小鼠体内RU486诱导的及肝脏特异性的IL-12基因表达

目的研究含有RU486调控系统质粒的可诱导能力。方法通过水流动力学注射的方法，将含有RU486调控系统、肝脏特异性启动子以及转基因IL-12的质粒pRS22注射到小鼠体内，质粒注射后不同时间点腹腔注射RU486。通过ELISA试剂盒检测血清中IL-12表达水平，通过PCR、RT-PCR以及免疫组织化学染色的方法，在DNA、RNA及蛋白质水平测试质粒pRS22在小鼠体内的可诱导性表达。结果为了确定质粒pRS22活性的持续时间，在水流动力学注射10μg质粒后，每7天给小鼠注射1次RU486（250μg／kg），发现尽管每次诱导后血清中IL-12的水平逐渐下降，但直到质粒注射后第15周，仍然可以被诱导表达。为了测试不同诱导方式对IL-12表达趋势的影响，5μg pRS22被注射到小鼠体内后，在6d内分别每天或每两天给小鼠注射1次RU486。结果每两天诱导1次后IL-12表达呈波浪形，而每天诱导1次则可获得持续的IL-12表达。PCR和RT-PCR结果显示，无论有无RU486诱导，都能在肝脏检测到pRS22质粒及GLp65调节子mRNA的表达，但是仅能够在接受RU486的小鼠肝脏中观察到IL-12p35亚基mRNA表达。免疫组织化学染色结果提示，IL-12蛋白只有在RU486作用下才会在肝细胞中表达。结论在肝脏特异性启动子TTR控制下，RU486调控系统能够在时间和空间上精确控制转基因IL-12的表达。