苗候选抗原研究进展

棘球蚴病/包虫病(cystic echinococcosis,CE)是一种全球性的人畜共患动物源性疾病,严重威胁人类和家畜的生命。由细粒棘球蚴引起的CE在我国高发流行,免疫接种是预防该病流行的最理想途径,在过去的几十年中,许多研究已经描述了该病的保护性候选抗原及其在终末宿主和中间宿主免疫中的作用。目前EG95重组蛋白疫苗效果最好,对中间宿主羊的保护力可达到96%~100%。但终末宿主犬作为传播的核心传染源,对其仍缺乏有效的防控手段,尤其是缺乏有效的接种疫苗,因此疫苗在犬身上的潜在应用是未来研究的重点。能抑制犬体内虫体发育并减少虫体在犬肠道内产卵量的疫苗研发将有望控制包虫病在流行地区的传播,大大加快该病的控制和消除。本研究从细粒棘球绦虫的生命周期、分子流行病学、地理分布以及终末宿主犬疫苗候选抗原等方面进行系统综述,旨在对CE的传播、未来发展方向和防治提供理论参考,为加速我国在CE终末宿主疫苗的研发进程和尽早应用于防控实践奠定基础。

红景天苷对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用

目的观察红景天苷对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用。方法大鼠随机分为假手术组,模型组,阳性药组,红景天苷低、中、高(7.5、15、30 mg/kg)剂量组,采用结扎冠状动脉左前降支(LAD)的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤(I/R)模型,手术前连续7 d腹腔注射给药,缺血60 min再灌注24 h后,观察红景天苷对血清AST、CK、LDH、SOD、NOS活性及MDA、NO水平的影响。分光光度法检测心肌组织caspase-3活性,测定心肌梗死面积,TUNEL法检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测相关信号通路关键蛋白表达。结果与模型组比较,红景天苷各剂量组能降低AST、CK、LDH、caspase-3活性和MDA水平,增加SOD、NOS活性和NO水平,抑制心肌细胞凋亡,提高心肌组织Nrf2蛋白表达和ERK磷酸化。结论红景天苷可降低缺血再灌注导致的心肌损伤,其机制可能与Nrf2激活和ERK磷酸化有关。

生物相关专业中《仪器分析实验课》的教学改革与实践

“仪器分析课程”是生物相关专业的一门重要基础课程,“仪器分析实验课”是该课程的重要组成部分。本文从更新仪器设备配置、优化实验教学内容、改革实验教学方法和完善考核评价体系等方面进行了探索与改革,取得了一定的成效。既提高了仪器分析实验课的教学质量,又培养了学生的创新思维能力和综合素质。

芴完全抗原和多克隆抗体制备与鉴定

以9-芴乙酸(fluorene-9-aceticacid,FLU)为原料,经活性酯法合成完全抗原FLU-牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和FLU-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),偶联产物通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及紫外扫描法鉴定。使用FLU-BSA足垫免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,间接酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测得多克隆抗体效价为51 200,间接竞争ELISA方法测得芴多克隆抗体的特异性,与荧蒽的交叉反应率为12%,与其他14种多环芳烃交叉反应不明显。

吡虫啉农药间接竞争ELISA检测方法的建立

为建立特异性检测吡虫啉的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA),利用能特异性识别吡虫啉的单克隆抗体,对ic-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结果表明:建立的ic-ELISA检测方法的灵敏度(ICI0)和检测范围(IC15~IC85)分别为0.06、0.08~3.26μg·L^-1。该方法对大米、梨、卷心菜3种样品加标回收率为83.61%~112.65%,与商品化试剂盒检测结果相比,其决定系数(R^2)为0.9531。这一研究建立的检测方法灵敏度高于大多数报道的检测方法,可满足我国规定的农产晶中吡虫啉最大残留限量标准检测要求,用于谷物、果蔬中吡虫啉残留定量检测。

2018—2019年山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查

为了解近年来山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及分子遗传变异情况。对2018—2019年山东不同地区493份疑似PRRSV样品进行RT-PCR检测,并对34份PRRSV阳性样品进行ORF 5基因核苷酸及GP5蛋白氨基酸序列分析比较。结果显示,2018年和2019年送检样品中PRRSV抗原阳性率分别为20.79%和24.09%;同源性对比及遗传进化分析,34株PRRSV主要属于谱系1和谱系8,且2018年和2019年均为谱系1中的PRRSV检出率最高,分别为50.00%和59.10%;氨基酸分析显示,34株PRRSV主要以点突变为主,未见插入突变,与不同谱系代表毒株相比,诱饵表位、中和表位、潜在毒力位点及N-糖基化位点均存在不同程度的变异。结果表明,NADC 30 like PRRSV可能已成为山东地区优势野毒毒株,且仍在不断发生变异。

玉米中伏马毒素B1、B2间接竞争酶联免疫吸附方法的建立

基于伏马毒素B1(fumonisin B1,FB1)单克隆抗体建立了间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA),用于玉米中伏马毒素的初步筛查。该方法优化了抗原包被浓度和单抗体稀释倍数、抗原包被条件、酶标二抗稀释倍数、底物作用时间。结果显示,线性检测范围为1.41~54.2ng/m L,最低检测限为24.5μg/kg,实测玉米样品加标回收率为89.36%~108.54%。交叉反应结果显示,与伏马毒素B2(fumonisin B2,FB2)交叉反应率为129.88%,与其他真菌毒素交叉反应均小于10%,该ic-ELISA方法可对玉米样品中的FB1与FB2总量进行初筛。

产纤维素酶的牛源纤维化微小菌分离鉴定及生物学特性分析

为研究牛等大型家畜肠道菌群的多样性及饲草性纤维素分解菌的背景,从东北及内蒙牛养殖主产区和屠宰加工区环境中采集大量动物毛发、粪便、肉样、血液样品,共计分离620株纤维化微小菌。对其中200株进行了纤维素酶等筛选,共79株具有较为明显的纤维素酶活性,其中1株从牛粪便中分离的纤维化微小菌(72-3)的初步分析结果表明,该菌纤维素酶活性较高,具有分泌纤维素酶、蛋白酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、几丁质酶、果胶酶、木聚糖酶等多种酶的能力。经基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪MALDI-TOF、法国梅里埃VITEK生化鉴定仪和16S rDNA鉴定,确定为放线菌门中的纤维化微小菌(Cellulosimicrobium sp.nov.),经小鼠急性毒性试验表明,该株菌具有低致病性,对动物是安全的。药敏试验结果显示,该菌对24种抗菌药中的20种耐药,仅对4种抗生素头孢哌酮、头孢曲松、磺胺异恶唑、阿奇霉素敏感。这一研究首次从家畜牛体内分离出纤维化微小菌,为家畜肠道内菌群多样性及纤维素消化等研究提供相关依据,也为后续纤维化微小菌的相关酶学性质开发利用奠定科学基础。

利用CRISPR/Cas9系统构建Prdx6基因敲除的RAW264.7细胞系

利用CRISPR/Cas9系统构建敲除Prdx6基因的RAW264.7小鼠巨噬细胞系,为探讨Prdx6与布鲁菌感染及胞内寄生的关系构建细胞模型。针对Prdx6基因的第1外显子设计sgRNA,构建重组表达载体Prdx6-pX459-sgRNA,将重组质粒转染RAW264.7细胞,嘌呤霉素初步筛选。单细胞接种并扩繁,提取基因组DNA,PCR及测序鉴定。结果表明,在敲除细胞株基因组中存在碱基缺失,导致移码突变。说明成功获得敲除Prdx6基因的RAW264.7细胞系。

2020年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学调查

为了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行及遗传变异情况,2020年对来自7个省的570份疑似PRRSV感染样品进行RT-PCR检测,并对60个PRRSV阳性样品进行ORF5基因测序及分析比较。RT-PCR检测结果显示,2020年送检样品中,PRRSV阳性检出率为23.68%(135/570),其中保育猪病料的阳性检出率最高,为32.24%(108/335)。同源性对比及遗传进化分析结果显示,60个PRRSV均为PRRSV2(美洲株),主要属于谱系1和谱系8,占比分别为51.67%和43.33%。氨基酸分析结果显示,60个PRRSV的GP5蛋白氨基酸以点突变为主,其中10个PRRSV的GP5蛋白氨基酸出现缺失突变,且非中和表位、中和表位、潜在毒力位点及N-糖基化位点均发生不同程度的变异。结果表明,保育猪群为PRRSV高发病群体,谱系1 PRRSV或已成为国内流行优势毒株,且PRRSV不断发生变异,这或许会影响现有疫苗的免疫保护效果。因此,针对PRRS需要综合防控,除选用安全有效的PRRSV弱毒活疫苗进行免疫外,加强猪场生物安全及饲养管理也极其重要。