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检测水痘-带状疱疹病毒糖蛋白水平双抗体夹心ELISA法的建立和验证
被引量:
3
1
作者
朱琨莹
郭世杰
+7 位作者
袁若森
潘东
张春
陈晓旭
衣延明
杨阳
郑柏松
姜春来
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期1315-1323,共9页
目的:建立可快速检测水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白抗原水平的双抗体夹心ELISA法,并验证其特异性、线性、准确性和精密性。方法:采用抗VZV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测VZV糖蛋白抗原水平。优化抗体组合、抗体工作浓度...
目的:建立可快速检测水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白抗原水平的双抗体夹心ELISA法,并验证其特异性、线性、准确性和精密性。方法:采用抗VZV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测VZV糖蛋白抗原水平。优化抗体组合、抗体工作浓度、包被条件、封闭条件、酶标抗体反应条件和显色条件,并对建立的方法进行特异性、线性、准确性及精密性验证。结果:捕获抗体VZV-mAb-03和酶标抗体VZV-mAb-HRP-02的组合为最优双抗组合,其最适浓度分别为450.0和0.1μg·L^-1,最适包被条件为0.05 mol·L^-1 Tris-HCl(pH值为8.7±0.1)在4℃条件下包被过夜(18 h),最适封闭条件为1%牛血清白蛋白(BSA)在37℃条件下封闭2 h,最适样品稀释液为磷酸盐吐温缓冲液(PBST),抗原夹心与酶标抗体最适反应条件均为37℃、1 h,最适显色条件为37℃、15 min。经验证,该方法与其他人用疫苗及辅料成分无交叉反应;线性范围为500~2600 PFU·mL^-1,回归系数(R2)>0.95;批内回收率82.2%~115.7%,变异系数(CV)<10.2%;批间回收率80.5%~118.6%,板内CV<17.4%,板间CV<14.9%。结论:建立了一种基于检测双抗体夹心的VZV糖蛋白抗原水平的ELISA检测方法,符合定量检测需要,可用于VZV疫苗的研发和生产过程中的抗原水平检测。
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关键词
水痘-带状疱疹病毒
糖蛋白
双抗体夹心
酶联免疫吸附试验
变异系数
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职称材料
题名
检测水痘-带状疱疹病毒糖蛋白水平双抗体夹心ELISA法的建立和验证
被引量:
3
1
作者
朱琨莹
郭世杰
袁若森
潘东
张春
陈晓旭
衣延明
杨阳
郑柏松
姜春来
机构
吉林大学
第一医院艾滋病与病毒研究所
吉林大学
第一医院新生儿科
长春百克
生物
科技股份公司
吉林大学生命科学学院微生物免疫系
出处
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期1315-1323,共9页
基金
科技部国家科技重大专项基金资助课题(2018ZX10302104-001-010)
吉林省卫健委科研项目资助课题(20161J065)
吉林省分子病毒学重点实验室科研项目资助课题(20102209)。
文摘
目的:建立可快速检测水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白抗原水平的双抗体夹心ELISA法,并验证其特异性、线性、准确性和精密性。方法:采用抗VZV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测VZV糖蛋白抗原水平。优化抗体组合、抗体工作浓度、包被条件、封闭条件、酶标抗体反应条件和显色条件,并对建立的方法进行特异性、线性、准确性及精密性验证。结果:捕获抗体VZV-mAb-03和酶标抗体VZV-mAb-HRP-02的组合为最优双抗组合,其最适浓度分别为450.0和0.1μg·L^-1,最适包被条件为0.05 mol·L^-1 Tris-HCl(pH值为8.7±0.1)在4℃条件下包被过夜(18 h),最适封闭条件为1%牛血清白蛋白(BSA)在37℃条件下封闭2 h,最适样品稀释液为磷酸盐吐温缓冲液(PBST),抗原夹心与酶标抗体最适反应条件均为37℃、1 h,最适显色条件为37℃、15 min。经验证,该方法与其他人用疫苗及辅料成分无交叉反应;线性范围为500~2600 PFU·mL^-1,回归系数(R2)>0.95;批内回收率82.2%~115.7%,变异系数(CV)<10.2%;批间回收率80.5%~118.6%,板内CV<17.4%,板间CV<14.9%。结论:建立了一种基于检测双抗体夹心的VZV糖蛋白抗原水平的ELISA检测方法,符合定量检测需要,可用于VZV疫苗的研发和生产过程中的抗原水平检测。
关键词
水痘-带状疱疹病毒
糖蛋白
双抗体夹心
酶联免疫吸附试验
变异系数
Keywords
varicella zoster virus
glycoprotein
double antibody sandwich
enzyme linked immunosorbent assay
coefficient of variation
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
检测水痘-带状疱疹病毒糖蛋白水平双抗体夹心ELISA法的建立和验证
朱琨莹
郭世杰
袁若森
潘东
张春
陈晓旭
衣延明
杨阳
郑柏松
姜春来
《吉林大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2020
3
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