对长学制临床医学生进行病理学科研训练的实践探索

培养具有扎实的专业基础、一定的科研能力和熟练的专业实践能力的专业人才是医学教育的目标。长学制临床医学生，包括7年本硕连读及8年本博连读医学生，在校期间实行两阶段导师制。第一阶段：基础医学课程学习阶段，由基础老师担任导师，进行基础科研训练；第二阶段：临床医学课程及硕／博学习阶段，由临床硕士／博士导师指导完成硕／博课题。通过基础阶段的科研训练，学生们不仅具有初步的科研思维能力，还将为临床阶段科研项目的实施提供一个坚实的基础。

构建病理学研究生专业培训基础课的新型体系

随着医学科学的迅猛发展,短短的5年时间已经很难培养出高水平的医学人才,因而医学专业的本科生面临着就业压力大,分配困难等诸多问题,基于此,有相当一部分学生需要通过攻读研究生来提高其竞争能力,这对研究生培养提出了更高的要求,如何培养高素质、高水平的学术型/实用型人才是值得我们深入思考和亟待解决的一个问题。病理学是基础学科里的临床学科，近年来，病理学成为医学生考研的热门专业之一。因其独特的位于基础和临床之间的“桥梁”地位，其培养模式亦应当有别于其它基础学科，因而构建病理学研究生专业培训基础课的新型体系已成为当务之急。1病理学研究生培养现状分析医学研究生教育是继本科医学教育之后培养高层次医学专业人才的教育，其目标是培养具有扎实的专业基础、一定的科研能力和较强的实际工作能力的专业人才。

富血小板血浆提取方法的探讨

目的:比较不同离心和激活方法处理富血小板血浆(PRP)的效果。方法:1名健康志愿者、30名眼科住院患者静脉采血,分别用PCCSkit法,Curasan法及Trindade法制备PRP。ELISA检测各组血小板衍化生长因子(PDGF)、转化生长因子(TGF-β)、血管内皮细胞生长因子(VEGF),倒置相差显微镜观察PRP添加方式对人成骨样细胞MG63观察效果的影响。结果:Trindade离心法提取的PRP加CaCl2后,PDGF含量高于其他2种方法,PCCSkit法提取的PRP加CaCl2和凝血酶后,TGF-β含量高于其他2种方法,Curasan法提取的PRP加CaCl2后,VEGF浓度高于其他2种方法。3种离心方法中未激活和激活的PRP中生长因子浓度差异有显著性(P<0.05),激活组中CaCl2组和CaCl2加凝血酶组PRP中生长因子含量差异无显著性(P>0.05)。显微镜观察显示,PRP离心后的萃取液可去除RBC对MG63细胞观察效果的影响。结论:3种离心方法间无显著差异;低温、即刻提取PRP,用CaCl2或CaCl2加凝血酶激活均促进生长因子释放;PRP离心萃取液更有利于用于细胞培养中的镜下观察。

郁金防治急性缺氧小鼠脑损伤的机制

目的探讨郁金对急性缺氧小鼠脑损伤的保护作用及其机制。方法用郁金水煎剂低、中、高剂量(10、20、40 g/kg)连续灌胃6 d,利用常压密闭耐缺氧和断头实验复制小鼠急性缺氧模型,检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量;利用bcl-2、caspase-3抗体进行脑组织免疫组化染色。结果与模型组比较,各剂量组均能不同程度地提高缺氧小鼠脑组织SOD活性,减少其MDA和NO含量,使caspase-3蛋白表达下调而bcl-2表达上调。结论郁金水煎剂减轻急性缺氧小鼠脑组织损伤的机制可能与其减轻氧化应激损伤及抑制脑细胞凋亡有关。

富血小板血浆对人真皮细胞增殖及PDGF、TGF-β和VEGF表达的影响

目的:研究富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hFbs)增殖、分化及胞质中PDGF、TGF-β和VEGF表达量的影响。方法:2次离心法制备PRP,成骨诱导条件下hFbs培养液中加入不同浓度PRP于第12天、21天钙-钴法染色,第21天茜素红染色;免疫细胞化学法检测加不同浓度PRP后第4天细胞PDGF、TGF-β和VEGF的表达;碱性磷酸酶染色(ALP)检测细胞活性;CCK-8法检测有和无成骨诱导条件下不同浓度PRP对细胞增殖的影响。结果:茜素红染色显示,2.8%PRP组钙结节形成最明显;钙-钴法染色显示,2.8%PRP组矿化作用最强;免疫细胞化学结果表明PDGF表达存在剂量依赖性,TGF-β和VEGF表达虽无剂量依赖性,但有适宜浓度的要求;ALP染色表明3%PRP组细胞增殖明显,活性最强。CCK-8检测表明各浓度PRP对hFbs均有促增殖作用,PRP加成骨诱导组比单纯PRP组表现出更明显的促增殖作用,其中4.8%PRP促增殖作用最强。结论:适宜浓度的PRP可促进hFbs增殖,但相关因子的表达存在适宜浓度的要求,PRP通过促进细胞增殖,增加相关因子表达促进创伤愈合。

抑制葡萄糖调节蛋白78表达逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药机制的分析

目的探讨抑制葡萄糖调节蛋白78（GRP78）表达对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其在卵巢癌顺铂耐药中的作用和机制。方法构建特异性靶向GRP78的siRNA表达质粒，MTT法检测细胞生存率，逆转录多聚酶链链式反应和免疫印迹方法检测内质网应激相关、凋亡相关基因蛋白表达，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果顺铂（6mg／L）作用于SKOV3细胞诱导GRP78、CHOP和cleaved—caspase4表达均增高；作用于SKOV3／DDP细胞可诱导GRP78表达明显增高，但CHOP和cleaved—caspase4表达无明显差异。抑制GRP78表达与顺铂联合作用能明显增加SKOV3／DDP细胞cleaved—caspase4和3表达，增加细胞凋亡率。抑制SKOV3／DDP细胞GRP78表达，能降低顺铂诱导的p-Akt和p-mTOR表达上调，增加XBPlmRNA剪切表达和CHOPmRNA表达。结论抑制GRP78表达能与顺铂协同作用增加细胞凋亡的发生而逆转SKOV3／DDP细胞对顺铂的耐药性，其机制可能是通过影响Akt／mTOR信号通路的活性、CHOP表达水平和caspases活性导致的。

葡萄糖调节蛋白78在卵巢浆液性腺癌中的表达及其意义

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在卵巢浆液性腺癌中的表达及其意义。方法取临床手术切除标本卵巢浆液性肿瘤126例和正常卵巢组织30例，免疫组化、RT-PCR、Western blot方法检测人卵巢浆液性肿瘤和正常卵巢组织标本中GRP78 mRNA和蛋白表达。结果免疫组化结果显示：卵巢浆液性囊腺癌组织中GRP78阳性细胞的比例明显高于正常卵巢组织和卵巢浆液性囊腺瘤组织（P〈0．05），GRP78蛋白表达与卵巢浆液性囊腺癌组织患者病理分级、年龄和临床分期无关（P〉0．05）。RT-PCR法检测正常卵巢组织、卵巢浆液性囊腺瘤、卵巢浆液性囊腺癌GRP78mRNA表达（A）值分别为0．134±0．021、0．121±0．032、0．685±0．085；Western印迹法检测正常卵巢组织、卵巢浆液性囊腺瘤、卵巢浆液性囊腺癌GRP78蛋白A值分别为0．211±0．042、0．193±0．032、0．770±0．074。病理不同分级卵巢浆液性囊腺癌间GRP78 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论GRP78表达在卵巢的良性肿瘤与恶性肿瘤之间表达差异有统计学意义，在卵巢浆液性囊腺癌中高表达，与卵巢癌发生、发展相关。

内皮抑素

人体血管的形成通常是由正负调控因子的平衡决定的，正调控因子促进血管形成和生长，而负调控因子则起抑制作用。20世纪70年代初，Folkman在大量实验研究基础上提出了“新生血管是肿瘤持续生长的必要条件”这一观点，他认为体积在1～2mm3以下的肿瘤可通过渗透作用从周围组织中获得自身生长所需的营养物质，维持自身的生存。但肿瘤的进一步生长则需要依赖形成新生血管以获得充分的营养供应，一旦新生血管形成，肿瘤就开始迅速生长，变得更易发生浸润和转移。