H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化

为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4660 bp。将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白。

抗菌肽的免疫调节活性及其在动物生产中的应用

抗菌肽是生物体的免疫防御系统在受到外界病原体侵染时产生的一类生物非特异性免疫应答产物,具有阳离子性、分子量小、抗菌谱广、热稳定性好,且不易形成耐药性和药物残留等特点。本文主要对抗菌肽的免疫调节活性及其在动物生产中的应用研究进展进行了综述。

我国高校公立动物医院的重要性、发展困局及破解之辩

高校教学动物医院是兽医学科和动物医学专业、兽医硕(博)士教学、临床医疗的必备场所,是人才培养质量的基本保障,是办学水平的重要体现,同时也是我国动物疫病防控体系的重要组成部分,不可或缺。随着我国经济社会的快速发展,动物医院面临的环境和形势均发生了显著变化,现行制度和管理体系已不能助力新时代高校教学动物医院的生存和发展,亟待改革和创新。针对高校教学动物医院的发展困局,应当重新定位公立动物医院的性质和功能,改革和完善现有兽医师职称评价体系,提高动物医院的科学化管理水平。如此,高校动物医院才可能实现跨越发展。

吉林地区奶牛隐性乳腺炎流行病学与相关因素的调查分析

为更好探索吉林地区奶牛隐性乳腺炎发病规律,科学有效防控本地区奶牛隐性乳腺炎。调查了2019年1—12月吉林地区桦甸市等6个区域共计5826头奶牛,从区域、胎次、产奶量、养殖方式、泌乳阶段、挤奶方式及饲养管理水平方面展开调查,分离鉴定了吉林地区奶牛隐性乳腺炎的主要致病菌类型。结果显示:桦甸市发病率最高,为60.32%;永吉县发病率最低,为35.31%;2胎发病率最低,7胎及以上发病率明显升高;5—10月份以及12月份奶牛隐性乳腺炎发病率明显升高;年产奶量高于7000 kg奶牛隐性乳腺炎发病率明显升高;泌乳高峰期、泌乳中期奶牛隐性乳腺炎发病率明显升高;吉林地区奶牛隐性乳腺炎主要致病菌为葡萄球菌、大肠杆菌以及链球菌等,混合感染发病率更高。表明加强饲养管理、科学免疫、优化种群结构、规范及时诊疗疾病以及合理发挥奶牛生产性能才能保障奶牛养殖业健康、可持续发展。

聚焦价值,指引方向——《猪业科学》2023年第7期读后感

从2007年毕业至今,《猪业科学》伴我在养猪行业一路成长,从实践参考到教学辅助都离不开《猪业科学》杂志。从猪场一线生产、生产运营、技术服务,从育种、饲料、营养、饲养管理、环控到疾病预防,都有涉及,为系统学习提供了参考价值。我国东北地区生猪产业还有较大的发展空间,尤其可以在种业创新、育种、营养、猪病防控、猪冷冻精液技术、地方猪产业、种养结合等方面实现部分突破,但仍然有很长路要走,需要广大从业者奋发图强。

猪血凝性脑脊髓炎的研究现状

猪血凝性脑脊髓炎是由血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)感染引起猪的一种急性传染病,主要侵害乳猪。以呕吐、衰竭和脑脊髓炎为特征,死亡率很高。血清学检测证明猪感染HEV很普遍,可能是世界性的。作者对猪血凝性脑脊髓炎的病原、发病机理、临床症状、病理变化及常用的诊断技术和防制措施等几个方面的研究现状作了简要综述。

日粮中添加天蚕素抗菌肽对断奶仔猪生产性能、免疫性能及血清生化指标的影响

本试验旨在研究日粮中添加天蚕素抗菌肽对断奶仔猪生产性能、免疫性能及血清生化指标的影响。选用平均体重为(8.35±0.12)kg的杜×大×长三元杂交猪240头,采用单因子完全随机试验设计,分为4组,即对照组:基础日粮(玉米—豆粕型);抗生素组:基础日粮+140mg/kg吉他霉素(50%)+100mg/kg喹乙醇+600mg/kg硫酸抗敌素(10%);抗菌肽组:基础日粮+350mg/kg天蚕素抗菌肽;配伍组:基础日粮+250mg/kg天蚕素抗菌肽+50mg/kg喹乙醇+200mg/kg硫酸抗敌素(10%),每组6个重复,每个重复10头猪(公、母各半)。预试期7d,正试期34d。结果表明,与对照组相比,配伍组显著提高断奶仔猪平均日增重(P<0.05),抗生素组与抗菌肽组显著降低断奶仔猪平均日采食量(P<0.05),各试验组均可显著降低断奶仔猪料重比和腹泻率(P<0.05);抗菌肽组与配伍组可显著提高平均抗体阻断率及血清中IgG、IgA含量(P<0.05);抗菌肽组与配伍组可显著降低血清尿素氮和血糖含量(P<0.05),但可显著提高血清中总蛋白、白蛋白含量(P<0.05)。由此得出,在断奶仔猪日粮中添加适宜水平天蚕素抗菌肽可部分替代饲用抗生素,高剂量添加时可完全取代饲用抗生素。

兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank公布的兔出血热病毒（Rabbit haemorrhagic disease virus,RHDV）序列,设计了3条引物,对引物组合进行了筛选,优化PCR体系各反应条件,测定该方法的敏感性与特异性,并进行临床应用对比试验。结果显示,筛选出的引物组合能够特异性扩增331 bp产物,Mg2＋浓度1.0～1.5 mmol/L时扩增效果最好,退火温度在50℃～60℃之间扩增无差异性。该方法可以扩增102拷贝以上的模板,对兔轮状病毒与水泡性口炎病毒检测结果均为阴性;临床应用对比实验显示,与HA检测相比,该方法检出阳性率由66.7%提升至77.8%。本研究建立的RT-PCR诊断方法具有特异、灵敏、快速等特点,能够用于该病的临床检测,为防控该病提供了技术保障。

欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪病理学特征及其组织内病毒分布

为了研究仔猪感染欧洲型猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病理学特征及其病毒在组织内的分布特点,用辽宁分离毒株EU-PRRSV LNEU12接种健康仔猪14d后,扑杀所有仔猪,观察病理学特征并采用免疫组织化学方法分析组织内抗原分布情况。结果表明,欧洲型PRRS主要的病理变化是多发性间质性肺炎和淋巴结炎;病毒主要分布在肺脏、淋巴结、脾脏和脑组织中,其次为肝脏和肾脏。证明PRRS典型病理变化的产生与PRRSV分布情况具有明显的相关性。

猪链球菌Sao-M和Ide_(Ssuis)蛋白的原核表达与反应原性分析

通过原核表达系统表达猪链球菌Sao-M和Ide_(Ssuis)基因,并分析其反应原性。根据GenBank数据库发表的序列,利用分子生物学软件设计了2对特异性引物,通过PCR扩增Sao-M和Ide_(Ssuis)基因,经测序分析后,分别克隆到pET28a(+)和pMAL-c2X,构建重组表达质粒pET28a:Sao-M和p MAL-c2X:Ide_(Ssuis),然后将鉴定为阳性的重组质粒分别转入宿主菌BL21和Rosetta2中用IPTG进行诱导表达,通过免疫印迹进行鉴定。实验表明,两种重组蛋白在原核系统中获得了高效的表达,并能与相应的阳性抗血清发生特异性反应。本研究为进一步探究Sao-M和Ide_(Ssuis)蛋白生物学功能及其在猪链球菌致病机制上的作用提供了依据。

貉源致病性大肠杆菌HPI毒力岛相关基因检测及序列分析(英文)

[目的]探索大肠杆菌导致仔貉腹泻的发病机理。[方法]对分离鉴定的大肠杆菌进行了血清型鉴定,采用PCR方法检测HPI毒力岛基因irp2和fyuA,扩增产物进行序列测定。[结果]分离到2株貉源大肠杆菌,血清型分别为O23和O20,2株菌均检测到HPI毒力岛irp2基因(301bp)和fyuA基因(953bp);2株菌irp2基因与GenBank中的大肠杆菌irp2基因的同源性为98.5%～99.2%,2株菌间irp2基因同源性为99.3%;2株菌fyuA基因与GenBank中的fyuA基因序列的同源性为98.9%～100%,2株菌间fyuA基因同源性为98.9%。[结论]本试验结果为大肠杆菌导致仔貉腹泻的发病机理提供了科学的实验数据,为今后该疾病的预防、诊断和治疗提供了重要参考。

杂交野猪猪繁殖与呼吸综合征病毒分离及其ORF6、ORF7基因的序列分析

试验旨在研究杂交野猪猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)辽宁分离株的遗传变异情况及分子生物学特征。用Marc-145细胞从辽宁某杂交野猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)病猪血液中分离到1株病毒,该分离毒株经Marc-145细胞6次传代后出现稳定的细胞病变,采用RT-PCR方法对分离病毒进行ORF6和ORF7基因的扩增、克隆和测序,并与已知序列毒株的相应片段进行同源性比对。结果表明,分离毒株的ORF6、ORF7基因与国内外美洲型毒株的核苷酸同源性分别为96.0%~100.0%、94.5%~99.4%;氨基酸同源性分别为89.6%~100.0%、87.3%~98.7%;与欧洲型代表毒株LV的ORF6、ORF7基因差异较大,核苷酸同源性分别为70.4%、70.1%,氨基酸同源性分别为48.8%、49.7%。推测辽宁杂交野猪体内分离毒株在基因型上属于美洲型毒株。

牛超数排卵技术研究进展

超数排卵是获得牛胚胎移植研究与应用所需可移植胚胎的重要途径。由于影响供体牛超数排卵的因素众多、复杂,几十年来供体牛每次超数排卵所获得的平均可移植胚胎数几乎没有增加,因此,如何提高超排效果成为研究热点。综述了近年来牛超排的最新研究进展,以期为牛超排效果的改善和胚胎移植效率的提高提供参考。

2017年山东地区鸡饲料及原料中AFB_1、DON和ZEN污染情况调查

应用高效液相色谱串联质谱法对山东地区肉鸡和蛋鸡配合饲料及玉米、麸皮、豆粕、花生粕、棉籽粕、DDGS和玉米蛋白粉中黄曲霉毒素B1(AFB1)、呕吐毒素(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)的含量进行检测。结果发现:434份样品中AFB1、DON和ZEN检出率分别为55.30%、81.57%和92.17%,超标率分别为14.98%、1.38%和2.30%,平均含量分别是32.72μg/kg、575.55μg/kg和122.81μg/kg。说明2017年山东地区鸡饲料及原料中霉菌毒素污染存在广泛性、水平较高和超标较严重的特点,其中AFB1超标严重,DON和ZEN污染率高。

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测猪伪狂犬病毒gE基因缺失病毒株方法的建立

为建立一种快速、特异、敏感的方法检测伪狂犬病毒(PRV)gE基因缺失病毒株,本研究根据PRV野毒SA株的gD和gE基因序列设计引物,建立了SYBR Green I实时定量PCR方法,并对反应条件进行优化,建立了检测PRV gE基因缺失病毒株的SYBR Green I实时定量PCR方法,其灵敏度比传统PCR方法的灵敏度高100倍,前者可达17.5拷贝/μL,后者为1.75×103拷贝/μL。该方法可以检测出PRV,但PCV2、PPV、CSFV、PRRSV均为阴性,具有良好的特异性和重复性。该方法可以用于病原学监测、流行病学调查及定量研究。

包被γ-氨基丁酸及其复合矿物质添加剂对西门塔尔肉牛生长性能和血液生化指标的影响

研究包被γ-氨基丁酸(GABA)和包被γ-氨基丁酸(GABA)复合微量元素添加剂对生长期肉牛生长性能及血液生化指标的影响。选择12月龄体重在407.22kg±21.36kg的西门塔尔肉牛45头,随机分为3组(对照组,试验1组,试验2组),对照组饲喂基础日粮,试验组在饲喂基础日粮的基础上饲喂包被γ-氨基丁酸(GABA)和包被γ-氨基丁酸(GABA)复合矿物质微量元素。结果表明,平均日增重试验1组高于对照组,试验2组高于试验1组,极显著高于对照组(P<0.01)。碱性磷酸酶(ALP)的浓度试验组与对照组相比,总体呈上升趋势,在第20、30、40、50、60天时试验2组显著高于对照组(P<0.05)。血清中总蛋白(TP)的含量在第20天时试验1组极显著高于对照组(P<0.01),试验2组显著高于对照组(P<0.05);在第40天时试验1组显著高于对照组(P<0.05)。免疫球蛋白G(IgG)的浓度在第20、30天时,试验1组极显著高于对照组(P<0.01),试验2组显著高于对照组(P<0.05);在第40、50、60天时,试验1组显著高于对照组(P<0.05);试验2组显著高于对照组(P<0.05)。结果提示,添加包被γ-氨基丁酸(GABA)和包被γ-氨基丁酸(GABA)复合微量元素可以提高肉牛的体重,提高肉牛机体的免疫力,减少疾病的发生,且包被γ-氨基丁酸(GABA)复合微量元素的作用效果要优于γ-氨基丁酸(GABA)。

一株牛源金黄色葡萄球菌噬菌体VB-SavM-JYL02生物学特性及基因组学研究

为了解金黄色葡萄球菌(S.aureus)噬菌体生物学及其基因组学特性,本研究利用牛源S.aureus从污水中分离得到一株烈性噬菌体,命名为VB-SavM-JYL02。形态学分析显示该噬菌体属于肌尾病毒科(Myoviridae),基因组全长141384 bp,编码218个开放阅读框,未发现其与细菌毒力、抗生素抗性以及溶原相关的基因。生物学特性研究结果显示,该噬菌体最佳感染复数为0.01,潜伏期20 min,爆发期约为20 min,裂解周期约40 min,表明该噬菌体具有很强的杀菌效率。此外,噬菌体VB-SavM-JYL02具有较宽的宿主谱(64%)。噬菌体全基因组同源性比对分析显示VB-SavM-JYL02与已报道的9个噬菌体存在极其相似的基因模块排布顺序。这些结果表明该噬菌体可能具有用于S.aureus感染治疗的潜力。本研究为噬菌体进一步用于奶牛乳腺炎的治疗研究奠定了基础。

抗κ-酪蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定

试验为制备抗κ-酪蛋白单克隆抗体并对其进行特性鉴定,采用足垫免疫κ-酪蛋白的方法刺激BALB/c小鼠产生免疫应答,将小鼠腘淋巴结细胞与骨髓瘤细胞在PEG诱导下进行融合,通过克隆化培养获得了能稳定分泌抗κ-酪蛋白抗体的杂交瘤细胞株,并利用Protein G亲和层析柱纯化腹水获得了单克隆抗体。试验获得了3株杂交瘤细胞株:1C4、3G3、3E6,所分泌的抗体亚类均为IgG1,其中3G3与3E6抗原识别表位不同,1C4与3E6抗原识别表位相近,1C4株腹水纯化后效价为1.28×106,其亲和力常数为2.89×108 mol/L。试验制备出了亲和力较好的抗κ-酪蛋白单克隆抗体,为牛奶酪蛋白的快速检测奠定了基础。

猪肺源致病性多重耐药大肠杆菌的分离鉴定和药敏分析

河南省某养殖场83例仔猪出现厌食、呼吸困难等症状,并伴随不同程度的腹泻,死亡率约为4.5%。为确定该养殖场猪只感染的病原菌,本试验于无菌条件下对感染猪只肺脏进行病原菌分离、药敏试验和16S rRNA序列分析。结果显示,本试验分离的病原菌为革兰阴性短杆菌,在麦康凯鉴别培养基上菌落呈粉红色圆形,生化反应显示其可发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖和麦芽糖;16S rRNA序列分析显示,病原菌与致病性大肠杆菌同源性为99%;药敏试验显示,该菌对苯唑西林、头孢噻吩、头孢吡肟、链霉素等23种抗菌药均有较强耐药性。本试验结果为肺源多重耐药大肠杆菌的鉴定和临床用药提供了有价值的数据支持。

鸡IL-2基因的克隆及GST-chIL2融合蛋白的表达

根据Sundick等发表的鸡IL-2基因(chIL2)序列设计合成特异性引物,用RT-PCR从ConA诱导的鸡脾淋巴细胞扩增出450 bp的目的片段,酶切鉴定及序列测定结果表明为鸡IL-2基因。该基因包括鸡IL-2基因的全部开放阅读框,编码142个氨基酸组成的蛋白质,与GenBank鸡IL-2基因相比,在编码氨基酸的49位有一个氨基酸缺失;而与Broiler、SC、Chenren和Xiaoshan鸡在编码氨基酸上完全一致,具有较近的亲缘关系;与Kestrel来航鸡、来航SPF鸡、Obese、Silky和Xianju鸡等有1-4个氨基酸的差异;与火鸡和鹌鹑的氨基酸同源性分别为69.9%和59.4%。将克隆到的基因插入到融合蛋白原核表达载体pGEX-6p-1中,得到重组表达质粒pGEX-IL2。将此重组质粒转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,表达出了大小约为40 ku的GST-chIL2融合蛋白,其中GST部分为26 ku,鸡IL-2为14 ku,与预期的鸡IL-2成熟蛋白大小一致。