NV蛋白酶冻干工艺的相关技术参数

目的:研究NV蛋白酶冻干流程,为冻干工艺的确定提供相关技术参数。方法:制备NV蛋白酶溶液,测定不同温度、不同pH值条件下NV蛋白酶的圆二色谱;以偶氮酪蛋白方法检测NV蛋白酶的活性;采用双阶段冻干法冻干NV蛋白酶;测定Tween 80作为NV蛋白酶冻干变性防护剂的权宜浓度和权宜冷冻速率。结果:NV蛋白酶复溶活性和溶解度随平均冷冻速率升高而降低。Tween 80作为NV蛋白酶冻干变性防护剂平衡NV蛋白酶复溶活性和溶解度的权宜浓度为0.01%。降低冻干药品生产时间成本的权宜冷冻速率参数为2.0℃·min-1。结论:NV蛋白酶具有一定的抵抗冻干过程中温度和pH值降低的能力,平均冷冻速率影响NV蛋白酶复溶活性和溶解度;0.01%Tween 80和2.0℃·min-1平均冷冻速率是NV蛋白酶生产性冻干的有效技术选择。

BMP4重组蛋白在毕赤酵母中表达载体构建与纯化分析

以骨形态发生蛋白(BMP4)为研究对象,将BMP4基因与IgG-Fc基因结合,改造成为BMP4-Fc融合蛋白,经巴斯德毕赤酵母诱导表达和DEAE阴离子纯化获得目的蛋白,并利用间充质干细胞验证了其生理活性.结果表明:使用巴斯德毕赤酵母能够很好表达BMP4-Fc融合蛋白,通过提纯条件,成功分离纯化BMP4-Fc融合蛋白,其生理活性达到商业化纯品水平,为BMP4生产与开发提供了新路径.