组织学与胚胎学实验课中培养学生能力的教学尝试

本文就如何提高组织学与胚胎学实验课的教学质量、在实验中培养学生观察能力,分析问题的能力和运用知识的能力,逐渐建立和熟悉组织学与胚胎学的学习方法。在改进授课内容,活跃实验课气氛,激发学生学习的热情等方面谈几点体会。

八年制医学生胚胎学教学方法改革探讨

针对八年制医学生的特点,对胚胎学的教学方法进行了相应改革,提高了教学效果,主要有以下五个方面:运用多种资源,加深学生印象;广泛联系,激发学生兴趣;改变教学模式,锻炼学生能力;以人为本,培养学生素质;总结经验,完善考试制度。

组织学与胚胎学实验课中培养学生能力的教学尝试

本文就如何提高组织学与胚胎学实验课的教学质量、在实验中培养学生观察能力,分析问题的能力和运用知识的能力,逐渐建立和熟悉组织学与胚胎学的学习方法。在改进授课内容,活跃实验课气氛,激发学生学习的热情等方面谈几点体会。

食管癌组织中Survivin蛋白的表达及临床意义

目的探讨凋亡抑制蛋白Survivin在食管癌中的表达及其与临床病理参数的关系。方法应用免疫组织化学方法检测35例食管癌组织,5例正常食管部组织及12例癌旁组织中Survivin蛋白的表达。结果 35例食管癌标本100%呈现为Survivin阳性表达,而5例正常食管部组织及12例癌旁组织中仅1例Survivin呈弱阳性表达。Survivin阳性表达与食管癌组织学类型无明显相关。癌组织中Survivin细胞平均光密度与正常组织中存在显著性差异(P<0.05),正常组织中Survivin细胞平均光密度与癌旁组织无显著性差异(P>0.05)。结论 Survivin基因在食管癌组织中高表达可能通过抑制细胞凋亡而在食管癌的发生发展中发挥一定作用。

医学研究生免疫组化实验教学思考与探索

通过多次免疫组化(组织化学与免疫组织化学)实验课教学发现,提高教学效果、培养学生能力需关注以下四个方面:实验教学教师的认真备课;研究生实验习惯的培养;必不可少的预实验;完善的实验设施。

在胚胎发育中第三脑室室管膜细胞表达乙酰胆碱转移酶

目的在研究胚胎14天(E14)大鼠端脑放射状胶质细胞与胆碱能前体细胞的关系时发现,第三脑室室管膜细胞和侧脑室脉络丛上皮细胞均表达胆碱能神经元标志性蛋白,即乙酰胆碱转移酶(Choline acetyltransferase,ChAT)。方法E14大鼠端脑冠状连续切片,采用免疫组织化学染色法,分别对放射状胶质细胞标志性蛋白,即波形蛋白(Vi men-tin)和乙酰胆碱转移酶进行免疫组织化学染色。结果E14大鼠端脑室管膜细胞呈单层衬于第三脑室,在背中侧的室管膜细胞由单层增殖为复层。上皮基底部与邻近组织分界不清,这些细胞的游离面胞质呈乙酰胆碱转移酶免疫反应阳性,在邻近的第三脑室周围局部形成乙酰胆碱转移酶阳性细胞群。在相邻切片的同一区域内复层室管膜细胞波形蛋白免疫反应阴性。结论第三脑室背中侧室管膜细胞作为神经干细胞分裂、增殖,产生胆碱能前体细胞,并向第三脑室周围组织迁移,形成基底前脑神经核团的Ch5,Ch6胆碱能神经细胞群。

STAT3,mTOR,ERK1/2磷酸化在非小细胞肺癌中的表达

目的探讨检测信号传递与转录活化因子(STAT)3、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和细胞外信号调节激酶(ERK)1/2的磷酸化在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达。方法收集49例手术治疗的原发性NSCLC患者的病理组织及19例癌旁正常肺组织。免疫组化检测肺癌组织及癌旁组织中的STAT3,mTOR和ERK1/2蛋白磷酸化的表达,将结果及患者的临床基本信息及TNM分期、病理类型等因素的进行相统计学分析。结果在NSCLC中STAT3、mTOR和ERK1/2的磷酸化高表达。磷酸化的STAT3(p-STAT3)在鳞癌中的表达高于腺癌(P=0.001)。磷酸化的mTOR(p-mTOR)在存在淋巴结转移的肺癌组织中高表达(P=0.043)。本实验的肺癌组织中蛋白p-ERK1/2与p-STAT3、p-mTOR之间存在相关性(P=0.033,P=0.015)。结论 NSCLC的发生与STAT3、mTOR和ERK1/2的磷酸化表达有关。p-STAT3在鳞癌发病中意义更大。p-mTOR与淋巴结转移有关。p-ERK1/2与p-mTOR、p-STAT3在NSCLC中的表达存在正相关性。

急性大鼠脊髓损伤Allen's法模型的改良及电生理评价

目的建立一种更实用、标准、可靠的急性大鼠脊髓撞击损伤模型,为脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的进一步研究奠定基础。方法将36只成年雌性Wistar大鼠随机分成三组,每组12只。脊髓损伤(SCI)组:用自制改良的Allen’s撞击器,以60gcm致伤力损伤大鼠T10胸椎对应脊髓。假手术组:只打开椎板,暴露脊髓,不造成SCI。正常对照组:正常大鼠,不做任何处理。各组定期行为学观察(BBB评分),术后30天进行组织学观察和神经电生理检测。结果 HE染色:假手术组与正常对照组基本一致的。SCI组可见灰、白质组织结构不完整,损伤区可见大片坏死灶、细胞肿胀。BBB评分:假手术组术后1周功能恢复接近正常。SCI组术后第2周开始恢复,到第3周基本停止,最终BBB评分未超过6分,两组比较有明显差异。神经电生理(SEP,MEP)检测:SCI组可以明显看到SEP与MEP的峰-峰值急剧降低,且潜伏期明显延长,差异显著(P<0.01)。结论改良后的急性大鼠脊髓损伤模型制作法操作简便、重复性好,是较为理想的方法。

大鼠羊膜上皮细胞神经营养因子基因的表达

目的建立胚胎不同时期羊膜上皮细胞(AECs)表达脑源性神经营养因子(BDNF)与神经营养素-3(NT-3)mRNA的时相图,找出AECs分泌BDNF、NT-3的最佳时期。方法采用实时荧光定量PCR检测胚胎不同时期(11,13,17,21d)AECs中BDNF与NT-3 mRNA的表达差异。结果绘制出大鼠AECs中BDNF、NT-3的基因表达差异时程图:BDNF的表达随着胚胎发育持续上调,至17d达到最高,然后其表达开始下调;NT-3的表达在13d达到最高,然后开始下调。结论初步确定13～17d是大鼠AECs分泌BDNF、NT-3的最佳时期。

甲强龙、电针联合羊膜上皮细胞移植对损伤脊髓神经纤维再生及功能恢复的影响

目的：探讨甲强龙（MP）、电针与羊膜上皮细胞（AECs）移植联合治疗对脊髓损伤（SCI）后大鼠神经纤维再生和功能恢复的作用.方法：成年雌性Wistar大鼠随机分成5组,SCI对照组、甲强龙组、MP＋华佗夹脊穴电针组、MP＋电针＋AECs组和假手术组.各组术后30d神经丝蛋白行（NF）、5-羟色胺（5-HT）和降钙素基因相关肽（CGRP）免疫荧光组织化学观察以及神经电生理检测.结果：MP＋电针＋AECs组损伤区可见大量有序的NF、5-HT和CGRP阳性神经纤维,其中5-HT阳性纤维假手术组比例高于CGRP阳性纤维所占比例;神经电生理检测显示该组与其他损伤组比较感觉诱发电位与运动诱发电位的峰-峰值增加,潜伏期明显缩短,差异有统计学意义,其中运动诱发电位恢复程度优于感觉诱发电位.结论：甲强龙、电针联合AECs移植治疗脊髓损伤促进了神经纤维的再生和大鼠后肢功能的恢复.

小鼠骨髓及脾脏来源的树突状细胞培养及鉴定

目的建立体外培养和扩增树突状细胞(dendritic cell-DC)的方法,为免疫耐受研究提供实验材料和奠定基础。方法在无菌条件下提取ICR小鼠脾脏淋巴细胞和骨髓细胞,以小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL-4)协同诱导下培养,光镜下观察DC的形态,流式细胞仪检测CD80、CD86表达水平。结果骨髓细胞体外诱导培养3天后,光镜下显示细胞表面不规则,呈树突状突起,可见典型的树突状细胞形态,低表达共刺激分子(CD80,CD86)。结论与脾脏细胞相比,骨髓细胞中不仅富含大量的DC的前体细胞而且诱导成DC时间短。

人和动物生命质能方程和寿命曲线

目的探讨生命过程中能量的时间变化规律以及能量消耗与寿命长短的关系。方法依据成长衰老的特征以及爱因斯坦质能方程推导生命质能方程,计算生命各时点的能量进而推导寿命方程式。结果生命体在骨龄成熟点时具有的能量Eg=Wg.C2+△M可调.C2-(Kb+Kbp).(Wg+△M可调)-ES En。生命体的健康期望寿命TLife=Tg+〔Wg.C2+△M可调.C2-(Kb+Kbp).(Wg+△M可调)-ES-En-Wd.C2〕/Ka。当性欲耗能(ES)和高级活动耗能(En)趋近0时,Eg和TLife达到最大值。结论健康期望寿命与生长期、骨龄成熟时标准体重、性活动和高级生命活动密切相关。生长期越长,寿命越长。体重与寿命的关系并不是一个简单的正相关,增加体重会导致基础耗能和生存必须耗能增多,寿命反而缩短。

脉冲电刺激颈舌咽神经对大鼠的电刺激反应性和电致惊厥阈的影响

目的:观察颈舌咽神经脉冲电刺激对大鼠的电刺激反应性和电致惊厥阈的影响,阐明脉冲电刺激颈舌咽神经抗大鼠惊厥的有效性。方法:30只成年Wistar大鼠随机分为对照组、颈迷走神经电刺激组和颈舌咽神经电刺激观察组,每组各10只。对照组只行左侧颈部切开消毒处理,颈迷走神经电刺激组行左颈部迷走神经分离后脉冲电刺激,颈舌咽神经电刺激组行左颈部舌咽神经分离后脉冲电刺激。各组动物分别给予双侧耳缘电刺激,记录大鼠的电刺激反应性和电致惊厥阈。结果:与对照组比较,颈舌咽神经电刺激组大鼠嘶叫和发生强直阵挛的最小刺激电压显著提高(P<0.01),颈舌咽神经电刺激组与颈迷走神经电刺激组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:颈舌咽神经电刺激能提高大鼠的电刺激反应性和电致惊厥阈,有较好的抗惊厥作用。

日本刺沙蚕纤溶酶对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用

目的:观察日本刺沙蚕纤溶酶(NJF)对大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用,并探讨其作用机制。方法:60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、NJF组(0.25、0.50和1.00mg.kg-1)和尿激酶组(UK,15 000U.kg-1),每组10只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。术后24h,对大鼠进行神经功能损害评分,TTC染色计算脑梗死范围,湿重干重法测量脑含水量,化学比色法检测大鼠海马组织中丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与模型组比较,NJF各给药组大鼠神经功能损害评分明显降低(P<0.05);脑梗死范围显著降低(P<0.001),脑含水量下降(P<0.05或P<0.01),且脑缺血海马组织中MDA水平降低(P<0.001),同时SOD活性升高(P<0.05或P<0.01),具有明显的剂量依赖性。NJF0.50mg.kg-1组大鼠脑梗死范围和脑含水量变化与UK 15 000U.kg-1组比较差异无统计学意义。结论:NJF对大鼠缺血再灌注损伤大脑有潜在的神经保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化及提高内源性抗氧化酶活性有关。

肌基膜管植入对大鼠脊髓半横断损伤模型的血管化作用

目的:观察肌基膜管移植治疗大鼠脊髓损伤的血管生成情况,为在脊髓损伤中应用肌基膜管作为组织工程支架提供理论和实验依据。方法:利用冻融法将大鼠骨骼肌制备成肌基膜管,将其移植入大鼠脊髓半横断损伤模型中,分别于术后3、5、7、14和28 d取材,利用碱性磷酸酶染色观察各个时间点支架中血管生成情况,比较不同时间点(3、5、7、14和28 d)血管生成数量。结果:肌基膜管在移植入大鼠脊髓损伤区后,血管由脊髓和肌基膜管交界处长入肌基膜管内部,最终在肌基膜管内部形成血管网。新生血管面积比5 d组高于3 d组(P<0.05),7 d组高于5 d组(P<0.01),14 d组高于7 d组(P<0.01),28 d组高于14 d组(P<0.05或P<0.01)。结论:肌基膜管移植入大鼠脊髓半横断损伤模型中具有良好的血管化作用,有望成为修复脊髓损伤理想的组织工程材料。

甲强龙、电针联合AECs移植治疗脊髓损伤的实验研究

目的探讨甲强龙、电针与羊膜上皮细胞(amniotic epithelial cell,AECs)移植联合治疗,对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠下肢运动功能的影响。方法将60只成年雌性Wistar大鼠随机分成5组,每组12只。A组(SCI损伤对照):做SCI手术,不进行治疗;B组(甲强龙治疗):SCI后,用大量甲强龙药物冲击治疗,共3d;C组(MP+电针):B组基础上,SCI后4h,行华佗夹脊穴电针治疗;D组(MP+电针+AEC):C组基础上,SCI后第7天,在脊髓损伤处移植大鼠AECs;E组(假手术):只打开椎板,暴露脊髓,不造成SCI。各组定期行为学观察(BBB评分),术后30d行5-HT免疫荧光组织化学观察和神经电生理检测。结果 5-HT染色:D组损伤区可见大量有序的5-HT阳性神经纤维,与E组最接近;BBB评分:D组恢复最为明显,与其它治疗组比较差异显著;MEP检测:D组峰-峰值显著增加,潜伏期明显缩短,差异有统计学意义(P<0.01)。结论甲强龙、电针与AECs联合治疗脊髓损伤极大的促进了5-羟色胺能神经纤维的再生,对SCI大鼠后肢运动功能的恢复有明显的促进作用。

端脑发育中不同浓度骨形态发生蛋白4对同源域转录因子胰岛素基因增强子蛋白1表达的调节作用

目的:确定在端脑发育中同源域转录因子胰岛素基因增强子蛋白1的表达是否受骨形态发生蛋白4的调节,探讨胰岛素基因增强子蛋白1控制端脑腹侧胆碱能神经元发生的可能性。方法:实验于2005-03/2006-03在吉林大学白求恩医学院组织学与胚胎学教研室细胞培养室、免疫组织化学实验室和分子生物学实验室完成。①实验材料:清洁级Wistar大白鼠18只,雌性12只,体质量(220±10)g,雄性6只,体质量(250±10)g,按常规方法将雌雄大鼠合笼交配。②实验过程:采用胚胎16d大鼠端脑细胞无血清原代培养(为对照组);分别在培养液中加入终浓度为10,20和40μg/L骨形态发生蛋白4(为实验组)。③实验评估:细胞培养4d时,利用反转录-聚合酶链反应分析胰岛素基因增强子蛋白1mRNA含量是否随着骨形态发生蛋白4浓度变化而变化(β-肌动蛋白作为内参对照标准);同时对20μg/L骨形态发生蛋白4组和对照组实施免疫荧光细胞化学双重染色,以观察胆碱能神经元标志蛋白乙酰胆碱转移酶阳性细胞是否表达胰岛素基因增强子蛋白1。结果:①端脑细胞原代培养3,4d时,各组细胞均聚集成团贴壁生长,实验组与对照组相比细胞团较大,突起粗而长,相互连接成网。②实验组与对照组大多数乙酰胆碱转移酶阳性细胞复合表达胰岛素基因增强子蛋白1,两组间未见明显差异。③10μg/L骨形态发生蛋白4组与对照组相比胰岛素基因增强子蛋白1mRNA水平差异无显著性意义;20μg/L骨形态发生蛋白4可上调端脑胆碱能前体细胞胰岛素基因增强子蛋白1mRNA水平;40μg/L骨形态发生蛋白4可下调胰岛素基因增强子蛋白1mRNA水平。结论:在端脑培养体系中胆碱能前体细胞胰岛素基因增强子蛋白1mRNA水平随着骨形态发生蛋白4的浓度变化而变化,提示骨形态发生蛋白4可能与胰岛素基因增强子蛋白1共同作用控制端脑腹侧胆碱能神经元的发生。

羊膜上皮细胞移植对大鼠脊髓半横断损伤后神经再生的促进作用

目的:探讨羊膜上皮细胞(AECs)移植对大鼠脊髓半横断损伤后神经再生的影响,为AECs移植修复脊髓损伤(SCI)提供实验依据。方法:采用30只Wistar大鼠建立脊髓半横断损伤模型。损伤后分别进行明胶海绵加生理盐水移植(明胶海绵组)和明胶海绵加AECs移植(AECs移植组),同时设SCI模型组和假手术组作为对照。移植后2和4周,常规组织学方法观察移植物和脊髓组织结构;采用免疫荧光组织化学技术观察移植物和脊髓组织中神经丝蛋白(NF)阳性神经纤维、5-羟色胺(5-HT)能神经纤维、降钙素基因相关肽(CGRP)能神经纤维及神经胶质酸性蛋白(GFAP)阳性细胞。采用荧光红顺行示踪技术观察移植后脊髓神经纤维恢复情况;BBB功能评分方法评价移植后大鼠后肢运动功能恢复情况。结果:AECs移植可促进脊髓本身神经纤维的再生,并促进了NF、5-HT和CGRP神经纤维的再生,再生的神经纤维可穿过GFAP阳性区域进入移植物中,AECs移植组移植物中NF阳性神经纤维数明显多于明胶海绵组(P<0.05)。AECs移植组、明胶海绵组及SCI模型组BBB评分与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05),而AECs移植组与明胶海绵组和SCI模型组BBB评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:AECs移植可促进SCI后神经纤维的再生。