短期糖尿病大鼠睾丸的细胞学变化

目的:探讨糖尿病发病初期大鼠发生性与生殖功能障碍的细胞学机制。方法:通过给成龄雄性大鼠腹腔注射链脲菌素制成糖尿病动物模型,分别观察1d、3d、5d、7d、14d。观察期满后断头处死,取睾丸。应用常规组织学方法观察睾丸组织形态的改变;应用流式细胞分析术检测睾丸间质细胞、支持细胞及各级生精细胞的细胞周期的改变。结果:睾丸间质细胞及生精细胞的形态、数目从致病d7开始有明显变化,支持细胞的形态无明显变化;睾丸中各类细胞在高糖环境下24h即发生增殖减慢、细胞滞留在G1期、DNA合成减少等改变。结论:糖尿病大鼠生殖功能障碍与睾丸间质细胞、生精细胞的形态、数目变化及睾丸各类细胞的增殖改变有关。

中草药远志对实验性小鼠雄性生殖细胞遗传物质损伤的保护作用

目的 :观察中草药远志对小鼠雄性生殖细胞遗传物质损伤的保护作用。方法 :采用小鼠精原细胞姐妹染色单体互换实验。结果 :铅能诱发小鼠精原细胞姐妹染色单体互换 ,而在腹腔注射铅的同时给予远志 ,可使铅诱发的小鼠精原细胞姐妹染色单体互换频率明显降低。结论 :远志对雄性生殖细胞遗传物质具有保护作用 。

精液白细胞与精子运动参数关系的研究

目的:探讨精液白细胞与精子运动参数关系。方法:234例不育患者,采用精子自动分析系统分析精子运动参数,采用联苯胺法分析精液白细胞。结果:白细胞精子症组精子运动参数VCL、VSL、VAP均显著低于非白细胞精子症组,两组比较差异有显著性(P<0.001,P<0.001,P<0.001);白细胞精子症组MAD、BCF显著高于非细胞精子症,两组比较差异亦有显著性(P<0.001,P<0.001)。精液白细胞与VCL、VSL、VAP均呈显著负相关(r=-0.368,P<0.001;r=-0.362,P<0.001;r=-0.359,P<0.001),与MAD、BCF均呈显著正相关(r=0.134;P<0.05,r=0.210,P<0.001)。结论:精液白细胞可影响精子运动参数。

精液白细胞与男性不育的关系

目的:探讨精液白细胞与男性不育的关系。方法:检测3867例不育者精液白细胞,观察其与精液常规分析参数、UU感染、AsAb和精浆果糖含量、α-糖苷酶活性、酸性磷酸酶活性的关系。结果:3867例不育者精液白细胞>5个/HP为36.93%。白细胞>5个/HP组精液量、精子密度、精子活动率、a,b级活力精子率、顶体酶活性均明显低于精液白细胞≤5个/HP组(P<0.001,P<0.05)。精液白细胞>5个/HP组畸形精子率、精液粘度增高率和精液UU阳性率明显高于白细胞≤5个/HP组(P<0.001)。两组比较果糖含量和α-糖苷酶活性均没有明显差异,两组酸性磷酸酶活性有差异(P<0.05)。结论:精液白细胞可影响精液质量。

中草药远志对环磷酰胺所致小鼠遗传物质损伤的保护作用和淋巴细胞功能的增强作用

目的:探讨中草药远志抗突变作用和对脾T淋巴细胞增殖的影响。方法:小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验:30只小鼠随机分为6组(每组5只),即阴性对照组(NS)、环磷酰胺(CP)组(30 mg·kg-1)及远志抗诱变组(远志0．5、1．0、2．0、4．0 g·kg-1+CP 30 mg·kg-1),按改良方法制片检测微核频率;淋巴细胞转化实验:24只小鼠随机分为4组(每组6只),即生理盐水组、CP组(30 mg·kg-1)、远志水煎液组 (2．0 g·kg-1)及远志水煎液+CP组(2．0 g·kg-1远志+CP 30 mg·kg-1),采用MTT法计算刺激指数(SI)。结果:阴性对照组、远志各剂量组的微核率低于CP组(P<0．05);生理盐水组、远志水煎液组、远志水煎液 +CP组、CP组的S1分别为2．11±0．13、2．37±0．18、1．97±0．06和1．34±0．19;远志水煎液组的SI与生理盐水组的SI比较差异有显著性(P<0．05);远志水煎液+CP组SI与CP组比较差异有显著性(P<0．05)。结论:远志具有抗诱变作用,即对遗传物质具有保护作用;远志能提高昆明种小鼠脾细胞对ConA的反应性, 并能改善由CP所致的小鼠脾细胞ConA反应性降低,即远志能提高淋巴细胞功能。

活性氧、白细胞和精子凋亡关系的探讨

目的探讨活性氧与精子凋亡的相关性及其影响。方法分析21例男性不育患者样本,活性氧含量采用分光光度比色法检测,瑞-姬染色检测精子凋亡率,采用Percoll法进行精子优选。结果本底水平活性氧含量、白细胞受激发后产生活性氧含量、白细胞和精子受激发后产生活性氧含量与精子凋亡率均有显著正相关性(P<0.05,P<0.01);Percoll优选后,加入H2O2组精子凋亡率显著高于对照组(P<0.001),且0.2mM过氧化氢组精子凋亡率均高于相应的0.02mM过氧化氢组(P<0.05)。结论精子凋亡率与ROS浓度有正相关关系,外加H2O2增高,精子凋亡率增高。

可溶性血管内皮生长因子受体2片段的表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

目的探讨可溶性血管内皮生长因子受体2（sKDR）抑制血管内皮细胞增殖及在血管生成中的作用。方法提取脐静脉内皮细胞（HUVEC）总RNA,扩增KDR基因膜外1~4结构域,构建原核表达载体pQE40-KDR,转化E.coli M15,经IPTG诱导表达,镍离子柱亲和层析纯化后复性,用Western blot检测sKDR蛋白的表达,MTT比色法和鸡胚尿囊膜（CAM）试验分别检测其对HUVEC增殖的影响及其对血管生成的作用。结果经RT-PCR扩增得到了1150 bp左右的sKDR片段,并在pQE40原核表达系统中表达了sKDR蛋白,以包涵体形式存在。纯化后蛋白电泳呈现相对分子质量50000左右的单一条带,纯化蛋白占总蛋白的98%,蛋白含量为80μg/ml。Western blot证实其为重组sKDR蛋白。MTT检测结果显示,sKDR可抑制血管内皮生长因子（VEGF）刺激的HUVEC增殖,并阻滞VEGF诱导的CAM血管增生。结论已成功构建sKDR原核表达载体,并在大肠杆菌M15中获得表达,纯化的sKDR片段具有与VEGF结合的生物学功能,有望成为基因治疗肿瘤血管形成的理想靶点。

葛根对中国仓鼠肺细胞的毒性作用

目的:观察葛根对中国仓鼠肺细胞(CHL)形态学、细胞增殖活性及细胞相对存活率的影响。方法:以葛根为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的葛根在不同作用时间对CHL相对存活率的影响。结果:不同浓度的葛根(12.50、50.00、100.00、200.00和400.00 mg.L-1)作用一定时间后,CHL存活率下降,细胞增殖明显受到抑制并出现细胞脱落,呈现出时间-剂量效应关系。接触受试物48 h后,细胞生长半数抑制浓度(IC50)为282.00 mg.L-1。结论:葛根可以抑制CHL生长,降低线粒体代谢活性。

精液白细胞与形态正常精子百分率关系研究

目的:探讨精液白细胞对形态正常精子百分率的影响。方法:按WHO精液参数检测方法计数精液白细胞,采用精子形态检测系统下人工修正方法进行精子形态分析。结果:精子形态异常组精液白细胞>5个/HP百分率明显高于精子形态正常组精液白细胞>5个/HP百分率,两组间比较差异显著(P<0·05)。白细胞>5个/HP组形态正常精子百分率明显低于白细胞<5个/HP组形态正常精子百分率(P<0·05)。白细胞>5个/HP组小头精子、锥形头精子百分率明显高于白细胞<5个/HP组(P<0·05)。精液白细胞计数与形态正常精子百分率呈显著负相关;与大头精子、小头精子、锥形头精子呈显著正相关;与梨形头精子、其它畸形精子呈显著负相关。结论:精液白细胞可影响精子形态,小头精子数和锥形头精子数显著增加。

益母草对雄性小鼠生殖细胞的遗传毒性

目的 :观察中草药益母草对雄性小鼠生殖细胞的遗传毒性。方法 :采用小鼠精子畸形试验、精原细胞姐妹染色单体互换试验和小鼠精子非程序 DNA合成试验。结果 :益母草各剂量组所诱导的小鼠精子畸形频率和精原细胞姐妹染色单体互换频率与正常对照组比较 ,差异无显著性( P>0 .0 5 ) ,益母草不能诱导小鼠精子非程序 DNA合成。结论 :益母草对雄性小鼠生殖细胞无遗传毒性。

Percoll离心联合多步差异黏附法分离、纯化人睾丸精原细胞

目的探讨分离、纯化人睾丸精原细胞的有效方法。方法用联合二步酶消化法获得人生殖细胞悬液,经Percoll不连续密度梯度离心,再用间隔不同时间(2、3、4h),不同次数(1、2次)差异黏附法纯化人精原细胞。结果未经纯化的精原细胞纯度为48.5%,间隔2、3、4h纯化1次所获得的精原细胞纯度分别为51.3%、59.0%、56.4%,纯度均高于未经纯化的纯度;间隔2、3、4h连续纯化2次所获精原细胞纯度分别为:57.7%、67.8%、57.8%,以间隔3h纯度最高;与间隔同样时间纯化1次精原细胞纯度相比,间隔2、3h纯化2次高于1次,间隔4h纯化2次与1次无明显差别。结论Percoll不连续密度梯度离心联合不同时间间隔差异黏附法可以有效地对人精原细胞进行分离和纯化;间隔2、3h,纯化2次高于1次;连续纯化2次时,间隔3h效果最佳。

老龄兔骨髓间充质干细胞体外培养影响因素的研究

目的 研究体外培养老龄兔骨髓间充质干细胞（MSCs）的影响因素。方法 以密度梯度离心技术及贴壁筛选法相结合，在体外分离检测MSCs表面CD29、CD34、CD44、CD45的表达；诱导分化反向证明部分细胞可分化为成骨细胞及脂肪细胞，具有分化潜能，鉴定该细胞群为干细胞。细胞记数法计算MSCs倍增时间；观察供体自然老龄情况下。不同换液时间、不同血清浓度、不同种植密度等因素对MSCs生长的影响。结果 MSCs CD29和CD44表达阳性，不表达造血干细胞标志CD34和CD45。高密度接种（3×10^6-4×10^6个／cm^2），低浓度（8％-10％）血清的低糖DMEM培养，在体外可保持MSCs未分化增殖状态，并获得纯度较高同源性较好的干细胞群，高浓度血清（20％）并不加速细胞生长，而促进分化。结论 MSCs具有体外多分化潜能。老龄供体骨髓中MSCs的生长、增殖特性受不同换液时间、不同血清浓度及不同种植密度等因素的影响。

生长因子对人精原干细胞体外存活和增殖的影响

目的:探讨3种生长因子——干细胞因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)和碱性成纤维细胞生长因子(bF-GF)对精原干细胞(SSCs)体外存活及增殖的作用。方法:在培养液中加入不同浓度的SCF、LIF和bFGF,各生长因子均设浓度为0、5、10、20μg/L4个浓度组,每种生长因子不同浓度1式3份,每隔8～12h观察细胞的体外存活及增殖情况。应用光镜、电镜观察SSCs的形态结构特点。结果:培养液中加入不同浓度的SCF、LIF及bFGF后,SSCs的存活时间均比对照组有所延长,组间比较差异有显著性(P<0.05)。结论:生长因子SCF、LIF和bF-GF等可促进SSCs体外存活及增殖。

氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和诱导凋亡的影响,为其抗肿瘤研究提供理论依据。方法:将HL-60细胞分为不同浓度氟伐他汀处理组(终浓度分别为0、0.5、5.0、10.0和20.0μmol.L-1),对照组不加氟伐他汀,阳性药对照组加入全反式维甲酸(ATRA,终浓度为10μmol.L-1),计数活细胞数目检测细胞增殖情况;用CCK-8试剂盒检测HL-60细胞生长抑制率;用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果:与对照组比较,氟伐他汀0.5、5.0、10.0和20.0μmol.L-1处理1～4d的HL-60细胞,活细胞数有不同程度减少(P<0.01),且随着氟伐他汀剂量的增加和作用时间的延长,活细胞数明显减少。用氟伐他汀处理HL-60细胞2～72h后,细胞生长抑制率随着氟伐他汀剂量的增加和处理时间的延长逐渐升高,其中氟伐他汀10.0和20.0μmol.L-1处理48和72h后,细胞生长抑制率明显高于同浓度氟伐他汀作用2h后(P<0.01)。流式细胞仪分析结果表明,与对照组比较,氟伐他汀处理HL-60细胞48h后,G0/G1期细胞百分比明显上升(P<0.05),S期细胞百分比明显下降及细胞凋亡率增加(P<0.01)。当用甲羟戊酸和氟伐他汀共同处理HL-60细胞后,可逆转氟伐他汀的上述作用(G0/G1期细胞56.11%,S期细胞37.12%)。结论:氟伐他汀能抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其作用可能是通过甲羟戊酸途径介导的。

白细胞精子症的研究进展

白细胞精子症是男性不育的一个重要原因,目前对精液白细胞的分布、来源和作用尚完全不清楚。精液中增多的白细胞及其产物可对精子功能和精液质量产生影响,其中活性氧(ROS)的增加与男性不育关系密切。白细胞精子症的治疗和预防对改善精液质量有一定作用。

精液白细胞与精子形态学参数的关系

目的:探讨精液白细胞与精子形态学参数之间关系。方法:对278例不育患者采用精子形态检测系统下人工修正方法进行精子形态分析,采用精液白细胞计数法检测精液白细胞,采用改良巴氏染色法分析精子顶体形态。结果:白细胞精子症组形态正常精子率和顶体完整率均低于非白细胞精子症组(P<0．05);形态正常精子率与精液白细胞浓度呈负相关关系(r=-0．243,P<0．01);顶体完整率与精液白细胞浓度亦呈显著负相关关系(r=-0．248,P<0．01)。结论:精液白细胞增多可能影响精子的形态和顶体的完整。

老龄兔骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的最佳时间

目的:探讨老龄兔骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗心肌梗死的最佳时间,为细胞移植治疗心肌细胞坏死性相关疾病提供前期的实验依据。方法:选择月龄大于或等于36个月的新西兰大耳白兔30只(36月龄兔相当人60岁左右,为老龄兔),建立心肌梗死模型,将造模成功兔随机分为6组(空白对照组、1 d组、1周组、2周组、3周组、4周组),每组5只;取标记后的MSCs细胞(密度为2×107.mL-1)200μL,分别多点注射于心肌梗死后1 d、1周、2周、3周、4周的心脏梗死区,空白对照组注射等量生理盐水。8周后进行心功能参数、心脏房室瓣血流率及血液动力学指标检测。结果:与对照组比较,1 d移植组心功能参数、心脏房室瓣血流率及血液动力学指标高于对照组(P<0.05);1周、2周及3周移植组心功能参数、心脏房室瓣血流率及血液动力学指标明显高于对照组(P<0.01);4周移植组与对照组比较心功能虽有提高,但差异无显著性(P>0.05);1周、2周及3周移植组心功能参数、心脏房室瓣血流率及血液动力学指标高于1 d移植组(P<0.05);1周、2周、3周三组之间比较差异无显著性(P>0.05)。结论:心肌梗死后不同时间进行相同剂量细胞移植时,1 d^3周行MSCs细胞移植治疗均能改善心功能,以第1~3周移植效果最佳。

短期糖尿病雄鼠前列腺细胞凋亡的动态研究

目的:探讨短期糖尿病雄鼠前列腺细胞凋亡状态的动态变化。方法:通过链脲菌素制成糖尿病鼠模型,应用常规组织学方法,原位末端转移酶标记技术(TUNEL),流式细胞术分别研究1d(D1组),3d(D3组),5d(D5组),7d(D7组),和14d(D14组)短期糖尿病腹侧前列腺细胞凋亡和细胞周期的变化。结果:D5组、D7组及D14组前列腺上皮细胞具有明显的凋亡形态学改变,TUNEL阳性细胞百分率显著高于对照组,D3组TUNEL阳性细胞百分率显著低于对照组(C组)D3组、D5组G_0/G_1期细胞所占比例显著低于对照组,D14组S期细胞所占比例显著高于对照组,D14组G_2/M期细胞所占比例显著低于C组,D3组凋亡细胞比例显著低于C组,D7组及D14组凋亡细胞比例显著高于对照组。结论:糖尿病在短期内诱导雄鼠前列腺细胞周期改变及细胞凋亡。

益母草对小鼠雄性生殖细胞遗传损伤的影响

目的 :观察中草药益母草对醋酸铅引起的小鼠雄性生殖细胞遗传损伤的影响。方法 :采用小鼠精原细胞姐妹染色单体交换实验。结果 :益母草本身不能诱发小鼠精原细胞姐妹染色单体交换 ,但在与醋酸铅一同给药时 ,可使醋酸铅所诱发的小鼠精原细胞姐妹染色单体交换频率明显降低。结论 :益母草对小鼠雄性生殖细胞遗传物质具有保护作用 ,即抗诱变作用。

微量元素作为甲醛损伤生物标志物的水平分析

目的:通过观测甲醛对小鼠肝脏、全血微量元素含量的影响,探讨甲醛损伤的生物标志物。方法:80只健康昆明小鼠随机分为对照组及甲醛染毒低剂量组(1/40LD50)、中剂量组(1/20LD50)和高剂量组(1/10LD50),每组20只,采用吸入染毒方式,每天2h,连续染毒3及6周后断头处死,分别测定小鼠肝脏和全血Cu、Fe、Zn、Mn的含量。结果:染毒3周高剂量组Fe、Zn、Mn含量及染毒6周中、高剂量组小鼠肝脏Fe、Zn含量明显低于对照组(P<0.05),染毒3周高剂量组小鼠全血Mn、Zn含量明显低于对照组(P<0.05),染毒6周后中、高剂量组小鼠全血Fe、Zn明显低于对照组(P<0.05);染毒不同时间的各剂量组小鼠肝脏及全血Cu含量均无显著变化(P>0.05)。结论:甲醛可引起小鼠肝脏及全血Fe、Zn及Mn含量降低,Mn、Zn及Fe可作为甲醛损伤的标志物。